Owariektomia i wymiana 17β-estradiolu u szczurów i myszy: demonstracja wizualna

Ogólnym celem tej procedury jest uzyskanie ścisłej kontroli nad zmiennymi stężeniami estrogenów w surowicy u samic szczurów i myszy. Osiąga się to poprzez usunięcie jajników przez korzeń grzbietowy. Następnie przygotowuje się elastyczne kapsułki i mieszankę Nutelli.

Na koniec kapsułkę wprowadza się podskórnie lub mieszaninę Nutelli podaje się doustnie. Ostatecznie wyniki można uzyskać za pomocą testu radioimmunologicznego, który pokazuje stabilne lub zmienne stężenia 17 beta estradiolu w surowicy odpowiednio dla metody kapsułki i Nutelli. Główną zaletą tych technik w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak granulki o powolnym uwalnianiu, jest to, że udowodniono, że wytwarzają one fizjologiczne stężenia estradiolu przez dłuższy czas.

Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie estrogenów, takie jak różnice w skutkach między podawaniem, korzeniami i dawkami. Po znieczuleniu zwierzęcia ułóż je w pozycji leżącej na płycie grzewczej podłączonej do termometru doodbytniczego. Zastosować IGEL i ulgę pooperacyjną na bocznej stronie szyi zwierzęcia podskórnie.

Podawać pięć miligramów na kilogram IL w soli fizjologicznej z przodu z golarki grzebienia biodrowego o powierzchni czterech na cztery centymetry. Następnie zdezynfekuj obszar środkiem antyseptycznym przed przykryciem zwierzęcia arkuszem chirurgicznym o wymiarach cztery na cztery centymetry. Wykonaj dwu- lub trzycentymetrowe nacięcie linii środkowej i tępo wypreparuj skórę od spodu twarzy, jeden centymetr po linii środkowej.

Wykonaj kolejne nacięcie przez powięź. Następnie tak powierzchownie, jak to możliwe, tępo rozciąć bocznie pod tą powięzią, aż dojdziesz do jamy brzusznej. Za pomocą pęsety chwyć tkankę tłuszczową otaczającą jajnik w jamie brzusznej i delikatnie ją wyciągnij.

Zidentyfikuj jajnik i podwiąż rogi i naczynia macicy. 0,5 do jednego centymetra proksymalnie do tej struktury. Wytnij jajnik i podwiązaną tkankę tłuszczową, a pozostałą tkankę włóż z powrotem do jamy brzusznej.

Wykonaj kolejne nacięcie w powięzi przeciwległej i usuń drugi jajnik. Zamknij rany, a jeśli nie, natychmiast podaj 17 beta estradiolu. Pozwól zwierzęciu obudzić się ze znieczulenia.

Umieść zwierzę w ogrzewanej klatce na co najmniej dwie godziny po zabiegu. Szczur był trzymany oddzielnie przez pierwsze kilka dni po operacji. 24 godziny po zabiegu podskórnie.

Wstrzyknąć zwierzętom kolejne pięć miligramów na kilogram IL, aby podać 17 beta estradiolu przez kapsułki szkolne. Dokładnie wymieszaj żądaną ilość z olejem sezamowym. Wytnij trzy centymetry rurki szkolnej i pięć milimetrów długości drewnianych aplikatorów do zatykania za pomocą kleszczy.

Wyciśnij jedną drewnianą zatyczkę do kapsułki szkolnej przed wstrzyknięciem roztworu 17 beta estradiolu oleju sezamowego. Aby wypełnić całą długość, delikatnie przykryj kapsułkę szkolną na otwartym końcu inną drewnianą zatyczką. Kapsułki należy inkubować w pozostałym roztworze 17 beta estradiolu na noc przed implantacją.

Po zamknięciu nacięć ektomijnych ogol i zdezynfekuj kwadratowy obszar o wymiarach dwa na dwa centymetry na grzbietowej stronie szyi szczura. Wykonaj jednocentymetrowe nacięcie i sznurek bocznie i tępo. Rozciąć kieszeń podskórną, pozostawiając wystarczająco dużo miejsca na kapsułkę.

Zetrzyj kapsułkę szkolną i delikatnie włóż ją przez nacięcie. Następnie zamknij nacięcie szwem. Upewnij się, że kapsułka w jak najmniejszym stopniu obciąża skórę, szczególnie wokół rany.

Aby użyć kremu orzechowego Nutella jako medium do podawania estrogenów, dokładnie rozpuść 17 beta estradiol w oleju sezamowym, a następnie wymieszaj olej sezamowy z kremem orzechowym. Przygotuj krem z orzechów placebo bez 17-beta estradiolu przez pięć dni przed eksperymentem. Trenuj szczury, aby jadły bezhormonalny krem orzechowy w dniach od pierwszego do trzeciego.

Trenuj zwierzęta w grupach w czwartym i piątym dniu. Karm je kremem orzechowym w oddzielnych klatkach podczas eksperymentów. Umieść zwierzęta w oddzielnych klatkach, gdy są karmione fizjologicznym serum z kremem orzechowym.

17 Stężenia beta estradiolu, które mają na celu odtworzenie obecne metody, wynoszą około 5 do 140 pikogramów na mililitr dla szczurów i od pięciu do 35 pikogramów na mililitr dla myszy. Jak pokazano tutaj. Po podaniu 300 gramom samice rozprzestrzeniają się szczury doy.

Podskórne elastyczne kapsułki wytwarzają powoli zmniejszające się stężenie 17 beta estradiolu w surowicy z około 40 pikogramów na mililitr w drugim dniu do 10 pikogramów na mililitr w 35 dniu. Jednak bezpośrednio po podaniu można spodziewać się szczytowego stężenia w surowicy wynoszącego około 1000 pikogramów na mililitr spadającego do zakresu fizjologicznego w ciągu ośmiu godzin, gdy kapsułki podawano 25 gramom samicy. C 57 czarne sześć myszy.

Stężenie w surowicy powoli zmniejszało się z około 90 pikogramów na mililitr w drugim dniu do 25 pikogramów na mililitr w 35 dniu po podaniu w kremie orzechowym do 300 gramów. Spra do szczurów. Fizjologiczne poziomy 17 beta estradiolu wahały się codziennie od 10 do 70 pikogramów na mililitr u myszy.

17 poziomów beta estradiolu wahało się od 20 do 120 pikogramów na mililitr Po opanowaniu technikę ektomii i implantacji kapsułki można wykonać w ciągu 10 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Podejmując się tej procedury, należy pamiętać o ścisłym przestrzeganiu zaleceń higienicznych.