Mikroiniekcja zarodka komara: technika dostarczania egzogennego DNA do żółtka zarodka Anopheles Gambiae w celu wytworzenia mutacji linii zarodkowej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:12 min. • July 8th, 2025
Aby wprowadzić mikrogeniczne DNA do zarodka Anopheles, należy pobrać żądaną liczbę świeżo zebranych jaj komarów sprzed blastodermy. Na tym wczesnym etapie rozwoju jajo zawiera jądra bez tworzenia struktur komórkowych.
Umieść jajka w kształcie łódki na obrzeżach wilgotnej bibuły znajdującej się na powierzchni szklanego szkiełka. Ten krok zapewnia odpowiednie nawodnienie zarodka dla łatwości iniekcji w kolejnych krokach. Ustaw jaja przylegające do siebie tak, aby ich powierzchnia brzuszna była otwarta na zewnątrz.
Teraz weź igłę do mikroiniekcji o wąskim otworze zawierającą żądany roztwór plazmidu. Użyj mikroskopu preparacyjnego, aby umieścić igłę w pobliżu tylnego bieguna komórki jajowej - miejsca dla prekursorów komórek rozrodczych. Wbij igłę pod odpowiednim kątem, aby przebiła egzochorion - zewnętrzną warstwę - i endochorion - wewnętrzną warstwę skorupki jaja - ostatecznie docierając do zarodka.
Wstrzyknąć mieszaninę plazmidu do żółtka zarodka. Delikatnie wycofaj igłę i pozwól jajom rosnąć w odpowiednich warunkach. W miarę wzrostu komórki jajowej niektóre jądra migrują do tylnego bieguna, gdzie mogą włączyć mikrowstrzyknięte DNA. Jądra te stają się później gametami - komórkami płc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych