Test aktywności reporterowej receptora estrogenowego w celu zbadania aktywności estrogenowej fitoestrogenów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:52 min. • July 8th, 2025
Estrogeny to hormony steroidowe, które działają jako cząsteczki sygnalizacji endokrynnej i wiążą się z receptorami jądrowymi - receptorami estrogenowymi beta, tworząc kompleksy receptorów estrogen-beta.
Te kompleksy ligand-receptor dimeryzują i tworzą homodimery w cytoplazmie komórki. Powstały w ten sposób homodimer dostaje się do jądra, wiąże się z elementem odpowiedzi estrogenowej, ERE – specyficzną sekwencją DNA w promotorze docelowego genu – i inicjuje transkrypcję.
Aby określić aktywność estrogenową fitoestrogenów – metabolitów wtórnych pochodzenia roślinnego, które naśladują funkcję estrogenu – należy rozpocząć od wielodołkowej płytki zawierającej komórki reporterowe zawieszone w odpowiednim podłożu.
Komórki reporterowe są zaprojektowane tak, aby wykazywały nadekspresję receptorów estrogenowych beta i transfekowały genem lucyferazy połączonym z promotorem URE. Dodać roztwór próbki zawierający fitoestrogeny i inkubować.
Podczas inkubacji fitoestrogen wiąże się z receptorami estrogenowymi, beta — ulegającymi ekspresji w komórkach reporterowych. Po związaniu kompleksy fitoestrogen-receptor dimeryzują i przemieszczają się do jądra.
Wewnątrz jądra dimeryzowany kompleks wiąże się z
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych