JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:53 min. • April 30th, 2023
Receptory kwasu foliowego to glikoproteiny związane z błoną, których nadekspresja występuje w większości komórek raka jajnika. Wykorzystanie tych receptorów pozwala na ukierunkowane dostarczanie nanocząstek diagnostycznych do komórek nowotworowych.
Rozpocznij od zawiesiny pożądanych koniugatów nanocząsteczkowych środków kontrastowych z kwasem foliowym. Dodać tę zawiesinę nanocząsteczek do przylegającej hodowli komórek raka jajnika. Inkubuj kulturę przez żądany okres czasu.
Kwas foliowy funkcjonalizowany do nanocząsteczek pomaga rozpoznać receptory kwasu foliowego ulegające ekspresji na komórkach rakowych, promując selektywne wiązanie koniugatów nanocząstek z komórkami. Następnie błona plazmatyczna wnika w nią, ułatwiając wychwyt komórkowy i akumulację nanocząstek.
Zbierz komórki rakowe. Następnie odwirować w celu oddzielenia komórek od supernatantu zawierającego jakiekolwiek niezwiązane nanocząstki. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki zawierające nanocząstki w odpowiednim buforze do dalszych zastosowań.
Najpierw wymieszaj nanocząstki siarczku miedzi pokryte kwasem foliowym w odpowiednim stężeniu w świeżych pożywkach RPMI. Dodaj ten roztwór nanocząstek do każdego dołka przygotowanej 24-dołkowej płytki, która zawiera komórki SKOV-3 w stężeniu 400 mikrogramów na mililitr. Inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 5% dwutlenkiem węgla przez dwie godziny.
Następnie trypsynizuj komórki za pomocą 0,5 mililitra 0,25% trypsyny i EDTA. Aby zneutralizować trypsynę, dodaj co najmniej 1 mililitr kompletnej pożywki wzrostowej RPMI 1640 bez kwasu foliowego i odwiruj komórki przy 123 x g przez sześć minut. Aby umyć komórki, usuń supernatant.
Ponownie zawiesić komórki w 2 mililitrach PBS i wirować przy 123 x g przez sześć minut. Powtórz ten krok prania dwukrotnie, aby usunąć wszelkie niezwiązane nanocząsteczki.
Następnie ponownie zawieś ogniwa za pomocą 1 do 2 mililitrów 2% roztworu Tween w PBS. Policz komórki za pomocą hemocytometru i błękitu trypanowego. Rozcieńczyć komórki w roztworze 2% Tween i PBS do wybranego stężenia w celu wykrycia.