Name: Wychwytywanie limfocytów T CD4+ za pomocą jednorazowego chipa mikroprzepływowego dla HIV (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Poznaj metodę wychwytywania limfocytów T CD4+ za pomocą jednorazowego chipa mikroprzepływowego PDMS do diagnostyki HIV. To precyzyjne urządzenie umożliwia izolację komórek w warunkach o ograniczonych zasobach.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol>
<li>Przygotować kanał mikrofluidyczny z powierzchnią biotynilowaną przeciw CD4+.</li>
<li>Wstrzyknąć 10 ml próbki krwi do kanału mikrofluidycznego za pomocą pompy strzykawkowej z prędkością 5 ml/min.</li>
<li>Wypłukać krew roztworem PBS z prędkością 20 ml/min przez 20 min.</li>
<li>Wstrzyknąć rozcieńczony roztwór lizujący FACS (rozcieńczony z roztworu zapasowego do 10% w PBS) z prędkością 5ul/min przez 15 min.</li>
<li>Inkubować przez 15 min.</li>
<li>Wstrzyknąć roztwór przeciwciał pierwotnych CD3+ (rozcieńczony z roztworu zapasowego do 10% w PBS) z prędkością 5 ml/min przez 20 min.</li>
<li>Inkubować przez 2 godziny.</li>
<li>Wypłukać kanał roztworem PBS z prędkością 5 ml/min przez 15 min.</li>
<li>Wstrzyknąć jednocześnie 20% przeciwciał AF488 CD4+, 0,2% roztwór zapasowy DAPI oraz 10% przeciwciał wtórnych CD3+ z prędkością 5 ml/min przez 20 min.</li>
<li>Inkubować przez 20 min.</li>
<li>Wypłukać kanał roztworem PBS z prędkością 5 ml/min przez 15 min.</li>
<li>Policzyć komórki pod mikroskopem fluorescencyjnym: <ol>
<li>Biały (optyczny) - czarno-białe: komórki i zanieczyszczenia</li>
<li>UV(DAPI) - niebieskie: tylko komórki</li>
<li>Niebieski(CD4+) - zielone: limfocyty T i monocyty</li>
<li>Zielony(CD3+) - czerwone: tylko limfocyty T</li>
</ol></li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>mikrokanał PDMS</td><td></td><td></td><td></td><td>Wykonane za pomocą formy z SU-8</td></tr><tr><td>Krew</td><td></td><td></td><td></td><td>Krew donowana od zdrowego dawcy. Mass General Hospital, 10 X leukocyty o wysokiej gęstości (WBC) lub Brigham and Women&amp;rsquo;Szpital.</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Bufor</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>1x Dulbecco&amp;rsquo;bufor fosforanowy (PBS)</td></tr><tr><td>roztwór lizujący FACS</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>Rozcieńczono do stężenia 10% z roztworu zapasu w buforze PBS.</td></tr><tr><td>biotynylowane przeciwciało anty-CD4+</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>Powierzchnia przygotowana z biotynilowanego przeciwciała anty-CD4+, rozcieńczonego do 10% z roztworu zapasowego w PBS/BSA po wymieszaniu 0,2 mg roztworu zapasowego z 1 ml wody dejonizowanej. </td></tr><tr><td>przeciwciało kozie anty-hCD3delta</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>Rozcieńczono do stężenia 10% z roztworu stokowego w PBS</td></tr><tr><td>królicze przeciwciało przeciwko kozim IgG znakowane PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>Przeciwciało wtórne przeciwko przeciwciału anty-CD3, rozcieńczone do 10% z roztworu zapasu w PBS</td></tr><tr><td>anty-ludzkie CD4+</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>oznaczone Alexa Fluor 488, rozcieńczone do stężenia 20% z roztworu zapasowego w PBS. </td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>4&amp;rsquo;6-dianidyno-2-fenyloindol, roztwór dichlorowodorku, rozcieńczony do stężenia 0,2% z roztworu zapasowego w PBS.</td></tr></tbody></table>

wychwytywanie limfocytów t cd4+ z wykorzystaniem jednorazowego chipa mikroprzepływowego w badaniach nad hiv

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

Wychwytywanie limfocytów T CD4+ z wykorzystaniem jednorazowego chipa mikroprzepływowego w badaniach nad HIV

Witam, nazywam się Richard Lin i jestem badaczem w grupie profesora TI Mercy w dywizji nauk o zdrowiu i technologii Harvard MIT. Projekt, nad którym pracuję, polega na ilościowym określeniu i wychwytywaniu limfocytów T CD4+ oraz C3+ z krwi pacjentów do zastosowania w warunkach ograniczonych zasobów.Bezpośrednio przede mną znajduje się urządzenie do mikroprzepływów wykonane z PDMS, czyli polidimetylosiloksanu. Wysokość samego kanału w urządzeniu wynosi 50 µm, a całkowita objętość urządzenia to 10 µL. Jest to niezwykle precyzyjne urządzenie, którego użyjemy do wychwytywania limfocytów T pomocniczych.W zasadzie jest to standard diagnostyczny dla pacjentów z HIV. Powierzchnia urządzenia mikrofluidycznego została już przygotowana za pomocą białka, a w strzykawce znajdują się przeciwciała przeciwko CD4. Obecnie mamy jedynie bufor biologiczny PBS o pH 7.4, który teraz wprowadzimy do kanału, aby wypłukać nadmiar przeciwciał przeciwko CD4.Na tym etapie nie ma potrzeby kontrolowania przepływu, ponieważ staramy się jedynie wypłukać nadmiar substancji i szybkość przepływu nie ma tutaj większego znaczenia. Tutaj znajdują się wloty urządzenia, a wyloty znajdują się po mojej lewej stronie i po Pa

cd4-t-lymphocyte-capture-using-a-disposable-microfluidic-chip-for-hiv

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Przechwytywanie limfocytów T CD4+ za pomocą jednorazowego mikroczipu mikrofluidalnego w celu wykrycia HIV

Wychwytywanie komórek przy użyciu urządzenia mikrofluidycznego

Niniejszy eksperyment w formie wizualizacji jest przewodnikiem po wykorzystaniu fluorescencyjnego klonu molekularnego HIV do eksperymentów z obrazowaniem konfokalnym żywych komórek.

Wizualizacja transferu HIV między komórkami z wykorzystaniem fluorescencyjnych klonów HIV oraz konfokalnej mikroskopii żywych komórek

Opracowaliśmy wektor lentiwirusem, który oprócz LTR reagującego na Tat posiada element odpowiedzi Rev (RRE), umożliwiający regulację ekspresji genu reporterowego w sposób zależny od Tat i Rev HIV-1. Wektor ten pozwala na specyficzne wykrywanie replikującego się HIV w żywych komórkach poprzez ekspresję GFP.

Specyficzne znakowanie komórek zakażonych HIV-1 przy użyciu zależnego od Rev wektora lentiwirusego wykazującego ekspresję zielonego białka fluorescencyjnego

Zintegrowany mikroprzepływowy układ termoplastyczny został opracowany do użytku jako diagnostyka molekularna. Chip wykonuje ekstrakcję kwasów nukleinowych, odwrotną transkryptazę i PCR. Opisano metody wytwarzania i uruchamiania chipa.

Wytwarzanie chipów mikroprzepływowych i metoda wykrywania grypy

W tym artykule prezentujemy mikroprzepływowy chip do analizy pojedynczych komórek. Umożliwia ilościowe oznaczanie wewnątrzkomórkowych białek, enzymów, kofaktorów i drugich przekaźników za pomocą testów fluorescencyjnych lub testów immunologicznych.

Mikroprzepływowy chip do wszechstronnej analizy chemicznej pojedynczych komórek

Ten protokół opisuje metody konstruowania humanizowanego modelu myszy szpiku kostnego/wątroby/grasicy z opartą na komórkach macierzystych odpornością na zakażenie wirusem HIV.

Zmodyfikowana odporność na zakażenie wirusem HIV oparta na komórkach macierzystych w humanizowanym modelu myszy

Opisana jest metodologia ilościowego oznaczania ekspresji 96 genów i 18 białek powierzchniowych przez pojedyncze komórki ex vivo, pozwalająca na identyfikację genów i białek o zróżnicowanej ekspresji w komórkach zakażonych wirusem w stosunku do komórek niezainfekowanych. Stosujemy podejście do badania limfocytów T CD4 + zakażonych SIV wyizolowanych od makaków rezusów.

Kwantyfikacja mRNA i ekspresji białek powierzchniowych w pojedynczych komórkach w limfocytach T CD4 + zakażonych małpim wirusem niedoboru odporności wyizolowanych od makaków rezusów

Prezentowany tutaj jest protokół dla metody obrazowania fluorescencyjnego, multiplex immunofluorescencyjna metodawykrywania DNA, RNA i proteiny (MICDDRP), metoda zdolna do jednoczesnej fluorescencyjnej wizualizacji pojedynczych komórek białka wirusowego i kwasów nukleinowych o różnym typie i nici. Takie podejście można zastosować do różnych systemów.

Obrazowanie fluorescencyjne z multipleksem pojedynczych komórek w celu wizualizacji wirusowych kwasów nukleinowych i białek oraz monitorowania zakażeń HIV, HTLV, HBV, HCV, Zika i grypy

Tutaj prezentujemy protokół, w którym pojedyncze komórki są monitorowane pod kątem ostrych zdarzeń i produktywnego zakażenia HIV-1 na urządzeniu nanofluidycznym. Dane obrazowe definiują interakcje wirus-receptor gospodarza i dynamikę szlaku sygnałowego. Jest to pierwsza metoda nanofluidycznej, wysokoprzepustowej, podłużnej hodowli pojedynczej komórki i obrazowania w celu zbadania kinetyki sygnalizacji i interakcji molekularnych.

Jednokomórkowa charakterystyka napływu wapnia i zakażenia HIV-1 przy użyciu wieloparametrowej platformy optofluidycznej

Kliniczny chip mikroprzepływowy jest ważną techniką analizy biomedycznej, która upraszcza wstępne przetwarzanie próbek krwi pacjenta klinicznego i immunofluorescencyjnie barwi krążące komórki nowotworowe (CTC) in situ na chipie, umożliwiając szybkie wykrycie i identyfikację pojedynczego CTC.

Kliniczna mikroprzepływowa platforma chipowa do izolacji wszechstronnych krążących komórek nowotworowych

Komórki nowotworowe krążące (CTC) są kluczowe dla badania postępu nowotworów i przerzutów. Niniejszy artykuł przedstawia wysokoprzepustowy, zintegrowany protokół wzbogacania CTC oraz sekwencjonowania pojedynczego CTC, poprawiający efektywność przechwytywania i czystość CTC, jednocześnie zmniejszając koszty zanieczyszczenia i sekwencjonowania, co przyczynia się do rozwoju badań i zastosowań klinicznych w precyzyjnej onkologii.

Technologia sortowania komórek nowotworowych o wysokiej przepustowości i sekwencjonowania pojedynczych komórek oparta na mikrofluidice

Poznaj metodę wychwytywania limfocytów T CD4+ za pomocą jednorazowego chipa mikroprzepływowego PDMS do diagnostyki HIV. To precyzyjne urządzenie umożliwia izolację komórek w warunkach o ograniczonych zasobach.

Wychwytywanie limfocytów T CD4+ z wykorzystaniem jednorazowego chipa mikroprzepływowego w badaniach nad HIV

Przeglądaj więcej filmów