Barwienie złogów amyloidu hFTAA: technika wizualizacji włókienek amyloidowych przy użyciu barwnika na bazie oligotiofenu do obrazowania fluorescencyjnego w skrawkach tkanek
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:38 min. • July 8th, 2025
Odkładanie się nieprawidłowo sfałdowanych agregatów białkowych - amyloidów w przestrzeni tkanki zewnątrzkomórkowej jest cechą charakterystyczną różnych chorób proteopatycznych. Te amyloidy składają się z arkuszy beta, które ustawiają się prostopadle do osi fibrylarnej, tworząc krzyżowe powtórzenia arkuszy beta.
Aby wykryć złogi amyloidu za pomocą barwienia heptamerem-formylotiofenem octowym lub hFTAA, należy pobrać utrwalony w formalinie, zatopiony w parafinie wycinek tkanki zawierający złogi amyloidu.
Potraktuj skrawki ksylenem w celu odparafinowania tkanki w celu poprawy dostępności do barwienia w kolejnych krokach. Dodaj kilka kropli roztworu barwiącego hFTAA na sekcję tkanki i inkubuj, aby barwnik mógł wniknąć w tkankę.
hFTAA zawiera siedem sprzężonych jednostek tiofenu zawierających siarkę i końcowych grup karboksylowych przyłączonych do szkieletu tiofenu. Cechy te zapewniają elastyczność niezwiązanego barwnika. Podczas inkubacji końcowe grupy karboksylowe barwnika wiążą się z dodatnio naładowanymi resztami aminokwasowymi wyściełającymi hydrofobowy rowek arkusza beta poprzez oddziaływania elektrostatyczne.
W konsekwencji zachodzi zmiana konformacyjna, która zmniejsza elastyczn
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych