$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Mikronośniki to sferyczne matryce nośne o rozmiarach mikronów z połączonymi porami, które zapewniają ekspansywną powierzchnię do przyczepiania i wzrostu komórek.
Aby wytworzyć macierz zewnątrzkomórkową lub mikronośniki pochodzące z ECM, należy rozpocząć od jednolitej zawiesiny drobno sproszkowanego ECM. Zawiesinę należy umieścić w strzykawce podłączonej do zestawu do infuzji. Zabezpieczyć strzykawkę na pompie strzykawkowej. Umieścić igłę pionowo nad kolbą kriogeniczną w odpowiedniej odległości.
Teraz podłącz igłę do dodatniego zacisku źródła zasilania wysokiego napięcia. Przymocuj złożony pasek folii aluminiowej do krawędzi kolby i podłącz go do zacisku uziemiającego, aby zakończyć obwód.
Następnie napełnij ciekły azot w kolbie z zanurzonym wewnętrznym końcem paska aluminiowego. Zastosuj żądane napięcie i ustaw pompę strzykawkową na odpowiednie natężenie przepływu, aby rozpocząć elektronatryskiwanie. Gdy przewodząca zawiesina ECM wyłania się z końcówki igły, jej kształt odkształca się pod wpływem pola elektrycznego i napięcia powierzchniowego, tworząc spiczasty stożek cieczy.
Wraz ze wzrostem napięcia zawieszenie wystrzeliwuje. To ostatecznie rozpada się na naładowane mniejsze kropelki i wpada do kąpieli ciekłego azotu. Ciekły azot natychmiast zamraża mikrokropelki, krystalizując znajdujące się w nich cząsteczki rozpuszczalnika.
Przenieś zamrożone mikrokropelki do świeżej probówki. Liofilizować próbkę. Ten etap pomaga usunąć zamrożone cząsteczki rozpuszczalnika z próbki, generując w ich miejscu pory. Przechowuj suchy proszek porowatych mikronośników do dalszych zastosowań.
Inkubować kriomieloną zawiesinę ECM z ciągłym mieszaniem przy 100 obr./min przez noc. Załadować 3 mililitry zawiesiny ECM do 3-mililitrowej strzykawki Luer-Lock i przymocować skrzydełkowy zestaw infuzyjny do otworu strzykawki. Zabezpieczyć strzykawkę w pompie strzykawkowej. Następnie przymocuj igłę do stojaka na retortę i ustaw końcówkę igły pionowo w odległości od 4 do 6 centymetrów od górnej części niskiej kolby Dewara.
Następnie przymocuj elektrodę zacisku krokodylkowego do końcówki igły, upewniając się również, że zacisk krokodylkowy jest podłączony do dodatniego zacisku zasilacza wysokiego napięcia. Zawiń pasek folii aluminiowej przez krawędź kolby próżniowej. Następnie przymocuj drugą elektrodę krokodylkową do zewnętrznej krawędzi folii. Podłącz go do zacisku źródła uziemienia zasilacza.
Napełnij kolbę Dewara ciekłym azotem na około 1 centymetr od góry, tak aby trzy czwarte folii było zanurzone. Następnie ustaw pompę strzykawkową na szybkość infuzji 30 mililitrów na godzinę i rozpyl próbki elektronatryskiem zgodnie z protokołem tekstowym. Po zakończeniu naparu ostrożnie wylej nadmiar ciekłego azotu z Dewara, pozostawiając mikronośnik zawieszony w około 25 mililitrach ciekłego azotu, aby upewnić się, że pozostaną zamrożone.
Natychmiast przenieś mikronośniki z ciekłym azotem do 50-mililitrowej probówki wirówkowej, wlewając jednym płynnym ruchem. Następnie użyj czerpaka, aby zebrać wszelkie zamrożone mikronośniki pozostałe w Dewarze. Dodaj je do probówki wirówkowej. Aby przygotować się do liofilizacji, przykryj probówkę wirówkową folią aluminiową perforowaną z małymi otworami. Umieścić zakryte probówki wirówkowe w kolbie liofilizatora. Następnie natychmiast podłączyć kolbę do liofilizatora i wysuszyć próbki przez noc.