Name: Wywołana przez pasożyty genetycznie napędzana autoimmunologiczna choroba serca Chagasa w modelu kurczaka (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Odkryj mechanizm integracji kDNA Trypanosoma cruzi do genomu kurczaka i rozwój autoimmunologicznej kardiomiopatii Chagasa. Metoda PCR i analiza histologiczna pozwalają badać patogenezę choroby.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Jesteśmy wdzięczni Nancy R. Sturm z Katedry Immunologii, Mikrobiologii i Biologii Molekularnej w David Geffen School of Medicine na University of California w Los Angeles za krytyczną lekturę manuskryptu. Badanie było wspierane przez National Council of Research-CNPq oraz Foundation for Research Development-FAPDF w Brazylii. Dziękujemy za pomoc techniczną Alessandro O. Souza, Maria C. Guimaro, Ciro Cordeiro, Ana de Cassia Rosa, Roseneide Alves oraz Rafael Andrade z University of Brasilia w Brazylii.

<ol><li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+chagas%27+disease%3A+parasite+persistence+and+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22CMR%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of chagas' disease: parasite persistence and autoimmunity.</a> CMR. 24, 592-630 (2011).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chagas+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Postg.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Chagas disease.</a> Postg. Med. J. 82, 788-798 (2006).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypanosoma+cruzi+in+the+chicken+model%3A+Chagas-like+heart+disease+in+the+absence+of+parasitism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl.+Trop.+Dis%22%5BJournal%5D)">Trypanosoma cruzi in the chicken model: Chagas-like heart disease in the absence of parasitism.</a> PLoS Negl. Trop. Dis. 5, e1000(2011).</li>
<li>Hecht, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+DNA+transferred+from+American+trypanosomes+to+human+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inheritance of DNA transferred from American trypanosomes to human hosts.</a> PLoS One. 5, e9181(2010).</li>
<li>Xing, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+the+ERK+MAPK+in+the+regulation+of+proinflammatory+and+apoptotic+responses+in+chicken+macrophages+infected+with+H9N2+avian+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Roles of the ERK MAPK in the regulation of proinflammatory and apoptotic responses in chicken macrophages infected with H9N2 avian influenza virus.</a> J. Gen. Virol. 91, 343-351 (2010).</li>
<li>Kim, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIK+and+IKKbeta+interdependence+in+NF-kappaB+signalling--flux+analysis+of+regulation+through+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Biosystems%22%5BJournal%5D)">NIK and IKKbeta interdependence in NF-kappaB signalling--flux analysis of regulation through metabolites.</a> Biosystems. 99, 140-149 (2010).</li>
<li>Karakhanova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK%2Fp38+MAP-kinases+and+PI3K+are+involved+in+the+differential+regulation+of+B7-H1+expression+in+DC+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">ERK/p38 MAP-kinases and PI3K are involved in the differential regulation of B7-H1 expression in DC subsets.</a> Eur. J. Immunol. 40, 254-266 (2010).</li>
<li>Finsterer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heart+in+human+dystrophinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiology%22%5BJournal%5D)">The heart in human dystrophinopathies.</a> Cardiology. 99, 1-19 (2003).</li>
<li>Nitz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heritable+integration+of+kDNA+minicircle+sequences+from+Trypanosoma+cruzi+into+the+avian+genome%3A+insights+into+human+Chagas+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Heritable integration of kDNA minicircle sequences from Trypanosoma cruzi into the avian genome: insights into human Chagas disease.</a> Cell. 118, 175-186 (2004).</li>
<li>Simpson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetoplast+DNA+in+trypanosomid+flagellates%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Cytol%22%5BJournal%5D)">Kinetoplast DNA in trypanosomid flagellates.</a> Int. Rev. Cytol. 99, 1-19 (1986).</li>
<li>Bonney, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat-killed+Trypanosoma+cruzi+induces+acute+cardiac+damage+and+polyantigenic+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Heat-killed Trypanosoma cruzi induces acute cardiac damage and polyantigenic autoimmunity.</a> PLoS One. 6, e14571(2011).</li>
<li>Moser, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Trypanosoma+cruzi+by+DNA+amplification+using+the+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of Trypanosoma cruzi by DNA amplification using the polymerase chain reaction.</a> J. Clin. Microbiol. 27, 1477-1482 (1989).</li>
<li>Sturm, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+and+schizodeme+classification+of+Trypanosoma+cruzi+cells+by+amplification+of+kinetoplast+minicircle+DNA+sequences%3A+use+in+diagnosis+of+Chagas%27+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection and schizodeme classification of Trypanosoma cruzi cells by amplification of kinetoplast minicircle DNA sequences: use in diagnosis of Chagas' disease.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 33, 205-214 (1989).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+pathology+in+chagas+disease--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Mem.+Inst.+Oswaldo+Cruz%22%5BJournal%5D)">Evolution and pathology in chagas disease--a review.</a> Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 101, 463-491 (2006).</li>
<li>Yurchenko, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+Leishmania+minicircle+kinetoplast+DNA+classes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Structure of Leishmania minicircle kinetoplast DNA classes.</a> J. Clin. Microbiol. 37, 1656-1657 (1999).</li>
<li>Simpson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genomic+organization+of+guide+RNA+genes+in+kinetoplastid+protozoa%3A+several+conundrums+and+their+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">The genomic organization of guide RNA genes in kinetoplastid protozoa: several conundrums and their solutions.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 86, 133-141 (1997).</li>
<li>Thomas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-universal+transcription+factor%3F+The+Leishmania+tarentolae+TATA+box-binding+protein+LtTBP+associates+with+a+subset+of+promoters%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">A non-universal transcription factor? The Leishmania tarentolae TATA box-binding protein LtTBP associates with a subset of promoters.</a> Int J. Parasitol. 36, 1217-1226 (2006).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano żadnych konfliktów interesów.

W przeciwieństwie do ssaków podatnych na dożywotne infekcje T. cruzi, kurczaki są oporne na zakażenie T. cruzi. Główną zaletą modelu kurczaka jest eliminacja infekcji na wczesnym etapie rozwoju embrionalnego układu odpornościowego. W konsekwencji jedyne pozostałe w organizmie kurczaka DNA pasożyta jest zintegrowane w kilku loci.
Użycie optymalnej ilości wirulentnych trypomastigot T. cruzi do inokulacji zapłodnionych jaj jest krytycznym krokiem w celu uzyskania integracji minikół kDNA z genomem zarodka kury. Odsetek żywych piskląt wykluwających się z jaj inokulowanych 100 trypomastigotami jest czterokrotnie wyższy niż w przypadku zastosowania 500 pasożytów. Należy zadbać o to, aby zawiesinę pasożytów w 10 μL pożywki hodowlanej wstrzyknąć do komory powietrznej jaja. Nie powinno dojść do wycieku białka jaja. W optymalnych warunkach wewnątrzkomórkowa infekcja pasożytnicza następuje w ciągu kilku godzin po inkubacji, a namnażanie się pasożytów w komórkach gospodarza trwa przez jeden tydzień; następnie infekcja jest eliminowana przez odporność wrodzoną. Integracja kDNA wymaga żywej infekcji, a inokulacja samych minikół do jaj z wczesnymi zarodkami kur nie prowadzi do integracji. Zarodki kDNA-dodatnie oraz kontrolne powinny być przetrzymywane w kontrolowanych warunkach w temperaturze 37,5 °C i wilgotności 65%. Pisklęta są utrzymywane w klatkach przez dwa tygodnie w temperaturze pokojowej 33 °C. Następnie kury są przetrzymywane w klatkach na zawieszonych regałach, oddzielonych przejściami o szerokości 1,5 metra w pomieszczeniu o temperaturze 22 °C z filtrowanym powietrzem i nadciśnieniem przy stałym wyciągu, aby zapewnić warunki dobrostanu zwierząt. Ptaki dorosłe są karmione paszą dla kur i mają dostęp do zdatnej do picia bieżącej wody, aby osiągnąć pełny wzrost i dojrzałość, zaczynając składać jaja w piątym miesiącu życia. Zachowanie procedur higienicznych jest niezbędne dla powtarzalności wyników podczas pracy z T. cruzi inokulowanym do zapłodnionych jaj kurzych.
W modelu kurzym infekcje T. cruzi są eliminowane po rozwoju układu odpornościowego we wczesnym okresie wzrostu zarodka. Oprócz bycia wolnymi od infekcji, pisklęta wykluwające się z jaj inokulowanych T. cruzi, przy braku swoistych przeciwciał, wykazują tolerancję na antygeny pasożyta. Odrzucenie komórek docelowych serca przez limfocyty cytotoksyczne (minimalna jednostka odrzucenia, Rysunek 3) obserwuje się u kur z mutacją kDNA wykazujących modyfikacje genotypowe i załamanie nadzoru immunologicznego 3. Genotypowo zmodyfikowane limfocyty T wykazują przyspieszone odrzucanie własnych tkanek organizmu. Głównym miejscem zmiany chorobowej jest serce, co stanowi charakterystyczną cechę choroby Chagasa. Przejście ze stanu fizjologicznego (nadzoru) do stanu fizjopatologicznego obserwuje się u kur z mutacją kDNA, u których występuje klonalna proliferacja limfocytów cytotoksycznych 3.
Ten międzykrólestwowy model systemowy wykazuje indukowaną przez pasożyta, uwarunkowaną genetycznie chorobę autoimmunologiczną (Rysunek 6), wynikającą z modyfikacji genomu spowodowanych integracjami minikół kDNA T. cruzi. Modyfikacje te nie występują u kurcząt wyklutych z jaj inokulowanych Lb.
Zjawisko to sugeruje, że leczenie eksperymentalne zapalnej autoimmunologicznej kardiomiopatii u kurcząt z mutacją kDNA może wymagać farmakologicznego tłumienia progenitorów szpiku kostnego o specyficznym fenotypie limfocytów T naciekających mięsień sercowy oraz transplantacji histokompatybilnego, zdrowego szpiku kostnego w celu zapobieżenia odrzuceniu własnej tkanki.

<table><tbody><tr><td>Rekombinowana polimeraza DNA Taq</td><td>Invitrogen</td><td>11615-010</td><td></td></tr><tr><td>Polimeraza DNA Platinum Taq</td><td>Invitrogen</td><td>10966-030</td><td> </td></tr><tr><td>System znakowania DNA za pomocą losowych starterów</td><td>Invitrogen</td><td>18187-013</td><td> </td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Eco&lt;/em&gt;RI </td><td>Invitrogen</td><td>15202-021</td><td> </td></tr><tr><td> &lt;em&gt;Mbo&lt;/em&gt;I </td><td>Invitrogen</td><td>15248-016</td><td> </td></tr><tr><td>Zestaw dNTP, roztwory 100mM</td><td>GE Healthcare</td><td>28-4065-51</td><td> </td></tr><tr><td>Amersham Hybond - N&lt;sup&gt;+&lt;/sup&gt; -- nr kat.</td><td>GE Healthcare</td><td>RPN303B</td><td> </td></tr><tr><td>Zestaw PlasmidPrep Mini Spin</td><td>GE Healthcare</td><td>28-9042-70</td><td> </td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Nsi&lt;/em&gt;I </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R5884 1KU</td><td> </td></tr><tr><td>DNA, sól sodowa sperm ryb</td><td>AMRESCO</td><td>0644-10G</td><td> </td></tr><tr><td>Przeciwciało mysie przeciwkurzy Bu-1b</td><td>SouthernBiotech</td><td>8370-02</td><td> </td></tr><tr><td>Przeciwciało mysie przeciwkurzy CD45</td><td>SouthernBiotech</td><td>8270-08</td><td> </td></tr><tr><td>Przeciwciało mysie przeciwkurzy TCR&amp;#947;&amp;#948;</td><td>SouthernBiotech</td><td>8230-08</td><td> </td></tr><tr><td>Przeciwciało mysie przeciwkurzy CD8&amp;alpha;</td><td>SouthernBiotech</td><td>9220-02</td><td> </td></tr><tr><td>Przeciwciało mysie przeciwkurzym monocytom/makrofagom</td><td>SouthernBiotech</td><td>8420-02</td><td> </td></tr><tr><td>Termocykler MyCycle</td><td>Bio-Rad</td><td>580BR 5501</td><td> </td></tr></tbody></table>

indukowana przez pasożyta genetycznie sterowana autoimmunologiczna choroba serca chagasa w modelu kurzym

Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

Ostre infekcje *Trypanosoma cruzi* nabyte w okresie niemowlęcym i dzieciństwie wydają się bezobjawowe, jednak około jednej trzeciej przypadków z przewlekłą infekcją wykazuje objawy choroby Chagasa po trzech dekadach lub później. Autoimmunizacja oraz przetrwanie pasożyta to konkurujące ze sobą teorie wyjaśniające patogenezę choroby Chagasa. 1, 2Aby rozróżnić role, jakie odgrywa utrzymywanie się pasożyta oraz autoimmunizacja w chorobie Chagasa, inokulujemy *T. cruzi* w komorze powietrznej zapłodnionych jaj. Dojrzały układ odpornościowy kurczaka stanowi szczelną barierę biologiczną przeciwko T. cruzi a infekcja zostaje wyeliminowana po wykształceniu się układu odpornościowego pod koniec pierwszego tygodnia wzrostu 3Pisklęta w momencie wyklucia są wolne od pasożytów, jednak w ich genomie zachowane pozostają zintegrowane minikoła mitochondrialnego kDNA (kinetoplastycznego DNA) pasożytów, które są przekazywane potomstwu. Potwierdzenie integracji minikół kDNA w genomie kurczaka uzyskano za pomocą ukierunkowanej metody prime TAIL-PCR, hybrydyzacji Southern, klonowania oraz sekwencjonowania. 3, 4Integracje minikoł kDNA przerywają ramki odczytu dla transkrypcji oraz czynników układu odpornościowego, fosfatazy (GTPaza), cyklazy adenylanowej i fosforylaz (PKC, aktywator NF-Kappa B, PI-3K) związanych z fizjologią, wzrostem i różnicowaniem komórek. 3, 5-7or innych funkcji genów. W przypadku kurcząt z mutacją kDNA obserwuje się ciężkie zapalenie mięśnia sercowego wywołane odrzuceniem docelowych włókien serca przez efektorowe limfocyty cytotoksyczne, co objawia się zapalną kardiomiopatią podobną do tej występującej w przebiegu choroby Chagasa u ludzi. Co istotne, u dorosłych kurcząt z pęknięciem kDNA w obrębie genu dystrofiny w chromosomie 1 występuje niewydolność serca oraz osłabienie mięśni szkieletowych. 8Podobne zmiany genotypowe wiążą się z destrukcją tkanek prowadzoną przez efektorowe limfocyty CD45+, CD8γδ+ oraz CD8α+. W związku z tym infekcja tym pierwotniakiem może indukować genetycznie uwarunkowaną chorobę autoimmunologiczną.

Inokulacja Trypanosoma cruzi do zapłodnionych jaj przed inkubacją powoduje integrację minikołk kDNA pasożyta w genomie komórek embrionalnych. Krzyżowanie wykazuje pionowy transfer mutacji na potomstwo. kDNA integruje się z regionami kodującymi w kilku chromosomach, a kurczaki giną w wyniku zapalnej autoimmunologicznej choroby serca.

Indukowana przez pasożyta genetycznie sterowana autoimmunologiczna choroba serca Chagasa w modelu kurzym

Ostre infekcje *Trypanosoma cruzi* nabyte w okresie niemowlęcym i dzieciństwie wydają się przebiegać bezobjawowo, jednak około jedna trzecia przypadków zakażeń przewlekłych...

Choroba Cha to stan kliniczny, który rozwija się w wyniku przewlekłych infekcji wywołanych przez ate prot i tno mausi. Choroba ta atakuje serce osób zakażonych w sposób przewlekły kilka dekad po nabyciu infekcji. Model systemowy obejmujący różne królestwa wykazuje, że jaja kurzych są podatne na infekcje Taz macro cruise.W ciągu pierwszego tygodnia wzrostu zarodka eksperymenty wykazują, że wolne od infekcji kurczaki, które wbudowały pasożyta KA w swoje genomy, umierają z powodu choroby Chagasa serca; odpowiednie warunki bytowe, zapas pożywienia i wody zapewniają dobrostan zwierząt. Potrójną masę przelotową, dobre formy pływające, uzyskuje się z hodowli tkankowej. Prześwietlono tio i jaja, aby ukazać ich kontrolę pęcherzykową.Jaja nie poddawano inokulacji. Jaja kontrolne (mock) inokulowano 10 µL pożywki hodowlanej. Otwór uszczelniono taśmą Easi-tape 100 viral FL mania.Brazilians is pro master. Kozy inokulują komorę powietrzną zapłodnionego jaja kurzego 100 wiral i pułapka macro triple master kozy w 10 µL pożywki wapniowej inokulują komorę powietrzną wirtualizowanego jaja kurzego. Jaja są inkubowane w temperaturze 37 °C i wilgotności 65% przez jeden do jednego dnia z delikatną rotacją co 30 minut, pisklęta wykluwają się jednakowo z jaj inokulowanych renoso macro oraz z kontroli mark.Homy są hodowane do wieku dorosłego. Próbki krwi pobiera się z żył skrzydeł. Krew przenosi się do stożkowych probówek o pojemności 15 Ml.Komórki mononuklearne oddziela się za pomocą wirowania na gradiencie FICO, po czym zmywa się biały osad komórkowy i odrzuca frakcję oddzielną. Genomiczne DNA jest ekstrahowane z mononuklearnych komórek krwi. Przygotuj probówki stożkowe o pojemności 1,5 ml zgodnie z planem PCR. Reakcja PCR jest przeprowadzana w celu amplifikacji chroy nuclear G-N-A-N-G-N-A oraz pls GNA kg NA. Przy użyciu specyficznych zestawów starterów umieść probówki z reakcją w termocyklerze i uruchom program.Wyjmij probówki z termocyklera. Przeanalizuj produkty PCR. Produkty PCR są rozdzielane za pomocą elektroforezy w żelu Agarozowym.Prążki GNA w żelu przenosi się na dodatnio naładowaną membranę nylonową. Hybrydyzację przeprowadza się z zastosowaniem specyficznych sond znakowanych radioaktywnie, aby rozdzielić role odgrywane niezależnie przez trwałość pasożyta oraz przez odporność. W patogenezie choroby Chagasa wykorzystujemy model kurzy oporny na zakażenie T. cruzi, z wyjątkiem wczesnego wzrostu embrionalnego przed rozwojem układu odpornościowego; pisklęta wyklute z jaj inokulowanych T. cruzi są wolne od infekcji, jednak mitochondrialne kDNA pasożyta pozostaje w organizmie.Tylko kurczęta wyklute z jaj zaszczepionych tzo macro wykazują prążki kg a, mimo że DNA nie występuje w genomie kurczaka. Kurczęta wyklute z jaj zaszczepionych pro master goats z Leia Brazilian nie zachowują mitochondrialnych sekwencji kolistych w swoich genomach. Ścieżka jedna: pusta; ścieżka druga: kontrola GNA; ścieżki trzy i cztery: mock GS; ścieżki od pięć do 14: GS z kurcząt wyklutych z zakażonych jaj Las mania Brazilians.Ścieżka 15: amplikon *Lasia mania* z Brazylii, prążek o długości 750 par zasad uzyskany przy użyciu specyficznych zestawów starterów kDNA LB3 i LB5. Skan szachownicy LPCR-A przedstawia startery *Gallus gallus* zastosowane po trzech cyklach amplifikacji z zastosowaniem zwiększającej się temperatury (nested PCR). PCR przeprowadzono z użyciem różnych zestawów starterów kDNA.Cykl o niskiej rygorystyczności tworzy miejsca dla starterów i przyłączenia oraz cykl o wysokiej rygorystyczności zwiększa specyficzność produktów amplifikacji. Produkty PCR z mniejszej liczby cykli amplifikacji, które zhybrydyzowały z sondą KA, zostały sklonowane i zsekwencjonowane komercyjnie.Sekwencja przedstawia kg NA w niebieskim okręgu, żółte miejsce połączenia rekombinacyjnego o pośredniej mikrohomologii oraz zielone gallo ga GNA. Mapowanie kg NA integrującego genom kurczaka zostało przeprowadzone za pomocą techniki PCR z wykorzystaniem starterów docelowych (TP PCR). U dorosłych zmutowanych kurczaków z linii Cajun rozwinęła się choroba Chagasa w obrębie serca.Próbki kontrolne rozwijają się prawidłowo. Kurczaki z mutacją KDNA wykazują powiększenie sylwetki serca w obrazach rentgenowskich. Sekcja zwłok wykazuje, że kurczaki z grupy kontrolnej mają niewielki rozmiar serca.Kurczak Cajun, zmutowana linia kurcząt, wykazuje wodniczak osierdzia, toksyczność wodną oraz powiększenie serca. Kardiomegalia ta jest podobna do tej występującej w chorobie Chagasa. Serce kurczęcia kontrolowanego przez Moog wykazuje prawidłową histologię.Kurczak z mutacją kg wykazuje obecność tunelu w mięśniu sercowym, utworzonego przez limfocyty cytotoksyczne, który przebiega wzdłuż włókien sercowych. Sekwencje kolistych cząsteczek kDNA, które integrują się w regionach kodujących w kilku chromosomach, są ujawniane za pomocą zmodyfikowanej splotowej reakcji PCR, która łączy primery kDNA z zestawami primerów specyficznych dla gNA gospodarza. Kurczaki z mutacją gNA giną z powodu niewydolności serca i wykazują kardiomegalię.Badanie histopatologiczne wykazuje zapalenie mięśnia sercowego przypominające zapalenie mięśnia sercowego w chorobie Chagasa, z towarzyszącym przerostem serca. W przypadku zmutowanych kurcząt kg NA jest to choroba uwarunkowana genetycznie. Jest to pierwszy raz, kiedy kliniczne i patologiczne objawy choroby Chagasa zostały odwzorowane w czystym modelowym systemie międzykrólestwowym.Dziękujemy.

parasite-induced-genetically-driven-autoimmune-chagas-heart-disease

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Choroba Chagasa wywołana pasożytami o podłożu genetycznym, autoimmunologiczna kardiopatia u modelu kurczaka

Ten film demonstruje procedurę dożylnego wstrzykiwania komórek rakowych do naczyń krwionośnych błony kosmówkowo-omoczniowej kurczaka w celu wygenerowania modelu przerzutów raka CAM. Wstrzyknięte komórki ostatecznie tworzą rozproszone kolonie pojedynczych komórek nowotworowych, co pozwala na badanie inwazji raka i przerzutów.

Dożylne wstrzyknięcie komórek rakowych do naczyń błony moczowo-omoczniowej kurczaka: procedura mająca na celu ustalenie modelu raka błony moczowo-omoczniowej w celu zbadania inwazji raka i przerzutów

W tym protokole, fluorescencyjnie znakowane T. cruzi zostały wstrzyknięte do przezroczystych larw danio pręgowanego, a ruchliwość pasożyta zaobserwowano in vivo za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej z użyciem arkusza świetlnego.

Ustanowienie larw danio pręgowanego jako modelu zwierzęcego do badania ruchliwości Trypanosoma cruzi in vivo

Czynnik choroby Chagasa wywołany przez Trypanosoma cruzi powoduje długotrwałe, bezobjawowe infekcje, które nagle przekształcają się w klinicznie rozpoznaną patologię. Poniższy protokół badawczy opisuje krótkoterminowe rodzinne badanie epidemiologiczne mające na celu rozwikłanie infekcji T. cruzi przenoszonej drogą płciową z rodzica na potomstwo.

Przenoszenie płciowe amerykańskich trypanosomów z samców i samic na naiwnych partnerów

Rak jasnokomórkowy nerki z przerzutami jest chorobą, która nie posiada kompleksowego modelu zwierzęcego do dokładnych badań przedklinicznych. Protokół ten ilustruje dwa nowatorskie modele zwierzęce choroby: ortotopowo wszczepiony model myszy i model błony kosmówkowo-omoczniowej kurczaka, z których oba wykazują przerzuty do płuc przypominające przypadki kliniczne.

Porównanie modelu przerzutowego raka jasnokomórkowego nerki ustalonej w nerce myszy i na błonie kosmówkowo-omoczniowej kurczaka

Tutaj dostarczyliśmy metodę osiągnięcia stabilnej transfekcji pasożytów Eimeria kurczaka poprzez nukleofektyczne sporozoity lub merozoity drugiej generacji. Genetycznie zmodyfikowane pasożyty eimeriańskie wykazujące ekspresję heterologicznych genów antygenowych mogą być wykorzystywane jako nośniki szczepionek.

Nukleofekcja i rozmnażanie in vivo pasożytów Eimeria kurczaka

Prezentujemy model błony kosmówkowo-omoczniowej kurczaka jako alternatywny, nadający się do przeszczepu, model in vivo do wszczepiania ginekologicznych i urologicznych linii komórkowych raka oraz guzów pochodzących od pacjentów.

Wykorzystanie błony chorio-omoczniowej kurczaka w modelu in vivo do badania nowotworów ginekologicznych i urologicznych

Kurze zarodki, jako klasyczny model rozwojowy, są używane w naszym laboratorium do oceny kardiotoksyczności rozwojowej po ekspozycji na różne zanieczyszczenia środowiska. Metody ekspozycji i metody oceny morfologicznej/funkcjonalnej zostały opisane w niniejszym manuskrypcie.

Wykorzystanie zarodka kurzego jako potężnego narzędzia w ocenie kardiotoksyczności rozwojowej

Opisujemy wysokoprzepustowy test kolorymetryczny mierzący aktywność β-galaktozydazy w trzech etapach cyklu życia Trypanosoma cruzi, czynnika wywołującego chorobę Chagasa. Ten test może być używany do identyfikacji związków trypanobójczych w łatwy, szybki i powtarzalny sposób.

In vitro Badania przesiewowe leków przeciwko wszystkim etapom cyklu życia Trypanosoma cruzi przy użyciu pasożytów eksprymujących β-galaktozydazę

Protokół tutaj opisuje szczegółowe kroki do przeprowadzenia badań skuteczności leków w bioluminescencyjnym modelu zakażenia Trypanosoma cruzi, z naciskiem na pozyskiwanie, analizę i interpretację danych. Dostępne są również procedury rozwiązywania problemów i kontroli jakości w celu zminimalizowania problemów technicznych.

Demistyczne obrazowanie bioluminescencyjne in vivo mysiego modelu choroby Chagasa do badań skuteczności leków

W niniejszym filmie przedstawiono sposób indukowania autoimmunologicznego zapalenia przysadki u myszy szczepu SJL oraz metodę oceny stopnia jego nasilenia za pomocą badania histopatologicznego.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia przysadki u myszy szczepu SJL

Odkryj mechanizm integracji kDNA Trypanosoma cruzi do genomu kurczaka i rozwój autoimmunologicznej kardiomiopatii Chagasa. Metoda PCR i analiza histologiczna pozwalają badać patogenezę choroby.

Indukowana przez pasożyta genetycznie sterowana autoimmunologiczna choroba serca Chagasa w modelu kurzym

Przeglądaj więcej filmów