Name: Ekstrakcja RNA z komórek neuroprekursorowych przy użyciu zestawu Bio-Rad Total RNA Kit (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T23:51:30.000+00:00
Duration: 17 min 25 s
Description: Naucz się ekstrakcji RNA z komórek neuroprekursorowych przy użyciu zestawu Bio-Rad Total RNA Kit. Ta metoda zapewnia wysokie wydajności i powtarzalne wyniki w badaniach neurobiologii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.

izolacja rna z komórek neuroprecursorowych z wykorzystaniem zestawu bio-rad total rna kit

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

Izolacja RNA z komórek neuroprecursorowych z wykorzystaniem zestawu Bio-Rad Total RNA Kit

Witam, nazywam się Josh Sh i jestem doktorantem w laboratorium dr. Ed Makiego na Uniwersytecie Kalifornijskim w Irvine. Pokażę Państwu, jak wyizolować RNA z prekursorów komórek neuronalnych przy użyciu zestawu BioRad to RNA mini kit. Korzystam z tego zestawu w naszym laboratorium od kilku lat i zawsze zapewnia on spójne wyniki przy wysokiej wydajności.Komórki, których używamy, to neuroprekursory E14.5, które zostały ostro zdysocjowane z kory embrionalnej; wysiewamy je zazwyczaj na 24-dołkową płytkę do hodowli tkankowej, pokrytą PDL i lamininą, w zagęszczeniu 100 000 komórek na dołek. Zanim zacznę, muszę zaznaczyć, że należy pracować na stanowisku wyznaczonym do pracy z RNA. W pierwszej kolejności należy upewnić się, że stanowisko do pracy z RNA jest czyste.Właściwym sposobem czyszczenia blatu jest użycie preparatu RNA zap. W zasadzie eliminuje on wszelkie cząsteczki RNA, ponieważ RA w zasadzie niszczy Twoje RNA. Inną kwestią jest zawsze noszenie rękawiczek podczas przeprowadzania ekstrakcji, ponieważ skóra jest pełna tych RNA.Zatem jest to absolutnie zabronione. Dobrze, mam tutaj zestaw BioRad total RNA mini kit. Wyjęłam z niego zawartość, więc pozwólcie, że pokażę wam, co się w ni

rna-extraction-from-neuroprecursor-cells-using-bio-rad-total-rna

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ekstrakcja RNA z komórek neuroprekursorowych za pomocą zestawu Bio-Rad Total RNA Kit

Przedstawiamy metodę generowania cDNA z mRNA pochodzącego ze środowiska. W ujęciu ogólnym, najpierw pobiera się całkowity RNA ze środowiska, selektywnie usuwa rRNA, selektywnie amplifikuje mRNA, a następnie sekwencjonuje cDNA zsyntetyzowane z wzbogaconej puli mRNA. Odzyskane sekwencje można poddać adnotacji przy użyciu standardowych technik bioinformatycznych w celu identyfikacji ekspresyjnych genów.

Analiza ekspresji genów w morskich społecznościach drobnoustrojów z wykorzystaniem transkryptomiki środowiskowej

Opisujemy proces wykorzystujący laserową mikrodysekcję do izolacji i ekstrakcji RNA z homogenicznej populacji komórek — neuronów piramidowych — w warstwie III zakrętu skroniowego górnego w pośmiertnych ludzkich mózgach. Następnie przeprowadzamy linearną amplifikację (opartą na T7) mRNA i hybrydyzujemy próbkę z macierzą Affymetrix human X3P.

Uzyskiwanie wysokiej jakości RNA z populacji pojedynczych komórek w pośmiertnej tkance mózgu człowieka

Ze względu na przejściowy charakter pre-mRNA, jego izolacja i badanie in vivo mogą być trudne. Przedstawiamy tutaj nowatorskie podejście in vitro do badania oddziaływań RNA-białko z wykorzystaniem syntetycznej puli oligonukleotydów, która pokrywa wybrane regiony pre-mRNA.

Szybka metoda wysokoprzepustowa mapowania rybonukleoprotein (RNP) na ludzkim pre-mRNA

W niniejszym artykule opisujemy prostą metodę izolacji pojedynczych komórek z pierwotnych kultur neuronalnych szczura oraz późniejszą analizę transkryptomu z wykorzystaniem amplifikacji aRNA. Metoda ta może zostać zastosowana do każdego typu komórek.

Analiza transkryptomu pojedynczych komórek

Protokół krok po kroku dotyczący izolacji i identyfikacji kompleksów związanych z RNA za pomocą metody RIP-Chip.

Metoda izolacji i identyfikacji mRNA, mikroRNA oraz komponentów białkowych kompleksów rybonukleoproteinowych z ekstraktów komórkowych z wykorzystaniem techniki RIP-Chip

Interakcje RNA-białko leżą u podstaw wielu procesów komórkowych. W tym miejscu opisujemy metodę in vivo do izolowania specyficznego RNA i identyfikowania nowych białek, które są z nim związane. Może to rzucić nowe światło na to, w jaki sposób RNA są regulowane w komórce.

Izolacja nowych białek wiążących RNA metodą RaPID

Dwa różne protokoły szybkiej amplifikacji końców cDNA (3' RACE) opisane tutaj wykorzystują dwie różne polimerazy DNA do mapowania sekwencji, które zawierają segment otwartej ramki odczytu (ORF), kodon stop i cały 3' UTR transkryptu za pomocą RNA uzyskanego z różnych linii komórek nowotworowych.

Adaptacja 3'szybkiej amplifikacji końców CDNA do mapowania transkryptów w raku

Ta metoda ściągania RNA pozwala na identyfikację celów RNA długiego niekodującego RNA (lncRNA). Opierając się na hybrydyzacji domowej roboty, zaprojektowanych antysensownych sond oligonukleotydowych DNA specyficznych dla tego lncRNA w odpowiednio utrwalonej tkance lub linii komórkowej, skutecznie umożliwia wychwycenie wszystkich celów RNA lncRNA.

Procedura ściągania RNA w celu identyfikacji celów RNA długiego niekodującego RNA

Koliste RNA (circRNA) to niekodujące RNA, które mogą odgrywać rolę w regulacji transkrypcji i pośredniczeniu w interakcjach między białkami. Po dokonaniu oceny różnych parametrów budowy bibliotek sekwencjonowania circRNA, opracowano protokół wykorzystujący przygotowanie biblioteki nici całkowitego RNA ze wstępną obróbką RNazy R i przedstawiono go tutaj.

Identyfikacja kolistych RNA za pomocą sekwencjonowania RNA

Bezwzględna kwantyfikacja Sekwencjonowanie RNA (AQRNA-seq) to technologia opracowana do ilościowego określania krajobrazu wszystkich małych RNA w mieszaninach biologicznych. W tym miejscu zademonstrowano zarówno etapy przygotowania biblioteki, jak i przetwarzania danych AQRNA-seq, określając ilościowo zmiany w puli transferu RNA (tRNA) w Mycobacterium bovis BCG podczas spoczynku wywołanego głodem.

AQRNA-seq do ilościowego oznaczania małych RNA

Naucz się ekstrakcji RNA z komórek neuroprekursorowych przy użyciu zestawu Bio-Rad Total RNA Kit. Ta metoda zapewnia wysokie wydajności i powtarzalne wyniki w badaniach neurobiologii.

Izolacja RNA z komórek neuroprecursorowych z wykorzystaniem zestawu Bio-Rad Total RNA Kit

Przeglądaj więcej filmów