December 8th, 2012
Paradygmat samodzielnego podawania dożylnego (IVSA) jest uważany za złoty standard w badaniu wzmacniających właściwości leków stosowanych u gryzoni. Niniejszy manuskrypt przedstawia procedury eksperymentalne i techniki chirurgiczne niezbędne do uzyskania wiarygodnych danych IVSA. W szczególności zwrócono uwagę na skrupulatne wszczepianie i konserwację cewnika.
Cześć, nazywam się Elizabeth Kotick i jestem tutaj z laboratorium dr Katherine Gill na oddziale uzależnień w Centrum Zdrowia Uniwersytetu McGill. Dzisiaj pokażę Ci, jak wykonać operację cewnikowania niezbędną do przeprowadzenia badań nad samodzielnym podawaniem dożylnym. Pokażę ci, jak wprowadzić cewnik, a także kilka wskazówek dotyczących utrzymania drożności cewnika.
Podczas sesji samodzielnego podawania nikotyny dożylnie, zwierzęta są podłączone do Tai za pomocą plastikowych rurek, a wlewy nikotyny są dostarczane przez dołączone pompy infuzyjne. Skrzynie operacyjne zostały zakupione od współpracowników medycznych. Każde pudełko wyposażone jest w dwie ultraczułe dźwignie myszy.
Jest kilka elementów, które należy przygotować przed operacją, aby wprowadzić cewnik do żyły. Igła o rozmiarze 20 musi być przystosowana, aby wsunąć rurkę w dół do żyły. Ogolić około dwóch centymetrów górnej części trzonu igły, tworząc kanał, który będzie używany do prowadzenia rurki cewnika do żyły.
Następnie przygotuj strzykawki do przepłukania i sprawdzenia cewnika. 12 centymetrów rurki jest przymocowane na jednym końcu do igły o rozmiarze 26 strzykawki, podczas gdy drugi koniec jest rozciągnięty na igle o rozmiarze 23. Aby ułatwić przymocowanie rurki do kaniuli cewnika, potrzebne będą dwie strzykawki, takie jak ta, jedna wypełniona heparynizowanym roztworem T-karcyny, a druga solą fizjologiczną.
Na koniec przygotuj nasadkę kaniuli cewnika. Kaniula cewnika musi być zaślepiona, aby zapobiec przedostawaniu się zanieczyszczeń. Te czapki są wykonane przez rozciągnięcie plastikowej rurki na igły o średnicy 23
.Rurka jest odcinana o jeden centymetr od końcówki igły, a otwarty koniec jest topiony Aby uszczelnić rurkę, sól fizjologiczna jest przetłaczana przez igłę, aby upewnić się, że nie ma wycieków w nasadkach. Cewniki dla myszy uzyskano z Cam Cs w Wielkiej Brytanii. Odetnij nadmiar rurki z cewnika tak, aby znajdował się 1,2 centymetra od końca gruszki cewnika.
Następnie podłącz strzykawkę zawierającą sól fizjologiczną do zewnętrznej metalowej kaniuli cewnika i przepłucz w celu sprawdzenia, czy nie ma wycieków. Mis są znieczulane za pomocą gazowego fluoru zmieszanego z tlenem i są utrzymywane w znieczuleniu przez cały czas trwania zabiegu. Za pomocą rurki oddechowej poziomy zarówno tlenu, jak i fluoru są ustalane na podstawie masy ciała zwierzęcia i są dostosowywane w razie potrzeby podczas operacji, upewnij się, że zwierzę jest odpowiednio znieczulone, ściskając jego tylne nogi kleszczami i monitoruj mysz przez cały zabieg pod kątem niewydolności oddechowej i głębokości znieczulenia.
Ponieważ operacja trwa od 20 do 30 minut, nałóż lubrykant do oczu na oba oczy. Mysz jest golona przed zabiegiem. Przygotuj miejsce na podstawę cewnika na grzbiecie zwierzęcia.
Delikatnie podciągnij skórę na grzbiecie zwierzęcia i wykonaj małe podłużne nacięcie środkowej łopatki o długości około dwóch centymetrów. Zaczyna się w połowie pleców i rozciąga się tuż poniżej szyi. Rozsuń tkankę łączną, aby zrobić miejsce na podstawę cewnika i nałóż sól fizjologiczną na nacięcie.
Delikatnie ściągnij skórę po obu stronach nacięcia i odwróć zwierzę na drugą stronę. Prawa żyła nakrywkowa znajduje się powierzchownie pod skórą szyi i może być odsłonięta, wykonując płytkie nacięcie w kształcie litery S. Wykonaj ukośne cięcie o długości około jednego do dwóch centymetrów, rozciągające się od okolic prawego obojczyka, idąc w górę w kierunku szczęki zwierzęcia.
Rurka z podstawy cewnika musi zostać przeprowadzona przez brzuszne nacięcie w szyi, aby była dostępna do wprowadzenia do żyły. Prowadź kleszcze pod skórą ramion i przebij się przez tkankę łączną. Aby dotrzeć do tylnego nacięcia, przeciągnij rurkę przez skórę do brzusznego otworu wokół szyi zwierzęcia.
Chwyć koniec rurki za pomocą zacisków tętniczych i pozostaw ją zaciśniętą po prawej stronie zwierzęcia. Nałóż sól fizjologiczną na nacięcie, odizoluj prawą żyłę szyjną. Bardzo delikatnie odsuń tkankę łączną i tłuszczową, która może zasłaniać Ci widok i zlokalizuj żyłę.
Delikatnie unieś żyłę wokół góry i użyj kleszczyków krzywej, aby rozbić tkankę tłuszczową i tkankę łączną wokół i pod żyłą. Umieść zakrzywione kleszcze pod żyłą i otwórz je wolną ręką. Przełóż sterylny plastikowy pręt pod żyłą.
Gdy żyła jest podniesiona, usuń tylko tyle tłuszczu, aby zapewnić wyraźny, niezakłócony widok żyły. Okresowo wlewaj sól fizjologiczną na odsłoniętą żyłę, aby była mokra. Przygotuj węzły szwów wokół żyły, aby móc zabezpieczyć rurkę cewnika na miejscu po jej włożeniu do miejsca szyjnego.
Szwy pod żyłą na obu końcach i tworzą pojedynczy, bardzo luźny, otwarty węzeł na każdym końcu. Przeciągnij rurkę cewnika przez górny węzeł i zapętl ją przez nić szwu do reszty na prawym ramieniu. Przepchnij sól fizjologiczną przez cewnik, aby obciążyć rurkę i wprowadzić rurkę cewnika do żyły szyjnej.
Zmodyfikowana igła o rozmiarze 20 służy do przekłuwania żyły, zwilż zarówno żyłę, jak i igłę wprowadzającą solą fizjologiczną, aby zmniejszyć tarcie podczas wprowadzania, delikatnie pociągnij plastikowy pręt i włóż igłę bliżej dolnej części żyły. Tylko tyle, aby pół centymetra igły znalazło się w środku. Wsuń rurkę cewnika w dół igły i do żyły.
Nie powinno być żadnego oporu. Opór wskazywałby, że jesteś w tkance łącznej. Aby upewnić się, że znajdujesz się w żyle, spróbuj odciągnąć strzykawkę z cewnikiem, aby sprawdzić, czy jesteś w stanie pobrać krew.
Po umieszczeniu rurki na miejscu wyjmij igłę i dociśnij gruszkę cewnika do punktu wprowadzenia. Zawiąż dolny węzeł i upewnij się, że rurka cewnika przylega równo do pręta przed zawiązaniem drugiego węzła tuż nad bańką. To zabezpieczy cewnik na miejscu.
Usuń pręt i zrób drugi węzeł na każdym końcu. Wsuń rurkę cewnika i nici zszyj pod skórę przed szyciem. Użyj zacisku tętniczego, aby poprowadzić igłę do szwu przez skórę i zamknąć nacięcie.
Liczba szwów będzie się różnić w zależności od wielkości nacięcia Gdy zwierzę leży na brzuchu. Umieść podstawę cewnika na grzbiecie zwierzęcia. Nałóż sól fizjologiczną na nacięcie i wsuń podstawę cewnika pod skórę.
Upewnij się, że rurka jest minimalnie zapętlona i znajduje się pod podstawą, aby zminimalizować ryzyko jej przebicia. Zszyj skórę wokół podstawy cewnika. Liczba ściegów będzie zależeć od wielkości nacięcia.
Zwykle wystarczą trzy do czterech szwów. Upewnij się, że krew może być nadal pobierana z cewnika. Na koniec przepłucz cewnik heparynizowanym roztworem teiny, aby zapobiec infekcji i tworzeniu się skrzepów krwi.
Poluzuj rurkę podłączoną do kaniuli cewnika. Następnie wyjmij probówkę z solą fizjologiczną i szybko zastąp ją rurką ze strzykawki zawierającej heparynizowany roztwór T Carin. Przepłukać cewnik roztworem o stężeniu od 0,03 do 0,05 cm³.
Ponownie poluzuj rurkę podłączoną do kaniuli. Chwyć nasadkę cewnika kleszczami i jednym ruchem wyjmij rurkę z kaniuli i zastąp ją nasadką cewnika. Ten krok należy wykonać szybko, aby zapobiec wydostawaniu się krwi.
Przykręć białą osłonę cewnika, upewniając się, że osłona jest dobrze zamocowana bez przebijania końcówki kaniuli. Podaj myszy podskórne zastrzyki przeciwbólowe i antybiotykowe. Wstrzyknąć przeciwbólowy ketoprofen z jednej strony w dawce pięciu miligramów na kilogram, a antybiotyk amikacynę z drugiej strony w dawce 10 miligramów na kilogram.
Po przerwaniu znieczulenia pozwól myszy dojść do siebie w czystej klatce z łatwym dostępem do jedzenia i wody. Wiarygodne dane dotyczące samodzielnego podawania dożylnego można uzyskać, postępując zgodnie z technikami przedstawionymi w tym filmie. Ważne jest jednak zachowanie drożności cewnika.
Osiąga się to poprzez staranne umieszczenie cewnika w prawym przedsionku, codzienne płukanie cewnika przed i po sesjach operowych oraz upewnienie się, że kaniula cewnika jest stale zakryta, aby zapobiec przedostawaniu się zanieczyszczeń.
Ten artykuł opisuje paradygmat dożylnej samoadministracji (IVSA), standardową metodę badania wzmacniania działania leków u gryzoni. Koncentruje się na technikach chirurgicznych i procedurach wymaganych do uzyskania wiarygodnych danych IVSA, ze szczególnym uwzględnieniem implantacji i utrzymania cewników.
Intravenous self-administration (IVSA) in mouse models provides a critical preclinical platform for evaluating the reinforcing properties of compounds, enabling target validation in addiction and neuropsychiatric drug discovery. By allowing animals to self-administer test substances, this method reduces experimenter bias and yields quantitative data on drug intake patterns, supporting mechanistic de-risking and predictive confidence in early-stage target assessment. The approach facilitates translational continuity from target engagement to behavioral output, informing go/no-go decisions in portfolio prioritization for CNS therapeutics.
IVSA integrates into the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical assessment, serving as a functional assay for reinforcement liability that complements in vitro and in vivo pharmacokinetic profiling.