Indukowana przez pasożyta genetycznie sterowana autoimmunologiczna choroba serca Chagasa w modelu kurzym

Choroba Cha to stan kliniczny, który rozwija się w wyniku przewlekłych infekcji wywołanych przez ate prot i tno mausi. Choroba ta atakuje serce osób zakażonych w sposób przewlekły kilka dekad po nabyciu infekcji. Model systemowy obejmujący różne królestwa wykazuje, że jaja kurzych są podatne na infekcje Taz macro cruise.

W ciągu pierwszego tygodnia wzrostu zarodka eksperymenty wykazują, że wolne od infekcji kurczaki, które wbudowały pasożyta KA w swoje genomy, umierają z powodu choroby Chagasa serca; odpowiednie warunki bytowe, zapas pożywienia i wody zapewniają dobrostan zwierząt. Potrójną masę przelotową, dobre formy pływające, uzyskuje się z hodowli tkankowej. Prześwietlono tio i jaja, aby ukazać ich kontrolę pęcherzykową.

Jaja nie poddawano inokulacji. Jaja kontrolne (mock) inokulowano 10 µL pożywki hodowlanej. Otwór uszczelniono taśmą Easi-tape 100 viral FL mania.

Brazilians is pro master. Kozy inokulują komorę powietrzną zapłodnionego jaja kurzego 100 wiral i pułapka macro triple master kozy w 10 µL pożywki wapniowej inokulują komorę powietrzną wirtualizowanego jaja kurzego. Jaja są inkubowane w temperaturze 37 °C i wilgotności 65% przez jeden do jednego dnia z delikatną rotacją co 30 minut, pisklęta wykluwają się jednakowo z jaj inokulowanych renoso macro oraz z kontroli mark.

Homy są hodowane do wieku dorosłego. Próbki krwi pobiera się z żył skrzydeł. Krew przenosi się do stożkowych probówek o pojemności 15 Ml.

Komórki mononuklearne oddziela się za pomocą wirowania na gradiencie FICO, po czym zmywa się biały osad komórkowy i odrzuca frakcję oddzielną. Genomiczne DNA jest ekstrahowane z mononuklearnych komórek krwi. Przygotuj probówki stożkowe o pojemności 1,5 ml zgodnie z planem PCR. Reakcja PCR jest przeprowadzana w celu amplifikacji chroy nuclear G-N-A-N-G-N-A oraz pls GNA kg NA. Przy użyciu specyficznych zestawów starterów umieść probówki z reakcją w termocyklerze i uruchom program.

Wyjmij probówki z termocyklera. Przeanalizuj produkty PCR. Produkty PCR są rozdzielane za pomocą elektroforezy w żelu Agarozowym.

Prążki GNA w żelu przenosi się na dodatnio naładowaną membranę nylonową. Hybrydyzację przeprowadza się z zastosowaniem specyficznych sond znakowanych radioaktywnie, aby rozdzielić role odgrywane niezależnie przez trwałość pasożyta oraz przez odporność. W patogenezie choroby Chagasa wykorzystujemy model kurzy oporny na zakażenie T. cruzi, z wyjątkiem wczesnego wzrostu embrionalnego przed rozwojem układu odpornościowego; pisklęta wyklute z jaj inokulowanych T. cruzi są wolne od infekcji, jednak mitochondrialne kDNA pasożyta pozostaje w organizmie.

Tylko kurczęta wyklute z jaj zaszczepionych tzo macro wykazują prążki kg a, mimo że DNA nie występuje w genomie kurczaka. Kurczęta wyklute z jaj zaszczepionych pro master goats z Leia Brazilian nie zachowują mitochondrialnych sekwencji kolistych w swoich genomach. Ścieżka jedna: pusta; ścieżka druga: kontrola GNA; ścieżki trzy i cztery: mock GS; ścieżki od pięć do 14: GS z kurcząt wyklutych z zakażonych jaj Las mania Brazilians.

Ścieżka 15: amplikon *Lasia mania* z Brazylii, prążek o długości 750 par zasad uzyskany przy użyciu specyficznych zestawów starterów kDNA LB3 i LB5. Skan szachownicy LPCR-A przedstawia startery *Gallus gallus* zastosowane po trzech cyklach amplifikacji z zastosowaniem zwiększającej się temperatury (nested PCR). PCR przeprowadzono z użyciem różnych zestawów starterów kDNA.

Cykl o niskiej rygorystyczności tworzy miejsca dla starterów i przyłączenia oraz cykl o wysokiej rygorystyczności zwiększa specyficzność produktów amplifikacji. Produkty PCR z mniejszej liczby cykli amplifikacji, które zhybrydyzowały z sondą KA, zostały sklonowane i zsekwencjonowane komercyjnie.

Sekwencja przedstawia kg NA w niebieskim okręgu, żółte miejsce połączenia rekombinacyjnego o pośredniej mikrohomologii oraz zielone gallo ga GNA. Mapowanie kg NA integrującego genom kurczaka zostało przeprowadzone za pomocą techniki PCR z wykorzystaniem starterów docelowych (TP PCR). U dorosłych zmutowanych kurczaków z linii Cajun rozwinęła się choroba Chagasa w obrębie serca.

Próbki kontrolne rozwijają się prawidłowo. Kurczaki z mutacją KDNA wykazują powiększenie sylwetki serca w obrazach rentgenowskich. Sekcja zwłok wykazuje, że kurczaki z grupy kontrolnej mają niewielki rozmiar serca.

Kurczak Cajun, zmutowana linia kurcząt, wykazuje wodniczak osierdzia, toksyczność wodną oraz powiększenie serca. Kardiomegalia ta jest podobna do tej występującej w chorobie Chagasa. Serce kurczęcia kontrolowanego przez Moog wykazuje prawidłową histologię.

Kurczak z mutacją kg wykazuje obecność tunelu w mięśniu sercowym, utworzonego przez limfocyty cytotoksyczne, który przebiega wzdłuż włókien sercowych. Sekwencje kolistych cząsteczek kDNA, które integrują się w regionach kodujących w kilku chromosomach, są ujawniane za pomocą zmodyfikowanej splotowej reakcji PCR, która łączy primery kDNA z zestawami primerów specyficznych dla gNA gospodarza. Kurczaki z mutacją gNA giną z powodu niewydolności serca i wykazują kardiomegalię.

Badanie histopatologiczne wykazuje zapalenie mięśnia sercowego przypominające zapalenie mięśnia sercowego w chorobie Chagasa, z towarzyszącym przerostem serca. W przypadku zmutowanych kurcząt kg NA jest to choroba uwarunkowana genetycznie. Jest to pierwszy raz, kiedy kliniczne i patologiczne objawy choroby Chagasa zostały odwzorowane w czystym modelowym systemie międzykrólestwowym.

Dziękujemy.