Name: Test tworzenia probówek na bazie Matrigelu w celu oceny aktywności naczyniopochodnej komórek nowotworowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min
Description: Poznaj test tworzenia probówek na Matrigelu do oceny aktywności naczyniopochodnej komórek nowotworowych in vitro. Ta metoda pozwala określić potencjał angiogenny różnych typów komórek rakowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Niniejsza praca była wspierana przez grant NCI R01 CA120659 (RS).

1. Test tworzenia cewek na Matrigelu do oceny aktywności waskulogennej komórek nowotworowych
<ol>
 <li>Przygotowanie komórek nowotworowych i komórek śródbłonka mikro naczyniowego: komórki nowotworu mózgu, takie jak komórki U87, komórki czerniaka B16F1, komórki raka piersi MDA-MB-435 oraz komórki jelita grubego HCT116, hodowano w pożywce DMEM uzupełnionej o 10% FBS oraz penicylinę/streptomycynę (wszystkie z Invitrogen). Linia komórek śródbłonka, ludzkie komórki śródbłonka mikro naczyniowego (HMVECs), były hodowane w pożywce EBM2 (Lonza) uzupełnionej o 1 μg/ml hydrokortyzonu i 1 ng/ml epidermal growth factor, 10% FBS oraz penicylinę/streptomycynę. Komórki przemywano PBS trzy razy i odrywano za pomocą 0,05% trypsyny/EDTA (Invitrogen). Po wirowaniu z prędkością 2,000 rpm przez 5 min osady komórkowe ponownie przemyto PBS. Następnie liczbę komórek w osadzie określono za pomocą hemocytometru.</li>
 <li>Przygotowanie Matrigelu: Alikwot Matrigelu o zredukowanej zawartości czynników wzrostu (BD Bioscience) ogrzano do temperatury pokojowej. Przed całkowitym rozmrożeniem przeniesiono go na lód i utrzymywano w stanie ciekłym na lodzie przez co najmniej 10 min. Następnie 50 μl Matrigelu naniesiono na płytki 96-dołkowe, utrzymując je w poziomie, co pozwoliło na równomierne rozłożenie Matrigelu, i inkubowano przez 30 min w 37°C.</li>
 <li>Tworzenie cewek: Komórki (1-2 x 104) zawieszono ponownie w bezzserwatkowej pożywce DMEM (dla komórek nowotworowych) lub EBM-2 (dla komórek śródbłonka) i nałożono na wierzch Matrigelu. Jeśli test służył do pomiaru wpływu określonych czynników na rozwój cewek, czynniki te (stymulatory lub inhibitory) dodawano do bezzserwatkowej pożywki. Każda grupa warunkowa obejmowała 4-6 dołków.</li>
 <li>Analiza obrazów i danych: Po inkubacji w 37°C przez noc każdy dołek analizowano bezpośrednio pod mikroskopem. Jeśli wymagana była fiksacja cewek, ostrożnie dodawano 100 μl 10% roztworu formaliny w soli fizjologicznej; po dziesięciu minutach preparat był gotowy do analizy. Pod mikroskopem z kontrastem fazowym (powiększenie 10x) wykonano zdjęcia cewek w każdym polu widzenia, a następnie obliczono średnią liczbę cewek z 3-5 losowo wybranych pól w każdym dołku.</li>
</ol>
2. Reprezentatywne wyniki:

 Komórki HMVECs posłużyły jako kontrola pozytywna, ponieważ cewki te rozwijały się z wyraźnych, wydłużonych ciał komórkowych, które łączą się, tworząc sieć wieloboków. Komórki B16F1, U87 i MDA-MB-435 tworzyły cewki naczyniowe podobne do tych formowanych przez HMVECs, natomiast komórki HCT116 nie wykazały takiej zdolności (Rycina 1). Przebadano zależność tworzenia cewek od dawki komórek w linii U87. Jak pokazano na Rycynie 2, 10 000 komórek tworzyło nieciągłe cewki. Po dwukrotnym zwiększeniu liczby komórek powstała zwarta sieć naczyniowa, porównywalna z tą obserwowaną w HMVECs. Z kolei w przypadku liczby komórek poniżej 5 000 nie udało się uzyskać fenotypu naczyniowego.

<img src="/files/ftp_upload/3040/3040fig1.jpg" alt="Porównanie morfologii hodowli komórkowych; obrazy mikroskopowe komórek HMVEC, U87, HCT116, MDA-MB-435, B16F1." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Tworzenie cewek indukowane przez komórki HMVEC, U87, MDA-MB-435 i B16F1, 
ale nie przez komórki HCT116. Wszystkie komórki (2 x 104) naniesiono na Matrigel i inkubowano przez noc. Cewki zobrazowano przy użyciu kontrastu fazowego. Komórki HMVEC posłużyły jako kontrola pozytywna. Przedstawiono reprezentatywny obraz z 3-5 pól widzenia. Pasek skali: 100 μm.
<img src="/files/ftp_upload/3040/3040fig2.jpg" alt="Porównanie wzrostu komórek, obraz mikroskopowy komórek HMVEC w porównaniu do komórek U87 przy różnych gęstościach do analizy." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 2"> Rycina 2. Indukcja tworzenia cewek przez komórki U87 w sposób zależny od liczby komórek. Do tworzenia cewek wykorzystano różną liczbę komórek U87, zgodnie z oznaczeniami w rogach. Komórki HMVEC posłużyły jako kontrola pozytywna. Pasek skali: 100 mm.

<ol><li>Shao, R., Guo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+microvascular+endothelial+cells+immortalized+with+human+telomerase+catalytic+protein%3A+a+model+for+the+study+of+in+vitro+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+%26+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Human microvascular endothelial cells immortalized with human telomerase catalytic protein: a model for the study of in vitro angiogenesis.</a> Biochemical & Biophysical Research Communications. 321, 788-794 (2004).</li>
<li>Ribeiro, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemostatic+properties+of+the+SV-40+transfected+human+microvascular+endothelial+cell+line+%28HMEC-1%29.+A+representative+in+vitro+model+for+microvascular+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Hemostatic properties of the SV-40 transfected human microvascular endothelial cell line (HMEC-1). A representative in vitro model for microvascular endothelium.</a> Thromb Res. 79, 153-1561 (1995).</li>
<li>Ades, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMEC-1%3A+establishment+of+an+immortalized+human+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line.</a> J Invest Dermatol. 99, 683-690 (1992).</li>
<li>Shao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+expression+of+periostin+by+human+breast+cancers+promotes+tumor+angiogenesis+through+up-regulation+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+2+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Acquired expression of periostin by human breast cancers promotes tumor angiogenesis through up-regulation of vascular endothelial growth factor receptor 2 expression.</a> Molecular & Cellular Biology. 24, 3992-4003 (2004).</li>
<li>Shao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((YKL-40%2C+a+secreted+glycoprotein%2C+promotes+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">YKL-40, a secreted glycoprotein, promotes tumor angiogenesis.</a> Oncogene. 28, 4456-4468 (2009).</li>
<li>Basu, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+role+for+cyclooxygenase-2+in+regulating+vascular+channel+formation+by+human+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A novel role for cyclooxygenase-2 in regulating vascular channel formation by human breast cancer cells.</a> Breast Cancer Research. 8, R69-R69 (2006).</li>
<li>Scavelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry+by+bone+marrow+macrophages+in+patients+with+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry by bone marrow macrophages in patients with multiple myeloma.</a> Oncogene. 27, 663-674 (2008).</li>
<li>El Hallani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+alternative+mechanism+in+glioblastoma+vascularization%3A+tubular+vasculogenic+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22+Brain%22%5BJournal%5D)">A new alternative mechanism in glioblastoma vascularization: tubular vasculogenic mimicry.</a> Brain. 133, 973-982 (2010).</li>
<li>Maniotis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+channel+formation+by+human+melanoma+cells+in+vivo+and+in+vitro%3A+vasculogenic+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry.</a> American Journal of Pathology. 155, 739-752 (1999).</li>
<li>Hendrix, M. J., Seftor, E. A., Hess, A. R., Seftor, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry+and+tumour-cell+plasticity%3A+lessons+from+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry and tumour-cell plasticity: lessons from melanoma.</a> Nature Reviews Cancer. 3, 411-421 (2003).</li>
<li>Folberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+cell+plasticity+in+uveal+melanoma%3A+microenvironment+directed+dampening+of+the+invasive+and+metastatic+genotype+and+phenotype+accompanies+the+generation+of+vasculogenic+mimicry+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Tumor cell plasticity in uveal melanoma: microenvironment directed dampening of the invasive and metastatic genotype and phenotype accompanies the generation of vasculogenic mimicry patterns.</a> American Journal of Pathology. 169, 1376-1389 (2006).</li>
<li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate-specific+membrane+antigen+directed+selective+thrombotic+infarction+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Prostate-specific membrane antigen directed selective thrombotic infarction of tumors.</a> Cancer Research. 62, 5470-5475 (2002).</li>
<li>Sood, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+significance+of+tumor+cell-lined+vasculature+in+ovarian+carcinoma%3A+implications+for+anti-vasculogenic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biology+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">The clinical significance of tumor cell-lined vasculature in ovarian carcinoma: implications for anti-vasculogenic therapy.</a> Cancer Biology & Therapy. 1, 661-664 (2002).</li>
<li>Shirakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamics+in+vasculogenic+mimicry+and+angiogenesis+of+inflammatory+breast+cancer+xenograft%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Hemodynamics in vasculogenic mimicry and angiogenesis of inflammatory breast cancer xenograft.</a> Cancer Research. 62, 560-566 (2002).</li>
<li>Ruf, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+role+of+tissue+factor+pathway+inhibitors+1+and+2+in+melanoma+vasculogenic+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential role of tissue factor pathway inhibitors 1 and 2 in melanoma vasculogenic mimicry.</a> Cancer Research. 63, 5381-5389 (2003).</li>
<li>Seftor, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+interactions+of+laminin+5+gamma2+chain%2C+matrix+metalloproteinase-2%2C+and+membrane+type-1-matrix%2Fmetalloproteinase+are+required+for+mimicry+of+embryonic+vasculogenesis+by+aggressive+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cooperative interactions of laminin 5 gamma2 chain, matrix metalloproteinase-2, and membrane type-1-matrix/metalloproteinase are required for mimicry of embryonic vasculogenesis by aggressive melanoma.</a> Cancer Research. 61, 6322-6327 (2001).</li>
<li>Shirakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry+and+pseudo-comedo+formation+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry and pseudo-comedo formation in breast cancer.</a> International Journal of Cancer. 99, 821-828 (2002).</li>
</ol>

Nie zgłoszono konfliktów interesów.

Aby zapewnić powodzenie tego testu, należy najpierw sprawdzić jakość Matrigelu. W celu przeprowadzenia testu wstępnego z użyciem HMVECs można pozyskać niewielką próbkę od BD Bioscience. Produkty z różnych partii mogą wykazywać odmienne właściwości, przy czym niektóre serie mogą nie zapewniać optymalnych warunków do tworzenia cewek. Po drugie, należy unikać powstawania pęcherzyków powietrza podczas nakładania alikwotów Matrigelu do płytek 96-dołkowych, ponieważ pęcherzyki mogą zakłócić proces tworzenia cewek. Jeśli w dołk...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11995</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel o zredukowanej zawartości czynników wzrostu</td><td>BD Biosciences</td><td>47743-720</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw EBM2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Nikon ECLIPSE TS100</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

test tworzenia rurek na matrigelu do oceny aktywności waskulogennej komórek nowotworowych

A Matrigel-Based Tube Formation Assay to Assess the Vasculogenic Activity of Tumor Cells

W ciągu ostatnich kilku dekad do wykazania aktywności angiogennej komórek śródbłonka naczyniowego in vitro typowo stosowano test tworzenia cewek z użyciem Matrigelu o zredukowanej zawartości czynników wzrostu1-5. Jednakże, narastające dowody z ostatnich lat wykazały, że test ten nie ogranicza się jedynie do badania zachowania naczyniowego komórek śródbłonka. Zamiast tego wykorzystywano go również do badania zdolności wielu typów komórek nowotworowych do wykształcenia fenotypu naczyniowego6-8. Zdolność ta była spójna z ich zachowaniem waskulogenicznym zidentyfikowanym u zwierząt po ksenotransplantacji, procesem znanym jako naśladownictwo waskulogenne (VM)9. Istnieje wiele dowodów wykazujących, że VM indukowane przez komórki nowotworowe odgrywa kluczową rolę w rozwoju nowotworu, niezależnie od angiogenezy komórek śródbłonka6, 10-13. Na przykład stwierdzono, że komórki nowotworowe uczestniczą w tworzeniu unaczynionych, przepływowych kanałów naczyniowych w próbkach tkanek od pacjentów z czerniakiem i glejakiem8, 10, 11. W niniejszej pracy opisaliśmy ten test sieci cewkowych jako przydatne narzędzie w ocenie aktywności waskulogennej komórek nowotworowych. Stwierdziliśmy, że niektóre linie komórkowe nowotworu, takie jak komórki B16F1 czerniaka, komórki U87 glejaka oraz komórki MDA-MB-435 raka piersi, są zdolne do tworzenia cewek naczyniowych; inne natomiast, jak komórki HCT116 raka jelita grubego, nie posiadają tej zdolności. Co więcej, fenotyp naczyniowy jest zależny od liczby komórek wysianych na Matrigel. Zatem test ten może służyć jako potężne narzędzie do przesiewowego badania potencjału naczyniowego różnych typów komórek, w tym komórek naczyniowych, nowotworowych oraz innych.

Test tworzenia cewek stosuje się do oceny aktywności naczyniowej komórek nowotworowych.

Test tworzenia rurek na Matrigelu do oceny aktywności waskulogennej komórek nowotworowych

W ciągu ostatnich kilku dziesięcioleci do wykazania angiogennego... zazwyczaj stosowano test tworzenia cewek z użyciem Matrigelu o zredukowanej zawartości czynników wzrostu.

Ogólnym celem następującego eksperymentu jest pomiar tworzenia rurek przez różne typy komórek nowotworowych in vitro jako sposób na ocenę aktywności naczyniowej in vivo. Osiąga się to poprzez naniesienie komórek nowotworowych na Matrigel w celu indukowania tworzenia rurek. Jako drugi krok.Komórki na Matrigelu inkubuje się przez noc w temperaturze 37°C, co umożliwia proces tworzenia rurek. Następnie wykonuje się obrazowanie rurek powstałych z każdego typu komórek. W celu ilościowego określenia średniej liczby rurek utworzonych przez każdy typ komórek, uzyskuje się wyniki wykazujące potencjalną zdolność tych komórek do tworzenia naczyń krwionośnych in vivo w oparciu o modele ksenoprzeszczepów guzów.Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie badań nad nowotworami, takie jak sposób pomiaru aktywności naczyniowej in vitro. Aby przygotować komórki nowotworowe, należy rozpocząć od hodowli komórek melanoma UAD 7, B 16 F1, MDA MB 4 35 lub komórek jelita grubego HCT 116 w DMEM uzupełnionym o 10% FBS oraz penicylinę. Ludzkie mikro naczyniowe komórki śródbłonka (HMVECs) hoduje się w medium EBM-2 uzupełnionym o 1 µg/mL hydrokortyzonu, 1 ng/mL epidermal growth factor, 10% FBS oraz penicylinę.Przemyj komórki PBS, a następnie odklej je za pomocą 0,05% trypsyny EDTA i odwiruj w celu uzyskania osadu przy 2000 rpm przez pięć minut. Następnie ponownie przemyj je PBS. Policz komórki za pomocą hemocytometru, aby przygotować podgrzany Matrigel.Jednomililitrową alikwot Matrigelu z obniżoną zawartością czynników wzrostu doprowadź do temperatury pokojowej. Następnie niezwłocznie umieść go na lodzie na 10 minut. Pipetuj 50 µL do dołków płytki 96-dołkowej.Następnie inkubować płytkę w temperaturze 37 °C przez 30 minut, resuspender od 1 do 2 × 10⁵ komórek nowotworowych lub śródbłonka odpowiednio w DMEM lub eBM2 i nanieść je na powierzchnię matrigelu. W przypadku badania wpływu odczynników na rozwój cewek, dodać odczynnik do medium bezsurowiczego i inkubować przez noc w temperaturze 37 °C. W celu analizy obrazu, dodać 10 µL 10% roztworu formaliny w soli fizjologicznej na 10 minut.Następnie należy wykonać obrazowanie za pomocą mikroskopu fazowo-kontrastowego przy użyciu obiektywu 10x. Należy policzyć liczbę cewek w trzech do pięciu losowych polach widzenia dla każdej studzienki, a następnie wyznaczyć wartość średnią.Komórki HMC zostały użyte jako kontrola pozytywna, ponieważ cewki te rozwijały się z wyraźnych, wydłużonych ciał komórkowych, które łączyły się, tworząc sieć wielokątów. Komórki B 16 F1 U 87 oraz MDA MB 4 35 wytworzyły cewki naczyniowe podobne do tych tworzonych przez H ecs, natomiast komórki HCT one 16 tego nie zrobiły.Zależność tworzenia cewek od dawki komórek przetestowano na komórkach U 87. Jak pokazano na tej rycinie, 10 000 komórek utworzyło nieciągłe cewki po podwojeniu liczby komórek. Lita sieć naczyniowa była porównywalna do tej obserwowanej w H ecs.Z kolei próby z wykorzystaniem mniej niż 5 000 komórek nie doprowadziły do uformowania fenotypu naczyniowego. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać gruntowną wiedzę na temat tego, jak prawidłowo przeprowadzić eksperyment z testem tworzenia rurek w matrigelu, aby zmierzyć zdolność komórek nowotworowych do tworzenia rurek in vitro.

a-matrigel-based-tube-formation-assay-to-assess-vasculogenic-activity

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Przetłumacz z en na pl. Zachowaj wszystkie znaczniki HTML i formatowanie dokładnie. Wypisz tylko tłumaczenie.

Test tworzenia rurek oparty na Matrigel w celu oceny aktywności angiogennej komórek nowotworowych

Test tworzenia probówek jest szybką, mierzalną metodą pomiaru angiogenezy in vitro. Komórki śródbłonka łączy się z kondycjonowanymi pożywkami i plateruje ekstraktem z błony podstawnej. Tworzenie się rurki następuje w ciągu kilku godzin, a nowo utworzone kanaliki można łatwo określić ilościowo.

Test tworzenia komórek śródbłonka do badania angiogenezy in vitro

Opisujemy test czopa matrigelowego, aby zilustrować potencjał angiogenny puli czynników wydzielanych przez komórki nowotworowe za pomocą dwóch uzupełniających się metod obrazowania, ultradźwięków i endomikroskopii. Matrigel, żel naśladujący macierz zewnątrzkomórkową (ECM), jest wykorzystywany do wprowadzenia gospodarza (myszy) z czynnikami angiogennymi wydzielanymi do kondycjonowanego podłoża (CM).

Monitorowanie funkcjonalności i morfologii układu krwionośnego rekrutowanego przez czynniki wydzielane przez szybko rosnące komórki nowotworowe

Ten manuskrypt opisuje test tworzenia rurki w celu ilościowego określenia wpływu danego związku lub stanu na angiogenezę za pomocą tworzenia komórek śródbłonka w kontrolowanym środowisku.

Strategiczny test tworzenia rurki śródbłonkowej: porównanie macierzy zewnątrzkomórkowej i zredukowanej macierzy zewnątrzkomórkowej czynnika wzrostu

Ten artykuł przedstawia kompleksową procedurę oceny in vitro, czy klasyczna angiogeneza nowotworów występuje w naczyniakach zarodkowych (HBs) i jaka jest jej rola w HBs. Wyniki podkreślają złożoność neowaskularyzacji HB i sugerują, że ta powszechna forma angiogenezy jest jedynie mechanizmem uzupełniającym w neowaskularyzacji HB.

Kompleksowa procedura oceny wydajności in vitro przypuszczalnego neowaskularyzmu naczyniaka zarodkowego przy użyciu testu kiełkowania sferoidalnego

Tutaj oceniamy wpływ ekstraktu wodnego z Ruta graveolens na tworzenie sieci naczyń krwionośnych, używając testu formowania probówek na zżelowanej matrycy podstawowej.

Test tworzenia rurki HUVEC w celu oceny wpływu produktów naturalnych na angiogenezę

Progenitorzy śródbłonka pochodzący z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC-EPs) mają potencjał, aby zrewolucjonizować leczenie chorób sercowo-naczyniowych i umożliwić tworzenie bardziej wiernych modeli chorób sercowo-naczyniowych. W artykule opisano enkapsulację iPSC-EP w trójwymiarowych (3D) mikrośrodowiskach kolagenu oraz analizę ilościową potencjału naczyniowego tych komórek.

Model 3D in vitro i potok obliczeniowy do ilościowego określenia potencjału naczyniopochodnego progenitorów śródbłonka pochodzących z iPSC

Ten test wykorzystuje embrionalne komórki macierzyste myszy zróżnicowane w ciała embrionalne hodowane w żelu 3D-collagen do analizy procesów biologicznych, które kontrolują angiogenezę kiełkowania in vitro. Technika ta może być stosowana do testowania leków, modelowania chorób oraz do badania określonych genów w kontekście delecji, które są śmiertelne dla zarodka.

In vitro Trójwymiarowy test angiogenezy w kiełkowaniu przy użyciu embrionalnych komórek macierzystych myszy do modelowania chorób naczyniowych i testowania leków

Przedstawiona tutaj metoda może ocenić wpływ odczynników na angiogenezę lub przepuszczalność naczyń in vivo bez barwienia. Metoda wykorzystuje wstrzyknięcie dekstranu-FITC przez żyłę ogonową w celu uwidocznienia naczyń nowych lub nieszczelności naczyniowej.

Zmodyfikowany test in vivo Matrix Gel Plug Test do badań angiogenezy

Obecny protokół pozwala na odzyskanie struktur przypominających rurki powstałych w klasycznym teście angiogenezy in vitro, gdzie komórki, takie jak komórki trofoblastu, organizują się w struktury podobne do naczyń włosowatych na warstwie zewnątrzkomórkowej macierzy błony podstawnej. Odzyskane struktury są wykorzystywane do izolacji RNA i białek do różnych analiz biochemicznych.

Odzyskiwanie komórek trofoblastu z testu tworzenia rurki angiogenezy do analizy ekspresji markerów różnicowania

To badanie przedstawia dwuwymiarowy (2D) test migracji ran drapanych i trójwymiarowy (3D) test kiełkowania sferoidów, wraz z odpowiednimi metodami analizy, w tym ekstrakcją RNA i immunocytochemią, jako odpowiednie testy do badania angiogenezy in vitro.

Badanie angiogenezy na poziomie funkcjonalnym i molekularnym poprzez wykorzystanie testu migracji ran drapanych i testu kiełkowania sferoidalnego

Poznaj test tworzenia probówek na Matrigelu do oceny aktywności naczyniopochodnej komórek nowotworowych in vitro. Ta metoda pozwala określić potencjał angiogenny różnych typów komórek rakowych.

Test tworzenia rurek na Matrigelu do oceny aktywności waskulogennej komórek nowotworowych

Przeglądaj więcej filmów