Test wiązania aneksyny V: technika oparta na fluorescencji do identyfikacji erytrocytów apoptotycznych poprzez znakowanie fosfatydyloseryną
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:21 min. • July 8th, 2025
W pewnych stanach patologicznych erytrocyty lub czerwone krwinki ulegają kurczeniu się komórek, czemu towarzyszy translokacja fosfolipidu błonowego - fosfatydyloseryny - z wewnętrznej do zewnętrznej błony błonowej, co prowadzi do zaprogramowanej śmierci komórki, eryptozy, wywołując fagocytozę komórkową za pośrednictwem makrofagów.
Aby zmierzyć eryptozę wywołaną jonoforem w izolowanej ludzkiej populacji erytrocytów za pomocą testu wiązania aneksyny V, należy rozpocząć od erytrocytów zawieszonych w buforze wolnym od glukozy.
Niedobór glukozy indukuje stres komórkowy, aktywując cytozolową kinazę białkową C, która następnie aktywuje kanały wapniowe i powoduje napływ jonów wapnia. Ponadto aktywowane są kanały potasowe, powodując wypływ potasu i kurczenie się komórek.
Następnie dodaj jonofor wapnia, który tworzy stabilny kompleks z zewnątrzkomórkowymi jonami wapnia. Kompleks ułatwia cytozolowe wnikanie jonów wapnia przez błonę komórkową, dodatkowo zwiększając wewnątrzkomórkowe stężenie wapnia. To z kolei aktywuje scramblase - dwukierunkowy transporter fosfolipidów - który pomaga w translokacji fosfatydyloseryny z wewnętrznej do zewnętrznej błony komórkowej, zmniejszając asymetrię błony i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych