In ovo Elektroporacja w śródmózgowiu piskląt do badania funkcji genów w rozwoju neuronów dopaminergicznych

Eksperyment ten demonstruje elektroporację in ovo śródmózgowia piskląt w celu zbadania wpływu egzogennej ekspresji genów na rozwój śródmózgowia i różnicowanie neuronów dopaminergicznych. Najpierw wstrzyknij śródmózgowie hamburgera Hamiltona, zarodków piskląt w stadium 11 z pożądanym plazmidem, DNA, aby specyficznie skierować egzogenne DNA do rozwijającego się pęcherzyka śródmózgowia. Następnie, za pomocą specjalnie wykonanych małych elektrod, napompowano elektropograficznie pęcherzyk śródmózgowia, aby dostarczyć egzogenne DNA specyficznie do progenitorów nerwowych śródmózgowia.

Następnie zbierz zarodki w stadium 23 z dobrą ekspresją wiśni M w śródmózgowiu i wygeneruj optymalne przekroje poprzeczne śródmózgowia. Ostatecznie analiza barwienia immunologicznego pod kątem markerów neuronów dopaminergicznych, takich jak hydroksylaza tyrozynowa, może wykazać różnicowanie się neuronalnych komórek progenitorowych w dojrzałe neurony dopaminergiczne indukowane ekspresją interesujących genów. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z innymi istniejącymi metodami elektroporacji in ovo jest to, że protokół ten może osiągnąć elektroporację specyficzną dla błony w celu zbadania różnicowania neuronów dopaminergicznych mirin.