Izolacja mitochondriów: technika izolowania mitochondriów od próbki tkanki ludzkiego raka jajnika
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:09 min. • April 30th, 2023
Mitochondria, organelle cytoplazmatyczne znane jako elektrownie komórki, ulegają drastycznym zmianom strukturalnym i funkcjonalnym podczas progresji raka.
Aby wyizolować mitochondria, weź czystą tkankę rakową do szklanego naczynia i zmiel ją na małe kawałki. Przenieść kawałki do probówki zawierającej bufor izolacyjny mitochondriów. Homogenizować próbkę, aby rozbić komórki i uwolnić ich zawartość, w tym organelle.
Odwirować mieszaninę z niską prędkością. Powoduje to granulowanie gęstszych składników, takich jak jądra, szczątki tkanek i wszelkie nienaruszone komórki, pozostawiając mniej gęste składniki, takie jak mitochondria, mikrosomy, peroksysomy i lizosomy w supernatancie. Zebrać supernatant i odwirować z dużą prędkością. Mikrosomy, będące stosunkowo lżejsze, pozostają w supernatancie, podczas gdy surowa frakcja zawierająca mitochondria granuluje się na dole.
Usunąć supernatant i ponownie zawiesić osad w podłożu o odpowiednim gradiencie gęstości. Ustaw nieciągły gradient gęstości, nakładając surową frakcję mitochondrialną na podłoża o różnej gęstości, układając je w malejącej kolejności gęstości od dołu do góry. Wirować z bardzo dużą prędkością. Organelle oddzielają się w probówc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych