Badania przesiewowe nierozpuszczalnych enzymów chromogennych na bazie biomasy: test oceniający aktywność degradacji enzymów rozkładających biomasę roślinną
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:27 min. • July 8th, 2025
Biomasa to materia organiczna pochodzenia roślinnego składająca się głównie ze złożonych polisacharydów. Enzymy rozkładające węglowodany działają na te polisacharydy, tworząc mniejsze oligosacharydy.
Aby ocenić aktywność degradacji enzymu, zacznij od pobrania różnych nierozpuszczalnych biomas chromogennych - substratów ICB obecnych w studzienkach porowatej płytki reakcyjnej. Podłoża te otrzymywane są z barwienia materiałów pochodzenia roślinnego barwnikiem chlorotriazynowym o określonym kolorze. Powstała w ten sposób biomasa zawiera znakowane barwnikiem złożone polisacharydy, które służą jako substrat dla aktywności enzymów.
Teraz dodaj roztwór buforowy zawierający enzym hydrolizujący węglowodany. Bufor utrzymuje pH dla optymalnej aktywności enzymów. Umieścić płytkę reakcyjną na wytrząsarce i inkubować. Ciągłe mieszanie pozwala cząsteczkom enzymu dotrzeć do docelowego polisacharydu w podłożu ICB.
Podczas inkubacji enzym hydrolizujący rozszczepia kowalencyjne wiązania glikozydowe w długołańcuchowych polisacharydach. W wyniku reakcji powstają rozpuszczalne oligosacharydy połączone z cząsteczkami barwnika, które pozostają w roztworze.
Po zakończeniu degradacji umieść płytkę reakcyjną
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych