Test próbny in vitro: metoda oceny wpływu osmolitów na trwałość bakterii
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:54 min. • July 8th, 2025
Pod wpływem szkodliwych warunków środowiskowych podgrupa bakterii wchodzi w stan niskiej aktywności metabolicznej, unikając szkodliwych skutków. Bakterie te, zwane trwałymi, mogą tolerować przejściowe narażenie na wysokie stężenia antybiotyków.
Aby zbadać wpływ osmolitów - małych substancji rozpuszczonych w organicznych - na trwałość bakterii, najpierw należy uzyskać hodowlę komórek bakteryjnych w fazie wykładniczej z wcześniej istniejącymi trwałymi substancjami poniżej granicy wykrywalności, zawieszonymi w pożywkach.
Następnie przenieś zawiesinę do studzienek zawierających osmolit na płytce mikromacierzy. Trzymaj zestaw studzienek bez osmolitu jako kontroli. Uszczelnić płytkę membraną przepuszczającą gaz, aby umożliwić szybką dyfuzję gazu w celu wzrostu komórek i inkubacji.
Osmolity w pożywce w odpowiednich stężeniach wywołują stres osmotyczny, skłaniając niektóre komórki do przeprogramowania metabolizmu komórkowego z szybkiego na powolny wzrost, tworząc trwałe.
Teraz przenieś komórki traktowane osmolitem i kontrolne na płytkę testową zawierającą antybiotyk. Zapieczętować płytkę do oznaczania substancji trwałej i rozpocząć inkubację.
W obecności antybiotyków normalne komórki ulega
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych