Ładowanie kulek w celu wprowadzenia kwasów nukleinowych do przylegających komórek hodowlanych: technika ładowania plazmidów kodujących białka fluorescencyjne do przylegających komórek ssaków

Zacznij od hodowli przylegających komórek ssaków na płytce hodowlanej. Przenieś wysterylizowane szklane kulki poddane działaniu alkaliów o rozmiarach mikronowych do komory dostosowanego urządzenia do ładowania kulek. Zakryj otwór komory siatką z otworami o optymalnym rozmiarze, aby umożliwić przejście kulek podczas załadunku. Zabezpiecz siatkę za pomocą zespołu komory obrazowania.

Wyjmij nośnik z płyty. Odpipetować zawiesinę fluorescencyjnego plazmidowego DNA kodującego białko reporterowe do płytki w celu równomiernego rozprowadzenia na komórkach. Za pomocą urządzenia do ładowania kulek delikatnie rozprowadź monowarstwę szklanych kulek na komórkach. Postukaj krótko w płytkę hodowlaną z odpowiednią siłą.

Szklane kulki na krótko toczą się na wierzchu przylegających komórek, podczas gdy obróbka alkaliczna sprawia, że mniej przylegają do komórek. Wpływ zderzeń między kulkami a komórkami przenosi odpowiednie obciążenie, tworząc miejscowe zakłócenia w błonach komórkowych. Te uformowane przejściowe pory o małych rozmiarach ułatwiają wchłanianie plazmidowego DNA do komórek, jednocześnie zapobiegając przedostawaniu się dużych kulek.

W okresie rekonwalescencji błona komórkowa ponownie się us