Pomiar zubożenia analogu glukozy we fluorescencji zewnątrzkomórkowej: zastępcza technika pomiarowa do oceny wychwytu glukozy w narządach myszy ex vivo

W tkankach glukoza zewnątrzkomórkowa dostaje się do komórek poprzez ułatwioną dyfuzję przez specyficzne transportery glukozy.

Glukoza jest rozkładana do pirogronianu w cytoplazmie komórki poprzez glikolizę, szlak metaboliczny, wytwarzający energię w postaci trifosforanu adenozyny lub ATP dla komórkowych procesów metabolicznych.

Aby zmierzyć wychwyt glukozy ex vivo, zacznij od świeżo pobranej tkanki wątroby myszy o małych rozmiarach. Dodać odpowiedni bufor w celu utrzymania warunków fizjologicznych.

Następnie przenieś tkankę na wielodołkową płytkę zawierającą pożywkę bezglukozową. Następnie należy przeprowadzić inkubację w pożywkach bezglukozowych uzupełnionych deoksyglukozą, fluorescencyjnie znakowanym analogiem glukozy. Mały rozmiar tkanki umożliwia wnikanie deoksyglukozy.

Deoksyglukoza dostaje się do komórek przez transportery glukozy, przy braku glukozy. W komórkach deoksyglukoza ulega fosforylacji, ale nie jest dalej metabolizowana, co prowadzi do jej akumulacji.

Zebrać pożywki zawierające niewykorzystaną, znakowaną fluorescencyjnie deoksyglukozę w żądanych punktach czasowych. Za pomocą czytnika mikropłytek zmierz fluorescencję zewnątrzkomórkowej deoksyglukozy, która może być s