Ustalanie konfiguracji całej komórki za pomocą metody zacisku krosowego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:12 min. • July 8th, 2025
Zacznij od unieruchomionego wycinka mózgu myszy umieszczonego w komorze rejestracyjnej układu elektrofizjologicznego wypełnionej sztucznym płynem mózgowo-rdzeniowym w celu utrzymania żywotności neuronów.
Zestaw zawiera wstępnie zmontowaną mikropipetę rejestrującą wypełnioną roztworem kationowym, podłączoną do wzmacniacza i jednostki sterującej ciśnieniem.
Pod mikroskopem zlokalizuj neuron i umieść mikropipetę w jego pobliżu.
Zastosuj dodatnie ciśnienie powietrza, aby usunąć wszelkie zanieczyszczenia.
Przesuwaj mikropipetę w kierunku neuronu, aż na błonie utworzy się wgłębienie, wskazujące na bliskość neuronów.
Zastosuj słabe ssanie, aby wciągnąć mały plaster membranowy do wnętrza mikropipety.
W ten sposób powstaje szczelne uszczelnienie, które zwiększa opór mikropipety, potwierdzając stabilne uszczelnienie.
Utrzymuj potencjał komórki na fizjologicznym potencjale spoczynkowym dla stabilności komórki.
Następnie zastosuj krótkie, silne ssanie, aby przerwać błonę łaty, ustanawiając bezpośrednie połączenie z wnętrzem komórki.
Ta konfiguracja całej komórki jest gotowa do rejestrowania aktywności elektrycznej neuronów.
Korzystając z pokrętła precyzyjnego ustawiania ostrości mikroskopu, za
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych