Test zubożenia glukozy in vitro: oparta na fluorescencji metoda ilościowego określania wychwytu glukozy w komórkach za pomocą zewnątrzkomórkowego pomiaru wyczerpania glukozy

Glukoza, podstawowe źródło energii komórkowej, dostaje się do komórek przez białka transportujące glukozę w błonie komórkowej. Glukoza jest rozkładana w cytoplazmie komórki do pirogronianu poprzez szlak glikoliczny, generując energię przez trifosforan adenozyny lub ATP dla metabolizmu komórkowego.

Aby zmierzyć wewnątrzkomórkowy wychwyt glukozy, zacznij od przylegającej hodowli fibroblastów na płytce wielodołkowej. Zastąp pożywkę pożywką bezglukozową i inkubuj. Komórki metabolizują dostępną glukozę w celu wytworzenia energii, osiągając stan niedoboru glukozy.

Zastąp pożywkę w jednym zestawie studzienek pożywką bezglukozową zawierającą insulinę, stymulator wychwytu glukozy i fluorescencyjną deoksyglukozę, analog glukozy. Potraktuj inny zestaw studzienek pożywką bezglukozową zawierającą fluorescencyjną deoksyglukozę.

Podczas inkubacji insulina stymuluje translokację dodatkowych transporterów glukozy do błony komórkowej, ułatwiając zwiększony wychwyt fluorescencyjnej deoksyglukozy przy braku glukozy.

Deoksyglukoza jest fosforylowana i nie jest dalej metabolizowana przez komórki. Jednocześnie zmniejsza się zewnątrzkomórkowe stężenie fluorescencyjnej deoksyglukozy.

Po inkubacji zebrać po