Name: Dokładny i prosty pomiar cytokiny prozapalnej IL-1β za pomocą testu stymulacji krwi pełnej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-01T18:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Poznaj metodę pomiaru cytokin prozapalnych IL-1β w stymulowanej krwi pełnej z użyciem LPS. Technika ta umożliwia szybką ocenę poziomów cytokin u różnych dawców i diagnozowanie chorób autoinflamacyjnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badania te były wspierane przez Wewnętrzny Program Badawczy Narodowego Instytutu Chorób Stawów, Układu Kostno-Mięśniowego i Chorób Skóry Narodowych Instytutów Zdrowia.

1. Pobieranie krwi pełnej
<ol>
	<li>Należy pobrać minimum 10 mL krwi obwodowej od osób chorych oraz od zdrowych kontroli dobranych pod względem wieku i płci. Krew żylną należy pobrać do probówek vacutainer z heparyną sodową, zamiast stosować inne przeciwkrzepliwe środki, takie jak EDTA, a następnie kilkukrotnie odwrócić probówki, aby zapewnić prawidłowe wymieszanie krwi z heparyną sodową. Należy pamiętać, że 10 mL to minimalna objętość krwi pełnej wymagana do naniesienia próbek w duplikacie dla tego konkretnego testu.</li>
	<li>W celu uzyskania najlepszych wyników próbki powinny zostać przetworzone tak szybko, jak to możliwe po pobraniu. Niemniej jednak krew heparynowana może być przechowywana w temperaturze pokojowej, przy słabym oświetleniu, do 24 godzin do momentu rozpoczęcia przetwarzania (2).</li>
</ol>
2. Przygotowanie krwi pełnej
<ol>
	<li>Wszystkie próbki krwi odwiruj przy 3000 rpm (z wyłączonym hamulcem) przez dziesięć minut w temperaturze pokojowej. Bez naruszania warstwy leukocytów (buffy coat), z góry można zebrać osocze i przechowywać je do innych celów eksperymentalnych. Próbki osocza można przechowywać tymczasowo w temperaturze -20°C lub długoterminowo w -80°C</li>
	<li>Po zebraniu osocza przemyj próbki, resuspendując pellet erytrocytów (RBC) oraz warstwę leukocytów w pożywce RPMI 1640 bez surowicy (niepełnej) (w temperaturze otoczenia). Delikatnie wymieszaj zawiesinę w probówkach zbiorczych za pomocą pipety i przenieś do stożkowej probówki o pojemności 50 mL.</li>
	<li>Uzupełnij objętość do 50 mL niepełną pożywką hodowlaną RPMI 1640 i delikatnie odwróć probówki, aby uzyskać jednorodną mieszaninę. Odwiruj próbki przy 3000 rpm (z wyłączonym hamulcem) przez dziesięć minut. Upewniając się, że nastąpiło wyraźne rozdzielenie, odessaj nadsącz, uważając, aby nie naruszyć warstwy leukocytów. Powtórz tę procedurę 2-4 razy, aby upewnić się, że wszystkie zanieczyszczenia i związane cytokiny zostały usunięte przed stymulacją.</li>
	<li>Po ostatnim przemyciu resuspenduj pellet erytrocytów i warstwę leukocytów w niepełnej pożywce RPMI 1640 tak, aby całkowita objętość wyniosła 20 mL (dla początkowo pobranej objętości 10 mL krwi pełnej). Całkowitą objętość można dostosować w zależności od objętości krwi pobranej na początku.</li>
	<li>Używając Cellometer Vision, można policzyć rozcieńczoną krew bez lizy erytrocytów, wybierając opcję zliczania białych krwinek z użyciem pomarańczowej akrydyny (AO). Połącz jedną część rozcieńczonej krwi z jedną częścią AO i nanieś 20 μL mieszaniny 1:1 do jednorazowej komory zliczającej. Końcowe stężenie AO po rozcieńczeniu powinno wynosić 1 μg/mL.</li>
	<li>Dostosuj odpowiednio niepełną pożywką RPMI 1640 do końcowego stężenia komórek 2.0 x 106 cells/mL.</li>
</ol>
3. Stymulacja krwi pełnej
<ol>
	<li>Test wymaga zastosowania co najmniej czterech warunków (każdy wykonany w dubletach): brak stymulacji, dodatek samego LPS, dodatek samego ATP oraz dodatek LPS i ATP jednocześnie. Do odpowiedniej studni 24-dołkowej płytki do hodowli tkankowej należy dodać 1 mL przygotowanej krwi pełnej rozcieńczonej do stężenia 2.0 x 106 komórek/mL.</li>
	<li>Stymulatory należy zrekonstytuować i doprowadzić do temperatury pokojowej przed rozpoczęciem testu stymulacyjnego. Liofilizowany LPS i ATP należy zrekonstytuować zgodnie z instrukcjami producenta. Po rekonstytucji LPS i ATP można dodatkowo rozcieńczyć do odpowiedniego stężenia roztworu zapasowego, używając niepełnego medium RPMI 1640.</li>
	<li>Dodaj LPS do studni z samym LPS oraz do studni z LPS i ATP w taki sposób, aby końcowe stężenie robocze LPS wynosiło 1 μg/mL. Całkowity czas stymulacji wynosi 3 godziny. Jednak krew pełna jest stymulowana LPS przez 2 godziny i 40 minut. Próbki należy umieścić w inkubatorze w temperaturze 37°C i 5% CO2.</li>
	<li>ATP dodaje się podczas pozostałych 20 minut 3-godzinnego okresu stymulacji. Dodaj ATP do studni z samym ATP oraz do studni z LPS i ATP, a następnie umieść próbki w inkubatorze. Końcowe stężenie robocze ATP wynosi 2mM.</li>
	<li>Po 3-godzinnym okresie inkubacji należy zebrać nadsączniki, przenosząc każdą próbkę do probówki do mikrocentryfugi o pojemności 1.5 mL, a następnie wirując próbki przy 10000 rpm przez 2 minuty w temperaturze pokojowej. Nadsączniki należy przenieść do innego zestawu probówek do mikrocentryfugi 1.5 mL.</li>
	<li>Próbki można poddać natychmiastowej analizie lub przechowywać tymczasowo w -20°C bądź w -80°C w przypadku przechowywania długoterminowego.</li>
</ol>
4. Analiza cytokin
<ol>
	<li>Próbki zamrożone muszą osiągnąć temperaturę pokojową przed przystąpieniem do analizy. Stężenia cytokin dla IL-1β można oceniać za pomocą różnych metod. W niniejszej pracy wykorzystujemy zestaw Bio-plex Pro human cytokine x-plex assay wraz z systemem Bio-Plex 200, zgodnie z instrukcjami producenta. W tym protokole mierzymy konkretnie IL-1β; korzystamy jednak z tego multipleksowego testu cytokinowego, aby jednocześnie oznaczać wiele cytokin w jednym badaniu, co pozwala na zastosowanie małej objętości próbki.</li>
</ol>
5. Reprezentatywne wyniki
Analiza produkcji IL-1β po skutecznej stymulacji LPS i ATP wykazuje odpowiedź dawkową zależną od liczby stymulowanych komórek. Ustaliliśmy, że stężenie 2.0 x 106 komórek/mL jest wystarczające do uzyskania optymalnego i mierzalnego stężenia IL-1β oraz innych cytokin (Rycina 2).
Analizy krwi pełnej są przydatne w badaniu pacjentów wykazujących objawy autozapalne. U pacjentów tych może występować defekt wrodzonego układu odpornościowego, który charakteryzuje się nadprodukcją IL-1β (w porównaniu z grupą kontrolną) po stymulacji samym LPS (Rysunek 3).
<img src="/files/ftp_upload/2662/2662fig1.jpg" alt="Obraz z mikroskopii fluorescencyjnej przedstawiający analizę lokalizacji białek; zielona fluorescencja wskazuje cel." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1. Reprezentatywny obraz barwienia AO leukocytów jądrowych, wykorzystany w celu określenia stężenia komórek w rozcieńczonych próbkach krwi pełnej.
<img src="/files/ftp_upload/2662/2662fig2.jpg" alt="Wykres słupkowy poziomów IL-1β w zależności od stężenia komórek po stymulacji LPS i ATP, dane w pg/mL." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2. Produkcja IL-1β mierzona w supernatantach krwi pełnej od zdrowego dawcy po stymulacji LPS przy zwiększających się stężeniach komórek. Próbki analizowano w trzech powtórzeniach.
<img src="/files/ftp_upload/2662/2662fig3.jpg" alt="Poziomy IL-1β w stymulowanych ludzkich komórkach; wykres słupkowy porównujący odpowiedź na LPS, ATP oraz LPS+ATP." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3. Reprezentatywne wyniki wydzielania IL-1β zmierzonego w nadsączach z krwi pełnej od dwóch zdrowych osób kontrolnych, a także od dwóch pacjentów z autoinflamacyjnymi objawami związanymi z IL-1β.

<ol><li>Martinon, F., Mayor, A., Tschopp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammasomes%3A+guardians+of+the+body%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The inflammasomes: guardians of the body.</a> Annu Rev Immunol. 27, 229-265 (2009).</li>
<li>Thurm, C. W., Halsey, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cytokine+production+using+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Measurement of cytokine production using whole blood.</a> Curr Protoc Immunol. 66, 7-18 Forthcoming.</li>
<li>Mariathasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopyrin+activates+the+inflammasome+in+response+to+toxins+and+ATP%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cryopyrin activates the inflammasome in response to toxins and ATP.</a> Nature. 440, 228-232 (2006).</li>
<li>Gabay, C., Lamacchia, C., Palmer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1+pathways+in+inflammation+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">IL-1 pathways in inflammation and human diseases.</a> Nat Rev Rheumatol. 4, 232-241 (2010).</li>
<li>Franchi, L., Elgenbrod, T., Muñoz-Planillo, R., Nuñez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammasome%3A+a+caspase-1-activation+platform+that+regulates+immune+responses+and+disease+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The inflammasome: a caspase-1-activation platform that regulates immune responses and disease pathogenesis.</a> Nat Immunol. 3, 241-247 (2009).</li>
<li>Sims, J. E., Smith, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+IL-1+family%3A+regulators+of+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The IL-1 family: regulators of immunity.</a> Nat Rev Immunol. 2, 89-102 (2010).</li>
<li>Haug, R., Joø, G. B., Westvik, A. B., Kierulf, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokine+production+and+pattern+recognition+receptor+%28PRR%29+expression+in+whole+blood+stimulated+with+pathogen-associated+molecular+patterns+%28PAMPs%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Chemokine production and pattern recognition receptor (PRR) expression in whole blood stimulated with pathogen-associated molecular patterns (PAMPs.</a> Cytokine. 32, 304-315 (2005).</li>
<li>Netea, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+requirement+for+the+activation+of+the+inflammasome+for+processing+and+release+of+IL-1bin+monocytes+and+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Differential requirement for the activation of the inflammasome for processing and release of IL-1bin monocytes and macrophages.</a> Blood. 113, 2324-2335 (2009).</li>
<li>Latz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammasomes%3A+mechanisms+of+activation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immnol%22%5BJournal%5D)">The inflammasomes: mechanisms of activation and function.</a> Curr Opin Immnol. 22, 28-33 (2010).</li>
<li>Masters, S. L., Simon, A., Aksentijevich, I., Kastner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horror+autoinflammaticus%3A+the+molecular+pathophysiology+of+autoinflammtory+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Horror autoinflammaticus: the molecular pathophysiology of autoinflammtory disease.</a> Annu Rev Immunol. 27, 621-668 (2009).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano konfliktów interesów.

Opisany test z krwi pełnej jest prostą metodą, która w większym stopniu naśladuje warunki fizjologiczne w porównaniu z innymi technikami wymagającymi izolacji komórek oraz rozległego przetwarzania i manipulowania próbkami. Metoda ta wykorzystuje urządzenie Cellometer Vision z barwnikiem AO do zliczania leukocytów w krwi pełnej, a zatem umożliwia dokładną standaryzację próbek w oparciu o liczbę komórek.
Należy zauważyć, że w przypadku tego testu krew pełną należy pobierać do probówek z heparyn...

<table><tbody><tr><td>Probówki do pobierania krwi z heparyną sodową</td><td>BD Biosciences</td><td>366480</td><td></td></tr><tr><td>Pożywka RPMI 1640</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>21870-100</td><td></td></tr><tr><td>Pomarańcz akrydynowy</td><td>Invitrogen</td><td>A3568</td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Vision</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td></td><td>Skontaktuj się z firmą w celu uzyskania informacji o urządzeniu</td></tr><tr><td>Komory do liczenia komórek Cellometer</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>CHT4-SD100</td><td></td></tr><tr><td>24-dołkowa płytka do hodowli tkanek</td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Pure &lt;em&gt;E. coli&lt;/em&gt; K12 LPS</td><td>Invitrogen</td><td>tlrl-eklps</td><td></td></tr><tr><td>Hydrat soli sodowej 5&amp;#180;-trifosforanu adenozyny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A26209</td><td></td></tr><tr><td>System Bio-plex 200</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>Skontaktuj się z firmą w celu uzyskania informacji o urządzeniu</td></tr><tr><td>Test Bio-Plex Pro human cytokine x-plex</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>Testy x-plex są wykonywane na zamówienie zgodnie z określonymi cytokinami zainteresowania</td></tr></tbody></table>

dokładny i prosty pomiar cytokiny prozapalnej il-1&beta; z wykorzystaniem testu stymulacji krwi pełnej

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Procesy zapalne wynikające z wydzielania rozpuszczalnych mediatorów przez komórki odpornościowe prowadzą do różnych manifestacji w skórze, stawach i innych tkankach, a także do zaburzeń homeostazy cytokin. Wrodzony układ odpornościowy odgrywa kluczową rolę w rozpoznawaniu patogenów oraz innych endogennych bodźców zagrożenia. Jedną z głównych cytokin uwalnianych przez komórki odporności wrodzonej jest interleukina (IL)-1. W związku z tym wykorzystujemy test stymulacji krwi pełnej w celu pomiaru wydzielania cytokin zapalnych, a w szczególności prozapalnej cytokiny IL-1β 1, 2, 3.
Pacjenci z dysfunkcjami genetycznymi wrodzonego układu odpornościowego wywołującymi zespoły autozapalne wykazują nadmierne uwalnianie dojrzałej IL-1β po stymulacji samym LPS. Aby ocenić komponent wrodzonej odpowiedzi odpornościowej u pacjentów z patologiami związanymi ze stanami zapalnymi, stosujemy specyficzny test immunoologiczny do wykrywania komórkowych odpowiedzi immunologicznych na wzorce molekularne związane z patogenami (PAMPs), takie jak endotoksyna bakterii gram-ujemnych, lipopolisacharyd (LPS). PAMPs te są rozpoznawane przez receptory rozpoznające patogeny (PRRs), które znajdują się na komórkach wrodzonego układu odpornościowego 4, 5, 6, 7. Do aktywacji inflamasomu, czyli wielobiałkowego kompleksu przetwarzającego pro-IL-1β do jego dojrzałej, bioaktywnej formy, niezbędny jest sygnał pierwotny, LPS, w połączeniu z sygnałem wtórnym, ATP 4, 5, 6, 8, 9, 10.
Analiza krwi pełnej wymaga minimalnej manipulacji próbkami w celu oceny produkcji cytokin w porównaniu z innymi metodami, które wymagają pracochłonnej izolacji i hodowli specyficznych populacji komórek. Metoda ta różni się od innych testów stymulacji krwi pełnej; zamiast rozcieńczać próbki w określonym stosunku do pożywki RPMI, wykonujemy pomiar liczby białych krwinek bezpośrednio z rozcieńczonej krwi pełnej, a w konsekwencji stymulujemy znaną liczbę leukocytów w hodowli 2. Wyniki tej konkretnej analizy krwi pełnej demonstrują nową technikę użyteczną w charakteryzowaniu kohort pacjentów prezentujących autozapalne patofizjologie.

Opisujemy prosty test immunoenzymatyczny służący do pomiaru produkcji cytokin prozapalnych, takich jak IL-1 beta, u pacjentów prezentujących fenotypy autozapalne. Poprzez aktywację komórek w hodowlach krwi pełnej za pomocą wzorców molekularnych związanych z patogenami, a konkretnie lipopolisacharydu, wydzielanie cytokin można w wygodny sposób ocenić w nadsączach krwi pełnej.

Dokładny i prosty pomiar cytokiny prozapalnej IL-1&beta; z wykorzystaniem testu stymulacji krwi pełnej

Procesy zapalne wynikające z wydzielania rozpuszczalnych mediatorów przez komórki odpornościowe prowadzą do różnorodnych manifestacji w skórze, stawach i innych tkankach ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest pomiar cytokin prozapalnych produkowanych w teście stymulacji krwi pełnej. W pierwszej kolejności składniki komórkowe krwi pełnej są izolowane z osocza poprzez wirowanie, a następnie liczba białych krwinek jest wyznaczana przy użyciu barwienia acydyną pomarańczową. Następnie komórki są wysiewane i stymulowane LPS w celu wywołania produkcji cytokin przez komórki posiadające receptory rozpoznające wzorce mikrobiologiczne. Nadnadiny z hodowli są następnie zbierane w określonych punktach czasowych po rozpoczęciu stymulacji.Na koniec stężenia cytokin w supernatantach mierzy się za pomocą testu multipleksowego na płytce 96-dołkowej. Dzięki tej prostej metodzie można szybko ocenić zmienność stężeń cytokin prozapalnych produkowanych przez stymulowane komórki pochodzące od różnych dawców. Metoda ta jest szczególnie użyteczna w identyfikacji chorób zapalnych o podłożu cytokinowym u pacjentów wykazujących patologiczne objawy przeciwzapalne, zwłaszcza w sytuacjach, gdy dostępna objętość krwi jest ograniczona.Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami pomiaru stężeń cytokin jest to, że technologia oparta na systemie Luminex umożliwia

accurate-simple-measurement-pro-inflammatory-cytokine-il-1-using

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Dokładne i proste pomiar cytokiny prozapalnej IL-1β przy użyciu testu stymulacji krwi pełnej

Ten film demonstruje ilościowe określanie mediatorów stanu zapalnego podczas infekcji poprzez inkubację ludzkich komórek odpornościowych pochodzących z tkanki płucnej z Haemophilus influenzae. Cytometria przepływowa służy do pomiaru fluorescencji cytokin w znakowanych limfocytach, korelującej z produkcją cytokin prozapalnych w odpowiedzi na infekcję bakteryjną.

Kwantyfikacja mediatorów stanu zapalnego w zakażonych komórkach pochodzących z tkanek ludzkich

Ten film pokazuje ilościowe określenie poziomów mediatorów immunologicznych w ekstrakcie z błony śluzowej nosa u noworodków. System testów multipleksowych oparty na elektrochemiluminescencji mierzy te mediatory, oceniając intensywność emitowanego światła, gdy są one wzbudzone.

Kwantyfikacja poziomów mediatorów immunologicznych w płynie z błony śluzowej człowieka

Komórki dendrytyczne (DC) wydzielają IL-1β w odpowiedzi na rozpoznanie TLR8 syntetycznej puryny, R848, a następnie aktywację inflamasomu NLRP3 nigerycyną, dlatego IL-1β może być użyty do pomiaru aktywności inflamasomu NLRP3. Barwienie cytokin wewnątrzkomórkowych, immunoblotting i ELISA służą do dokładnego pomiaru pobudzania i aktywacji inflamasomu NLRP3 poprzez ekspresję IL-1β.

Aktywacja i pomiar aktywności inflamasomu NLRP3 za pomocą IL-1β w ludzkich komórkach dendrytycznych pochodzących z monocytów

Analiza cytokin filmu łzowego pomaga w badaniu różnych chorób oczu. Testy multipleksowe oparte na kulkach są proste i czułe oraz umożliwiają testowanie wielu celów w próbkach o małych objętościach. W tym miejscu opisujemy protokół profilowania cytokin filmu łzowego za pomocą testu multipleksowego opartego na kulkach.

Test multipleksowy oparty na kulkach do analizy profili cytokin łzowych

Ten protokół opisuje kwantyfikację wielu celów cytokin jednocześnie w supernatantach hodowli tkankowej pobranych ze stymulowanych mysich splenocytów przy użyciu platformy testów immunologicznych opartych na multipleksie i cytometru przepływowego.

Multipleksowe profilowanie cytokin stymulowanych splenocytów myszy przy użyciu cytometrycznej platformy testów immunologicznych opartych na kulkach

Tutaj prezentujemy protokół opisujący rozwój i walidację cyfrowego testu ELISA z pojedynczą matrycą molekuł, który umożliwia ultraczułe wykrywanie wszystkich podtypów IFN-α w próbkach ludzkich.

Opracowanie i walidacja ultraczułego, cyfrowego testu immunoenzymatycznego z pojedynczą matrycą cząsteczek dla ludzkiego interferonu-α

Tutaj opisujemy proteomiczne podejście pojedynczej komórki do oceny immunologicznych zmian fenotypowych i funkcjonalnych (indukcja cytokin wewnątrzkomórkowych) w próbkach krwi pełnej z obwodu, analizowanych za pomocą cytometrii masowej.

Jednokomórkowa analiza immunofenotypu i produkcji cytokin w obwodowej krwi pełnej za pomocą cytometrii masowej

Użycie referencyjnych odczynników do testów uwalniania cytokin pozwala na bardziej powtarzalne i standaryzowane profile bezpieczeństwa in vitro immunoterapeutycznych przeciwciał monoklonalnych. W tym miejscu opisujemy, w jaki sposób testy uwalniania cytokin mogą być stosowane wraz z referencyjnym panelem odczynników do przewidywania bezpieczeństwa niektórych terapeutycznych przeciwciał monoklonalnych.

Stosowanie odczynników referencyjnych w celu potwierdzenia odporności testów uwalniania cytokin w celu przewidywania bezpieczeństwa przeciwciał monoklonalnych

Protokół opisuje zaawansowaną platformę mikroprzepływową do ilościowego pomiaru dynamiki wydzielania cytokin w pojedynczych ludzkich komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej. Platforma mierzy równolegle do trzech cytokin (IL-6, TNFα i IL-1β) dla każdej pojedynczej komórki stymulowanej lipopolisacharydem, na przykład.

Podejście mikroprzepływowe do rozwiązywania jednoczesnego i sekwencyjnego wydzielania cytokin w poszczególnych komórkach wielofunkcyjnych

Testy immunologiczne oparte na krwi pełnej dostarczają łatwego i zasobooszczędnego narzędzia do analizy odporności specyficznej dla antygenu do celów diagnostycznych i badawczych. W tym artykule przedstawiono zoptymalizowany protokół oparty na krwi pełnej z podwójną kostymulacją do kompleksowej analizy odporności gospodarza na patogeny grzybowe i wirusowe, w tym wersję o małej objętości dla pacjentów pediatrycznych i małych zwierząt.

Test krwi pełnej z podwójną kostymulacją do specyficznej dla antygenu analizy odporności gospodarza na patogeny grzybowe i wirusowe

Poznaj metodę pomiaru cytokin prozapalnych IL-1β w stymulowanej krwi pełnej z użyciem LPS. Technika ta umożliwia szybką ocenę poziomów cytokin u różnych dawców i diagnozowanie chorób autoinflamacyjnych.

Dokładny i prosty pomiar cytokiny prozapalnej IL-1β z wykorzystaniem testu stymulacji krwi pełnej

Przeglądaj więcej filmów