Szybki test przyłóżkowy skuteczności przeciwzakrzepowej enoksaparyny we krwi pełnej

Demonstracja szybkiego ilościowego testu hamowania krzepnięcia krwi przez niskocząsteczkową heparynę, enoksaparynę. Udział enoksaparyny ocenia się poprzez usunięcie jej wpływu poprzez trawienie heparynazą. Pełniejszy opis testu znajduje się szczegółowo w naszym opublikowanym artykule. ¹ Test nadal wymaga potwierdzenia klinicznego.

Tytułem wstępu odnosimy się tutaj do opublikowanych prac na temat przebiegu w czasie stężenia w osoczu heparyny drobnocząsteczkowej enoksaparyny u ludzi. Dzisiaj prezentujemy nasze wyniki za pomocą szybkiego testu przyłóżkowego dla heparyny drobnocząsteczkowej. W tym przypadku jednostką jest enoksaparyna.

Wyniki pokazane na tym slajdzie przedstawiają stężenie leku w osoczu u pacjentów, którzy otrzymywali lek przewlekle raz na dobę, 40 miligramów na dobę, oraz koszt czasu ostatniego podania do dalszego zaniku, można zobaczyć, że po około czterech godzinach od podania osiąga się szczytowe stężenie 0,4 jednostki międzynarodowej na ML, i ten poziom mieści się w zakresie terapeutycznym leku. Szczególnie interesującą kwestią jest jednak to, ile pozostaje 12 godzin po podaniu, ponieważ istnieje klinicznie akceptowana wytyczna, że należy odczekać co najmniej 12 godzin po podaniu heparyny drobnocząsteczkowej, w tym przypadku enoksaparyny, przed wykonaniem szczególnie inwazyjnego zabiegu, który może spowodować ryzyko krwawienia. Interesujące jest dla nas to, że w tym czasie nadal istnieje wyraźnie wykrywalna ilość i skupiliśmy się na tym w niektórych naszych badaniach, jak wykażemy.

W tej pracy Sender in et przedstawiono również fakt, że osoby z zaburzeniami czynności nerek mają znacznie wyższy poziom leku w całym okresie czasu, i widzimy, że wytyczne dotyczące 12 godzin mogą być bardzo niewystarczające w przypadku pacjenta z niewydolnością nerek lub, jak wiadomo, u kobiety w ciąży lub u pacjentów otyłych. Chciałbym przedstawić badaczy, którzy byli zaangażowani w ten projekt w New York Medical College. Nazywam się Mario Osa.

Jestem tu profesorem farmakologii. Nazywam się dr Surya Patula, jestem profesorem nadzwyczajnym anestezjologii klinicznej w New York Medical College. Nazywam się Keshar Kal.

Jestem studentką trzeciego roku medycyny. To jest aparatura, której używamy do tych testów. Aparatura jest produkowana przez Omicron Corporation.

Może być używany zarówno w trybie przewodowym, jak i bateryjnym, więc w tym sensie jest naprawdę punktem troski. Aparatura posiada dwie komory sterowane termostatycznie i używamy tych komór do wstępnej inkubacji próbek w ramach przygotowań do właściwego testu, jak również do samego testu krzepnięcia. Główną cechą testu jest zastosowanie wysoce oczyszczonego, dostępnego na rynku preparatu heparynazy.

Kupiliśmy to od korporacji Siemens. Jest dostarczany w bardzo stabilnej formie i jest łatwo rozpuszczalny w soli fizjologicznej lub dowolnym roztworze wodnym. Zastosowanie heparyny ACE jest szczególnie cenne w naszym podejściu, ponieważ pozwala nam uzyskać wyjściową wartość krzepnięcia pacjenta.

Przy braku jakiegokolwiek wpływu heparyny, heparyny, ACE jest w stanie całkowicie zdegradować heparynę drobnocząsteczkową i heparynę niefrakcjonowaną, ale naszym szczególnym zainteresowaniem jest tutaj heparyna drobnocząsteczkowa i degradacja do stanu nieaktywności i wytworzenie wartości czasu krzepnięcia przy braku jakiegokolwiek wpływu heparyny. To, co tutaj ilustrujemy, to przebieg w czasie degradacji heparyny drobnocząsteczkowej, w tym przypadku enoksaparyny przez heparynazę. Dane są wykreślane jako procent bazowego czasu cięcia, więc to, co tutaj widzimy, to to, że enoksaparyna dodana w jednym anty 10.

Jednostki międzynarodowe na ML powodują około 50% wydłużenie czasu krzepnięcia krwi. Następnie, po różnych okresach inkubacji z heparynazą w temperaturze 37 stopni Celsjusza, widzimy koszt czasu na przywrócenie wyjściowego czasu krzepnięcia. Innymi słowy, całkowita degradacja enoksaparyny do nieaktywności.

Jeśli chodzi o działanie przeciwzakrzepowe, widzimy to już o półtorej minuty. Zasadniczo następuje 100% odzyskanie wyjściowego czasu krzepnięcia. Po sprawdzeniu tego przebiegu czasowego zdecydowaliśmy się użyć pięciu minut inkubacji jako standardowej wstępnej inkubacji krwi przed pomiarem czasu krzepnięcia.

Probówki do tego testu w miejscu opieki nad pacjentem zostały nieznacznie zmodyfikowane w stosunku do sposobu, w jaki otrzymujemy je od producenta. Rurki te pierwotnie zawierały aktywator kaolin, który jest obecny do pomiaru czasu krzepnięcia aktywowanego. Odkryliśmy, że gdy używamy tubki bez aktywatora, znacznie zwiększa ona swoją czułość.

Nazwaliśmy to naszym minimalnie aktywowanym testem, ponieważ uważamy, że jedynym możliwym źródłem aktywacji byłaby teraz szklana powierzchnia rurki i być może magnes. Magnes jest istotną częścią zautomatyzowanego testu. Rurki te obracają się w studzienkach rurowych, a gdy magnes jest uwięziony przez skrzep o dużej gęstości, co powoduje utratę ruchu, jest to wykrywane i sygnalizuje zakończenie koagulacji.

Zbadaliśmy również test przy użyciu wkładu czasowego Platin aktywowanego częściową skrzepliną omikron. Test przeprowadza się w identyczny sposób. W tym systemie jest nieco więcej aktywacji.

Naszym pierwszym krokiem jest rozpuszczenie heparynazy liliowej w takiej postaci, w jakiej otrzymujemy ją w fiolce. Dodajemy 0,25 ml soli fizjologicznej do fiolki, a następnie pozostawiamy na około 20 sekund do całkowitego rozpuszczenia. Następnie odsysamy całą zawartość fiolki do strzykawki tuberkulinowej i zwykle odzyskujemy około 0,2 ml w następnym kroku.

Dodatki do wstępnej inkubacji dodaje się do świeżo pobranych próbek krwi zawierających enoksaparynę w trzech ml probówkach próżniowych. Pierwsza edycja reprezentuje heparynazę, która jest obecnie mieszana. Następnie, jest to dodanie 0,2 ml soli fizjologicznej do probówki zawierającej enoksaparynę, ale bez heparynazy, dla porównywalnej całkowitej objętości VO.

Używamy wbudowanego timera instrumentu, aby odliczać 300 sekund. To jest pięć minut wstępnej inkubacji. Rurki próżniowe są usuwane po zakończeniu inkubacji wstępnej.

Ostatnim etapem jest przeniesienie dwóch ml wstępnie inkubowanych próbek do naszych minimalnie aktywowanych probówek testowych. Probówki te są wstępnie napełnione stu mikrolitrami 0,25 molowego chlorku wapnia w celu zainicjowania koagulacji. Ta pierwsza probówka to ta, która jest wstępnie inkubowana z heparynazą.

Druga próbka to próbka zawierająca enoksaparynę, ale bez heparynazy. Timery wyrażają czas, który upłynął od dodania chlorku wapnia i możemy teraz zobaczyć, że pierwsza próbka jest kompletna. To jest górna fiolka po 200 sekundach potrzebna do zakończenia krzepnięcia.

Próbka, która nie zawierała heparynazy, jest badana dłużej i już się zakończyła. Jest to symulacja naszego typowego wyniku z krwią wzbogaconą o 0,4 jednostki międzynarodowej enoksaparyny na ml. Jest to około 45-sekundowe skrócenie czasu krzepnięcia przy tym stężeniu enoksaparyny lub 18% skrócenie czasu krzepnięcia.

Jak widać, wykrywanie zakrzepów jest zautomatyzowane, a czasy są zachowywane na urządzeniu do momentu zakończenia kontroli. Powinniśmy wspomnieć, że faktycznie przetestowaliśmy ten test w tak niskim stężeniu, jak 0,1 jednostki międzynarodowej enoksaparyny na ml. Jak zauważyliśmy we wstępie, jest to stężenie, które może być obecne 12 godzin po typowej dawce terapeutycznej enoksaparyny.

Również w tym stężeniu udało nam się niezawodnie wykryć.