In vivo (in vivo) Obrazowanie wapnia za pomocą synaptycznie zlokalizowanych czujników wapnia u Drosophila melanogaster
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:39 min. • July 8th, 2025
Napraw muchę z mózgiem odsłoniętym w komorze obrazowania.
Mucha wykazuje ekspresję genetycznie zakodowanego wskaźnika wapnia lub GECI zlokalizowanego w dendrytach ciała grzyba lub neuronach MB.
Połącz muchę z przewodami elektrycznymi i umieść igłę dostarczającą zapach w pobliżu jej anteny.
Dodaj kroplę buforową na odsłonięty mózg, umieść muchę pod mikroskopem i podłącz igłę do systemu dostarczania zapachu.
Pobudź GECI i dostarcz bodziec zapachowy.
Substancja zapachowa wiąże się z receptorami neuronów czuciowych anteny, generując potencjały czynnościowe.
Potencjały czynnościowe rozchodzą się z neuronów czuciowych do neuronów projekcyjnych, indukując uwalnianie neuroprzekaźników i ułatwiając napływ wapnia i fluorescencję GECI w postsynaptycznych neuronach MB.
Powtórz z drugim i trzecim środkiem zapachowym.
Następnie zastosuj pierwszy zapach z porażeniem prądem, a drugi bez.
Na koniec dostarcz trzy zapachy bez wstrząsów. Zapisz fluorescencję.
Zmniejszona fluorescencja w odpowiedzi na bodziec związany z wstrząsem w porównaniu z grupą kontrolną ujawnia plastyczność synaptyczną wywołaną uczeniem się.
Aby zobrazować wskaźniki wapnia oparte na GFP, należy dostroić laser mikroskopu wielofot
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych