Name: Laserowe wychwytywanie mikrodysekcji tkanek ssaków (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 34 s
Description: Poznaj technikę laserowej mikrodysekcji do precyzyjnej izolacji próbek tkanek ssaków przy użyciu mikroskopu Leica A-S-L-M-D. Metoda ta umożliwia badaczom dokładną analizę komórek w badaniach biologicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

mikrorozcięcie laserowe z wychwytem (laser capture microdissection) tkanek ssaków

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Mikroskopia z przechwytywaniem laserowym, znana również jako laserowa mikrosekcja (LMD), umożliwia izolowanie niewielkiej liczby komórek lub tkanek z zamrożonych lub utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkanek. Techniki LMD opierają się na zastosowaniu membrany termolabilnej, umieszczonej powyżej lub poniżej skrawka tkanki. W jednej z metod skupiona energia laserowa jest wykorzystywana do stopienia membrany z znajdującymi się pod nią komórkami, które następnie można wyjąć ze skrawka tkanki. W drugiej metodzie energia laserowa odparowuje folię wzdłuż „narysowanej” na tkance ścieżki, co pozwala wybranym komórkom wpaść do urządzenia zbierającego. Każda z tych technik umożliwia selekcję komórek z rozdzielczością wynoszącą co najmniej kilka mikronów. Z próbek poddanych mikrosekcji można izolować i analizować DNA, RNA, białka oraz lipidy. W tym filmie prezentujemy zastosowanie instrumentu do laserowej mikrosekcji Leica AS-LMD w siedmiu segmentach, obejmujących: wprowadzenie do zasad LMD, uruchamianie instrumentu, ogólne uwagi dotyczące przygotowania próbek, montowanie preparatu i ustawianie probówek do przechwytywania, ustawianie mikroskopu, regulację parametrów przechwytywania oraz pobieranie próbek tkanki. Laserowa mikrosekcja pozwala badaczowi na izolowanie próbek czystych populacji komórkowych o wielkości zaledwie kilku ekwiwalentów komórkowych. Umożliwia to analizę interesujących badacza komórek wolnych od sąsiednich zanieczyszczeń, które mogłyby zaburzyć wyniki doświadczeń.

Mikrorozcięcie laserowe z wychwytem (Laser Capture Microdissection) tkanek ssaków

Mikroskopia z przechwytywaniem laserowym, znana również jako laserowa mikrodysekcja (LMD), umożliwia użytkownikowi izolację niewielkiej liczby komórek lub tkanek z zamrożonych lub ...

Witajcie, nazywam się Rob Edwards. Jestem dyrektorem ośrodka mikroskopii laserowej w University of California Irvine. Opiszę Państwu sposób użytkowania mikroskopu do laserowej mikrodysekcji, którym dysponujemy w naszym ośrodku.Naszym urządzeniem jest Leica A-S-L-M-D, którą zakupiliśmy około trzech lat temu. Istnieją dwa różne typy systemów mikrosekcji laserowej. Jeden z nich można porównać do zgrzewarki punktowej, w której fragment tkanki znajduje się na szkiełku przedmiotowym, przykryty plastikową membraną.Następnie wykorzystuje się źródło laserowe do stopienia membrany, co w rzeczywistości powoduje zgranie tkanki z membraną, po czym membrana jest usuwana wraz z przechwyconą tkanką. Dobrze. Aby uruchomić system LCM, włączamy kolejno następujące urządzenia. Zaczynamy od jednostki sterującej A-S-L-M-D, którą włączamy tutaj.Następnie włączamy komputer w prosty sposób. Jeśli dysponujemy preparatem wymagającym optyki fluorescencyjnej do identyfikacji komórek przeznaczonych do przechwycenia, należy włączyć lampę rtęciową w celu uzyskania oświetlenia fluorescencyjnego. W tej demonstracji nie będziemy z niej korzystać.Aby uzyskać wysokiej jakości obrazy preparatów przed i po badaniu, możn

laser-capture-microdissection-of-mammalian-tissue

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Laserowa mikrosekcja tkanek ssaków

Film opisuje laserową sekcję 3D organotypowego modelu współhodowli z precyzją na poziomie mikronów. W modelach organotypowych 3D składniki zrębu, takie jak fibroblasty, są trójwymiarowo współhodowane z komórkami nabłonka nowotworowego. Model 3D służy jako narzędzie eksperymentalne, które umożliwia badanie inwazji i interakcji rak-zrąb w warunkach zbliżonych do fizjologicznych.

Mikrodysekcja laserowa: technika izolowania inwazyjnych komórek raka jelita grubego z modelu hodowli organotypowej 3D

Mikrodysekcja jest szeroko stosowana do badania DNA, RNA i białek w tkance.   Mikroskopia laserowa (LCM) jest najczęściej stosowaną metodą, ale od niedawna dostępna jest nowa technika mielenia, mezodysekcja.  Pokazujemy ekstrakcję RNA z mezorozpreparowanych szkiełek tkankowych zatopionych w parafinie w formalinie ziarniniaków Mycobacterium tuberculosis.

Nowatorskie podejście do mikrodysekcji w celu odzyskania specyficznych transkryptów Mycobacterium tuberculosis z ziarniniaków płuc zatopionych w parafinie utrwalonej w formalinie

Izolacja pojedynczych neuronów dopaminowych lub brzusznego obszaru nakrywki za pomocą bezpośredniej lub pośredniej immunohistochemii jest demonstrowana za pomocą mikrodysekcji laserowej. Omówiono parametry izolacji tkanki ze szkiełka podstawowego za pomocą lasera na podczerwień oraz od szkiełek membranowych z wykorzystaniem kombinacji lasera podczerwonego i ultrafioletowego.

Mikrodysekcja laserowa - demonstracja izolacji pojedynczych neuronów dopaminowych i całego brzusznego obszaru nakrywki

Celem tego protokołu jest wykorzystanie mikro-dysekcji laserowej jako skutecznej metody izolowania czystych populacji typów komórek z heterogenicznych tkanek prostaty do dalszej analizy RNA.

Laserowa mikrodysekcja ludzkiego nabłonka gruczołu krokowego do analizy RNA

Tutaj opisujemy protokół powtarzalnej mikrodysekcji laserowej (LCM) do izolowania siatki beleczkowej (TM) do dalszej analizy RNA. Możliwość analizowania zmian w ekspresji genów w TM pomoże w zrozumieniu mechanizmów molekularnych leżących u podstaw chorób oczu związanych z TM.

Laserowe wychwytywanie mikrodysekcji siatki beleczkowej o wysokiej czystości z oczu myszy do analizy ekspresji genów

Protokół mikrodysekcji laserowej (LCM) został opracowany w celu uzyskania wystarczającej ilości wysokiej jakości RNA do analizy ekspresji genów w komórkach kostnych. Obecne badanie koncentruje się na mysich odcinkach kości udowej. Jednak opisany tutaj protokół LCM może być wykorzystany do badania ekspresji genów w komórkach dowolnej tkanki twardej.

Protokół mikrodysekcji z wychwytem laserowym, który zapewnia wysokiej jakości RNA ze świeżo zamrożonych kości myszy

Ten protokół opisuje mikrodysekcję laserową do izolacji chrząstki i kości ze świeżo zamrożonych fragmentów zarodka myszy. Chrząstka i kość mogą być szybko uwidocznione przez barwienie fioletem krezylo i precyzyjnie zebrane w celu uzyskania wysokiej jakości RNA do analizy transkryptomicznej.

Laserowe wychwytywanie mikrodysekcji chrząstki embrionalnej i kości myszy w celu analizy ekspresji genów

Mikrodysekcja laserowa (LMD) jest czułą i wysoce powtarzalną techniką, która może być wykorzystana do odkrycia ścieżek pośredniczących w heterogeniczności i inwazji glejaka. W tym miejscu opisujemy zoptymalizowany protokół izolacji dyskretnych obszarów z tkanki glejaka za pomocą laserowego LMD, a następnie analizy transkryptomicznej.

Mikrodysekcja podregionów glejaka do wychwytywania laserowego w celu przestrzennej i molekularnej charakterystyki heterogeniczności wewnątrznowotworowej, onkostrumieni i inwazji

Opisano protokół, który wykorzystuje laserową mikrodysekcję do izolowania pojedynczych tkanek nicieni do sekwencjonowania RNA. Protokół nie wymaga zestawów narzędzi genetycznych specyficznych dla danego gatunku, co pozwala na porównywanie profili ekspresji genów między różnymi gatunkami na poziomie próbek jednotkankowych.

Mikrodysekcja laserowa do zastosowań jednotkankowych niezależnych od gatunku

Ten protokół opisuje wysokoprzepustowy przepływ pracy dla sterowanej przez sztuczną inteligencję segmentacji obszarów zainteresowania potwierdzonych patologicznie na podstawie barwionych, cienkich obrazów skrawków tkanek w celu wzbogacenia populacji komórek z rozdzielczością histologiczną za pomocą mikrodysekcji laserowej. Strategia ta obejmuje nowatorski algorytm umożliwiający przenoszenie znaczników oznaczających interesujące populacje komórek bezpośrednio do mikroskopów laserowych.

Uprzemysłowiona, sterowana sztuczną inteligencją mikrodysekcja laserowa do mikroskalowej analizy proteomicznej mikrośrodowiska guza

Protokół ten opisuje metodę izolowania RNA z określonych histologicznych obszarów tkanki wątroby myszy z unieruchomioną o Optymalnej Temperaturze Cięcia z zastosowaniem złożonego tkanki wątroby za pomocą mikrosekcji laserowej, umożliwiającej ukierunkowaną analizę ekspresji genów w dalszej fazie.

Mikroskop laserowego przechwytywania tkanki wątroby myszy utrwalonej paraformaldehydem do analizy RNA

Poznaj technikę laserowej mikrodysekcji do precyzyjnej izolacji próbek tkanek ssaków przy użyciu mikroskopu Leica A-S-L-M-D. Metoda ta umożliwia badaczom dokładną analizę komórek w badaniach biologicznych.

Mikrorozcięcie laserowe z wychwytem (Laser Capture Microdissection) tkanek ssaków

Przeglądaj więcej filmów