Ustanawianie opaski krosowej całej komórki do zapisu elektrofizjologicznego z siatkówki myszy z płaskim mocowaniem

Umieść płaską siatkówkę myszy w roztworze fizjologicznym w komorze nagrywającej.

Za pomocą mikroskopu umieść pipetę rejestrującą nad siatkówką. Pipeta zawiera elektrodę i jest wypełniona roztworem wewnętrznym.

Zastosuj nadciśnienie, aby zapobiec zatkaniu pipety, włóż ją do siatkówki, a następnie zmniejsz ciśnienie, aby uniknąć uszkodzenia tkanki.

Przesuń pipetę w kierunku komórek amakrynowych gwiazdotwórczych lub SAC, które są synaptycznie połączone z innymi neuronami.

Zbliż się do komórki, aż na jej błonie utworzy się wgłębienie. Zwolnij nacisk, pozwalając membranie przylegać do końcówki.

Użyj prądu ujemnego, aby narysować plaster membranowy do pipety.

Zastosuj ssanie, aby rozerwać membranę, ustanawiając ciągłość między elektrodą a cytoplazmą komórki, techniką zwaną opaską krosową całej komórki.

Aby zarejestrować prądy synaptyczne, należy przyłożyć napięcie, aby utrzymać stały potencjał błony SAC.

Neuroprzekaźniki uwalniane przez neurony połączone synaptycznie wyzwalają przepływ jonów przez receptory synaptyczne SAC, mierzony przez elektrodę.

W tej procedurze przefiltruj roztwór wewnętrzny przez filtr strzykawkowy do niestandardowego filamentu do wypełniacza. Następnie włóż filame