Name: Szkolenie wyrafinowanej techniki mikrochirurgicznej: wstawienie zewnętrznego przeszczepu żyły szyjnej do wspólnej tętnicy szyjnej u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 21 s
Description: Naucz się techniki mikrochirurgicznej wstawienia zewnętrznej żyły szyjnej do wspólnej tętnicy szyjnej u szczurów Sprague Dawley metodą mankietową. Protokół upraszcza zabieg i zwiększa przeżywalność przeszczepów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Niniejsze badanie zostało sfinansowane przez program promocji badań &#34;START&#34; wydziału medycznego Uniwersytetu RWTH w Akwizgranie, Niemcy (Tytuł: &#34;Die Arterialisation venöser Gefäße&#34; START 690753). Chcielibyśmy podziękować pani Mary-Joan Blümich za doskonałą pomoc w redakcji. Finansowanie dr Marii Kokozidou pochodziło z funduszu Fresenius 2011_A61.

1. Zwierzęta doświadczalne
<ol>
 <li>Uzyskać zgodę Lokalnej Komisji Etycznej na wszystkie planowane eksperymenty, zgodnie z wytycznymi FELASA dotyczącymi ochrony zwierząt.</li>
 <li>Użyć samic szczurów Sprague-Dawley dostępnych w zakupie u dowolnego komercyjnego hodowcy (np. Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Niemcy). W badaniu wykorzystano 21 zwierząt podzielonych na trzy grupy po 7 zwierząt każda, które zostały uśmiercone w 3., 6. i 12. tygodniu po operacji. W momencie zakupu zwierzęta powinny mieć 12 tygodni i ważyć 250-300 g.</li>
 <li>Utrzymywać zwierzęta w pomieszczeniach z klimatyzacją, przy temperaturze otoczenia 21 °C, wilgotności względnej 60% i 12-godzinnym cyklu światło-ciemność, zapewniając swobodny dostęp do pokarmu i wody.</li>
</ol>
2. Znieczulenie i przygotowanie operacyjne
<ol>
 <li>Wprowadzić zwierzęta w narkozę ogólną, używając skrzynki z pleksiglasu podłączonej do aparatury do znieczulenia, z przepływem tlenu ustawionym na 1 L/min i parownikiem izofluranu z 5 % gazem anestetycznym.</li>
 <li>Utrzymać znieczulenie za pomocą parownika izofluranu przy stężeniu 1,5 %, gdy tylko zostaną stłumione głębokie odruchy sensoryczne zwierząt.</li>
 <li>Utrwalić szczury w pozycji na plecach na podgrzewanej płycie.</li>
 <li>Przygotować obszar operacyjny każdego zwierzęcia, usuwając sierść kremem do depilacji, od kąta żuchwy w dół do 2 cm poniżej manubrium sterni.</li>
 <li>Przygotować sterylną strefę chirurgiczną, zwracając uwagę na obszar operacyjny, obszar przygotowany u zwierzęcia oraz przedpole chirurga: 
 <ul>
 <li>Oczyścić blat roboczy środkiem dezynfekcyjnym.</li>
 <li>Przygotować miejsce nacięcia, stosując wielokrotne aplikacje roztworu do mycia chirurgicznego (np. chloreksydyny i 70% alkoholu izopropylowego). Najpierw zastosować chloreksydynę, następnie alkohol, a na koniec roztwór do mycia.</li>
 <li>Założyć jednorazową fartuch chirurgiczny i rękawiczki chirurgiczne lub alternatywnie rękawiczki do badań, które zostały uprzednio umyte środkiem dezynfekcyjnym do chirurgii.</li>
 </ul>
</li>
 <li>W procedurze operacyjnej stosować sterylne instrumenty do mikrochirurgii.</li>
 <li>Użyć mikroskopu operacyjnego (Wild Heerbrugg M650, Gais, Szwajcaria) z powiększeniem 10-20-krotnym.</li>
</ol>
3. Anatomia
Rysunek 1 przedstawia anatomię szyi szczura:
1a) Situs przed przecięciem prawego mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowego.
1b) Situs po przecięciu prawego mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowego.
4. Przygotowanie mankietu
Ręcznie wytnij mankiety o długości 3 mm z plastikowej rurki (Portex, średnica wewnętrzna 0,75 mm, średnica zewnętrzna 0,94 mm, Smiths Medical, Wielka Brytania). Mankiety te składają się z rurkowatego korpusu mankietu, obejmującego pełną objętość plastikowej rurki, oraz uchwytu mankietu stanowiącego połowę objętości mankietu. Zarówno korpus mankietu, jak i jego uchwyt powinny mieć taką samą długość. Uchwyt mankietu jest niezbędny do manipulowania mankietem podczas procedury chirurgicznej. Po nasunięciu mankietu na naczynie, mini zacisk Bulldog jest umieszczany jednocześnie na uchwycie mankietu i naczyniu, aby zapobiec krwawieniu, utrzymać mankiet w pozycji i zapewnić stabilność.
5. Technika mankietowa
<ol>
 <li>Nasunąć mankiet na naczynie.</li>
 <li>Następnie natychmiast wywinąć naczynie na zewnątrz, naciągnąć je na korpus mankietu i przymocować za pomocą ligatury jedwabnej 7-0. W ten sposób światło mankietu zostanie pokryte śródbłonkiem. Następnie nasunąć przeszczep żylny na korpus mankietu i przymocować go nową ligaturą jedwabną 7-0. Aby zapobiec tworzeniu się skrzepów, kluczowe jest zawiązanie przeszczepu żylnego bardzo blisko krawędzi mankietu, aby krew nie miała kontaktu z więzadłem utrzymującym tętnicę na miejscu. Jest to szczególnie istotne w przypadku zespolenia dystalnego ze względu na kierunek przepływu krwi. Jednak według autorów, w przypadku zespolenia proksymalnego nie jest to uważane za niezbędne z tego samego powodu.</li>
</ol>
6. Procedura chirurgiczna
6.1 Przygotowanie prawej zewnętrznej żyły szyjnej
<ol>
 <li>Wykonaj przybliżone 2,5 cm nacięcie szyjne w linii pośrodkowej, bezpośrednio nad manubrium sterni.</li>
 <li>Całkowicie odseparuj 1 cm odcinek prawej żyły szyjnej zewnętrznej od otaczających tkanek.</li>
 <li>Podwiąż dopływy żylne za pomocą jedwabnych szwów 7-0.</li>
</ol>
6.2 Przygotowanie prawej tętnicy szyjnej wspólnej
<ol>
 <li>Przygotuj mięsień mostkowo-obojczykowo-sutkowy i przetnij go w połowie.</li>
 <li>Ostrożnie przygotuj prawą tętnicę szyjną wspólną, uważając, aby nie ucisnąć tętnicy ani nerwu Vagus. Zmobilizuj ją od rozwidlenia tętnicy szyjnej w dół do pnia ramionowo-głowowego.</li>
 <li>Następnie podwiąż ją dwukrotnie w połowie, używając szwów jedwabnych 7-0, przed przecięciem.</li>
 <li>Nasuń nylonową mankietkę składającą się z korpusu i uchwytu (Rycina 2a) na dystalny koniec tętnicy szyjnej wspólnej, przy czym ważne jest zapewnienie, aby uchwyt mankietki znajdował się za naczyniem (Rycina 2b).</li>
 <li>Zaciśnij zacisk typu mini Bulldog na mankietkowym końcu dystalnej tętnicy szyjnej wspólnej, dokładnie na uchwycie mankietki, aby zapewnić stabilność (Rycina 2c).</li>
 <li>Następnie przetnij tętnicę bezpośrednio za podwiązaniem, tak aby powstały kikut tętniczy był tak długi jak korpus mankietki.</li>
 <li>Przepłucz światło tętnicy roztworem soli fizjologicznej z heparyną (20 IU heparyny/ml 0.9% NaCl). Odłóż pętlę ligacyjną w odpowiedniej pozycji do późniejszego użycia.</li>
 <li>Podciągnij kikut tętniczy i nasuń go jak rękaw na korpus mankietki.</li>
 <li>Następnie pociągnij pętlę ligacyjną i mocno zawiąż węzeł.</li>
 <li>Aby zapobiec wysunięciu się tętnicy z rękawa, można zastosować pewien zabieg: chwyć jednocześnie prawą ręką zarówno ścianę tętnicy, jak i szew, a za pomocą kleszczyków w lewej ręce (Rycina 2d) zawiąż węzeł (Rycina 2e).</li>
 <li>Powtórz tę samą procedurę dla proksymalnego kikuta tętniczego (Rycina 2f).</li>
</ol>
6.3 Pozycjonowanie przeszczepu żylnego
<ol>
 <li>Wyciąć segment zaklemowanej zewnętrznej żyły szyjnej o długości 1 cm. </li>
 <li>Ponieważ dwie tętnice z mankietami znajdują się zbyt daleko od siebie, aby zastosować interpozycję żylną, należy przybliżyć je do odpowiedniej odległości za pomocą szwy Vicryl 3-0, którą należy owinąć wokół każdego z mini-zacisków Bulldog. </li>
 <li>Skrzyżować obie nici. </li>
 <li>Następnie pociągnąć nici w przeciwnych kierunkach, aby umożliwić prawidłowe ustawienie mankietowych kikutów tętniczych (Rysunek 2g). </li>
 <li>Przepłukać segment żyły roztworem soli fizjologicznej z heparyną. </li>
 <li>Nasunąć jeden koniec wcześniej odwróconego segmentu żyły na mankiet dystalnej tętnicy szyjnej i zabezpieczyć go w odpowiedniej pozycji ligaturem jedwabnym 7-0. </li>
 <li>Należy pamiętać, że obwód żyły musi zostać całkowicie i równomiernie uchwycony. </li>
 <li>Przepłukać segment żyły roztworem soli fizjologicznej z heparyną, a następnie nasunąć drugi koniec segmentu żyły na proksymalny kikut tętnicy szyjnej. </li>
 <li>Zakończyć ligację (Rysunek 2h); </li>
 <li>Usuwać mini-zaciski Bulldog jeden po drugim, najpierw z dystalnego kikuta tętnicy szyjnej, a następnie z proksymalnego, umożliwiając tym samym niezakłócony przepływ krwi i arteryalizację przeszczepu żylnego (Rysunek 2i).
 Operację uznaje się za udaną, jeśli w przeszczepie i wspólnej tętnicy szyjnej zaobserwowano przepływ krwi i pulsację (ocena wizualna). </li>
</ol>
6.4. Zamknięcie rany
Do szwu przedskórnego w sposób ciągły należy użyć nici 4-0 Vicryl. Do szwu skórnego w sposób ciągły należy użyć nici 3-0 Vicryl.
7. Rekonwalescencja i opieka pooperacyjna
<ol>
 <li>Pozostaw zwierzęta do wybudzenia z anestezji na płaskim podłożu z papieru pod lampą grzewczą na podczerwień. Nie przenoś operowanych zwierząt do pomieszczenia hodowlanego, dopóki wszystkie zwierzęta nie odzyskają normalnego stanu. </li>
 <li>Po zabiegu podawaj Buprenorfinę (Temgesic) w stężeniu 0,03-0,05 mg/kg m.c. podskórnie co 8-12 h przez 2 dni. Buprenorfinę można podać bezpośrednio przed indukcją izofluranem. </li>
 <li>Monitoruj stan ogólny zwierząt po zabiegu oraz obecność objawów choroby lub infekcji. </li>
</ol>
8. Pomiar przepływu krwi
Pooperacyjną drożność przeszczepu potwierdzono pomiarem przepływu krwi, wykorzystując badawczy system pomiaru przepływu krwi Transonic (Model: TS420, Transonic Systems Europe B.V., Maastricht, Holandia) z okołonaczyniową sondą przepływową (3 mm, MA3PSB). System ten opiera się na zasadzie Dopplera.
9. Reprezentatywne wyniki
Dzięki ścisłemu przestrzeganiu powyższych instrukcji średni czas operacji chirurgicznych wynosił około 65 min. Zwierzęta wykazywały doskonałą kondycję fizyczną i zwiększały masę ciała zgodnie z oczekiwaniami przez cały okres eksperymentu: w punkcie początkowym operacji zwierzęta ważyły 312±20.39 g. W punkcie uboju 3 tygodnie po operacji zwierzęta ważyły 325.2±28.7 g, w 6. tygodniu 333±39.9 g, a w 12. tygodniu 362.22±29 g.
W miejscu operacji nie zaobserwowano infekcji i nie pojawiły się żadne rany. Rany pooperacyjne zagoiły się całkowicie w przewidywanym czasie. W grupie kontrolnej neurologicznej nie stwierdzono oznak zawału mózgu ani deficytów motorycznych. Ten ostatni punkt był istotny, ponieważ operacje przeprowadzano na tętnicy szyjnej wspólnej, a jedną z dwóch żył szyjnych zewnętrznych usunięto i wykorzystano jako autotransplantat. Nie zaobserwowano reakcji alergicznych na pooperacyjną terapię przeciwbólową.
Wszystkie zwierzęta pozostawały czujne i socjalne przez cały czas trwania eksperymentu. Ich nawyki dotyczące przyjmowania pokarmu i wody nie uległy zmianie w całym badanym okresie.
Wskaźnik przeżywalności we wszystkich eksperymentach wynosił 100 % w momencie uboju. Wskaźnik drożności przeszczepów wyniósł 60 % dla pierwszych 10 operowanych zwierząt i odpowiednio 82 % dla pozostałych 11 zwierząt. Całkowita drożność przeszczepów wyniosła 71 %. Przepływ krwi w arteryalizowanych przeszczepach żylnych był mierzony w momencie uboju i wynosił 8±3 ml/min, bez statystycznie istotnych różnic pomiędzy trzema punktami czasowymi uboju.
<img src="/files/ftp_upload/4124/4124fig1.jpg" alt="Sekcja anatomiczna, oznaczone nerwy i żyły, prawy obszar szyi, schemat edukacyjny." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1. Anatomia szyi szczura. 1a) Situs przed przecięciem prawego mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowatego. 1b) Situs po przecięciu prawego mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowatego.
<img src="/files/ftp_upload/4124/4124fig2.jpg" alt="Schemat procedury chirurgicznej; technika anastomozy mankietowej naczynia krok po kroku z użyciem uchwytu mankietu." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2. Śródoperacyjne zdjęcia mikroskopowe: a) mankiet składający się z korpusu i uchwytu; b) mankiet nasunięty na dystalny koniec tętnicy szyjnej wspólnej; c) zaklemowanie dystalnego kikuta tętnicy szyjnej wspólnej z mankietem; d) wywinięcie kikuta tętnicy szyjnej wspólnej na mankiet; e) zabezpieczenie wywiniętego kikuta tętnicy szyjnej wspólnej ligaturą; f) situs po wywinięciu obu mankietowanych kikutów tętnicy szyjnej wspólnej – dystalnego i proksymalnego; g) technika krzyżowa (criss-cross) w celu zbliżenia dwóch mankietowanych kikutów tętnicy szyjnej wspólnej; h) situs po interpozycji żylnej; i) situs po reperfuzji żylnego przeszczepu interpozycyjnego.
<img src="/files/ftp_upload/4124/4124fig3.jpg" alt="Schemat przeszczepu żylnego i obraz chirurgiczny, ilustrujące połączenie naczyniowe z tętnicą szyjną za pomocą mankietu." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3. Schematyczne przedstawienie situs po reperfuzji żylnego przeszczepu interpozycyjnego. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4124/4124fig3large.jpg" target="_blank"> Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną rycinę</a>.

<ol><li>Motwani, J. G., Topol, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aortocoronary+saphenous+vein+graft+disease%3A+Pathogenesis%2C+Predisposition%2C+and+Prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Aortocoronary saphenous vein graft disease: Pathogenesis, Predisposition, and Prevention.</a> Circulation. 97, 916-931 (1998).</li>
<li>Bonatti, J., Oberhuber, A., Schachner, T., Zou, Y., Hammerer-Lercher, A., Mittermair, R., Laufer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neointimal+hyperplasia+in+coronary+vein+grafts%3A+Pathophysiology+and+prevention+of+a+significant+clinical+problem%5BTitle%5D)+AND+%22The+Heart+Surg%22%5BJournal%5D)">Neointimal hyperplasia in coronary vein grafts: Pathophysiology and prevention of a significant clinical problem.</a> The Heart Surg. , E72-E87 (2004).</li>
<li>Roy-Chaudhury, P., Kelly, B. S., Zhang, J., Narayana, A., Desai, P., Melhem, M., Duncan, H., Heffelfinger, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodialysis+Vascular+Access+Dysfunction%3A+From+Pathophysiology+to+Novel+Therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Purif%22%5BJournal%5D)">Hemodialysis Vascular Access Dysfunction: From Pathophysiology to Novel Therapies.</a> Blood Purif. 21, 99-110 (2003).</li>
<li>Dixon, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+don%27t+fistulas+mature%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Why don't fistulas mature.</a> Kidney Int. 70, 1413-1422 (2006).</li>
<li>Newby, A. C., Zaltsman, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+in+intimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms in intimal hyperplasia.</a> J. Pathol. 190, 300-309 (2000).</li>
<li>Schachner, T., Heiss, S., Zipponi, D., Tzankov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+treatment+with+azathioprine+reduces+neointimal+hyperplasia+in+experimental+vein+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Surg%22%5BJournal%5D)">Perivascular treatment with azathioprine reduces neointimal hyperplasia in experimental vein grafts.</a> Heart Surg. 9, E515-E517 (2006).</li>
<li>Zhang, L., Sivashanmugam, P., Wu, J. H., Brian, L., Exum, S. T., Freedman, N. J., Peppel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor+receptor-2+signaling+attenuates+vein+graft+neointima+formation+by+promoting+endothelial+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor receptor-2 signaling attenuates vein graft neointima formation by promoting endothelial recovery.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 28, 284-289 (2008).</li>
<li>Tzankov, A., Mairinger, T., Laufer, G., Bonatti, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+application+of+rapamycin+inhibits+neointimal+hyperplasia+in+experimental+vein+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Thorac.+Surg%22%5BJournal%5D)">Local application of rapamycin inhibits neointimal hyperplasia in experimental vein grafts.</a> Ann. Thorac. Surg. 77, 1580-1585 (2004).</li>
<li>Zou, Y., Dietrich, H., Hu, Y., Metzler, B., Wick, G., Xu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Model+of+Venous+bypass+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22A.J.P%22%5BJournal%5D)">Mouse Model of Venous bypass graft arteriosclerosis.</a> A.J.P. 153, 1301-1310 (1998).</li>
<li>Schachner, T., Oberhuber, A., Zou, Y., Tzankov, A., Ott, H., Laufer, G., Bonatti, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+treatment+is+associated+with+an+increased+apoptosis+rate+in+experimental+vein+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cardiothorac.+Surg%22%5BJournal%5D)">Rapamycin treatment is associated with an increased apoptosis rate in experimental vein grafts.</a> Eur. J. Cardiothorac. Surg. 27, 302-306 (2005).</li>
<li>Ali, Z., Bursill, C., Hu, Y., Choudhury, R. P., Xu, Q., Greaves, D. R., Channon, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+of+a+broad+spectrum+CC-chemokine+inhibitor+reduces+vein+graft+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Gene transfer of a broad spectrum CC-chemokine inhibitor reduces vein graft atherosclerosis in apolipoprotein E-knockout mice.</a> Circulation. 30, 1235-1241 (2005).</li>
<li>Zou, J., Zhang, X., Yang, H., Zhu, Y., Ma, H., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin-loaded+nanoparticles+for+inhibition+of+neointimal+hyperplasia+in+experimental+vein+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Rapamycin-loaded nanoparticles for inhibition of neointimal hyperplasia in experimental vein grafts.</a> Ann. Vasc. Surg. 25, 538-546 (2011).</li>
<li>Wang, J., Liu, K., Shen, L., Wu, H., Jing, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+interfering+RNA+to+c-myc+inhibits+vein+graft+restenosis+in+a+rat+vein+graft+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Small interfering RNA to c-myc inhibits vein graft restenosis in a rat vein graft model.</a> J. Surg. Res. 169, e85-e91 (2011).</li>
<li>Schachner, T., Zou, Y., Oberhuber, A., Mairinger, T., Tzankov, A., Laufer, G., Ott, H., Bonatti, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+application+of+C-type+natriuretic+peptide+attenuates+neointimal+hyperplasia+in+experimental+vein+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cardiothorac.+Surg%22%5BJournal%5D)">Perivascular application of C-type natriuretic peptide attenuates neointimal hyperplasia in experimental vein grafts.</a> Eur. J. Cardiothorac. Surg. 25, 585-590 (2004).</li>
<li>Thomas, A. C., Newby, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+matrix+metalloproteinase-9+knockout+on+vein+graft+remodelling+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of matrix metalloproteinase-9 knockout on vein graft remodelling in mice.</a> J. Vasc. Res. 47, 299-308 (2010).</li>
</ol>

Nie zgłoszono żadnych konfliktów interesów.

Wszczepienie przeszczepu z zewnętrznej żyły szyjnej do wspólnej tętnicy szyjnej jest zaawansowaną techniką mikrochirurgiczną. Niniejszy film pomaga początkującemu chirurgowi opanować tę metodę w minimalnym czasie, ograniczając przy tym liczbę wykorzystywanych zwierząt doświadczalnych.
Znieczulenie inhalacyjne jest najlepszą opcją dla tego zabiegu, ponieważ pozwala uniknąć zbyt głębokiej fazy znieczulenia, może być precyzyjnie kontrolowane i zapewnia chirurgowi wystarczająco dużo czasu na opera...

<table><tbody><tr><td>Pleciony jedwab czarny 7-0 </td><td>Ethicon Products</td><td>892100</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Ethicon Products</td><td>J285G</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0</td><td>Ethicon Products</td><td>J284G</td><td></td></tr><tr><td>Niesterylna rurka nylonowa Portex 0.75 mm, 0.94 mm polietylenowa rurka o małej średnicy wewnętrznej</td><td>Portex UK</td><td>800/200/175/100</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran 5 %</td><td></td><td></td><td>Dowolny producent generyczny</td></tr><tr><td>Heparyna</td><td></td><td></td><td>Dowolny producent generyczny</td></tr><tr><td>0.9% sól fizjologiczna</td><td></td><td></td><td>Dowolny producent generyczny</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td></td><td></td><td>Dowolny producent generyczny</td></tr></tbody></table>

szkolenie z zaawansowanej techniki mikrosurgicalnej: interpozycja przeszczepu z żyły szyjnej zewnętrznej w tętnicy szyjnej wspólnej u szczurów

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

Hiperplazja neointimy jest jedną z głównych przyczyn stenozy w zarterializowanych żyłach, które mają ogromne znaczenie w chirurgii pomostowania tętnic wieńcowych, chirurgii pomostowania tętnic obwodowych, a także w przetokach tętniczo-żylnych.1-5 Eksperymentalna procedura interpozycji przeszczepu żylnego w tętnicy szyjnej wspólnej z wykorzystaniem techniki mankietowej (cuff-technique) została zastosowana w kilku projektach badawczych w celu zbadania etiologii hiperplazji neointimy oraz opcji terapeutycznych służących do jej zwalczania. 6-8 Mankiet zapobiega przebudowie anastomozy naczyniowej i indukuje turbulencje w obrębie przeszczepu, co prowadzi do rozwoju hiperplazji neointimy.
Wykorzystanie przeszczepu z żyły głównej górnej jest uznanym modelem na małych zwierzętach w eksperymentach nad arteryalizacją żył.9-11 Niniejszy protokół odnosi się do ugruntowanej techniki interpozycji przeszczepu z żyły szyjnej, po raz pierwszy opisanej przez Zou et al., 9 a także przez innych autorów.12-14 Niemniej jednak, cytowane protokoły dla małych zwierząt są skomplikowane.
Aby uprościć procedurę i zminimalizować liczbę potrzebnych zwierząt doświadczalnych, przedstawiono szczegółowy protokół operacyjny w formie szkolenia wideo. Film ten powinien pomóc początkującemu chirurgowi w opanowaniu zarówno techniki mankietowej, jak i interpozycji przeszczepu żylnego. W niniejszej pracy prawą żyłę szyjną zewnętrzną przeszczepiono techniką mankietową do tętnicy szyjnej wspólnej u 21 samic szczurów Sprague Dawley, podzielonych na trzy równe grupy, które uśmiercono odpowiednio w 21., 42. i 84. dniu. Co istotne, nie było potrzeby stosowania zwierząt dawców, ponieważ przeprowadzono autotransplantacje. Przeżywalność w momencie uśmiercenia wynosiła 100 %. Ponadto wskaźnik drożności przeszczepów wyniósł 60 % dla pierwszych 10 operowanych zwierząt i 82 % dla pozostałych 11 zwierząt. Przepływ krwi w momencie uśmiercenia wynosił 8±3 ml/min. Podsumowując, niniejszy protokół chirurgiczny znacznie upraszcza, optymalizuje i standaryzuje tę skomplikowaną procedurę. Zapewnia on początkującym chirurgom łatwą, instruktażową ścieżkę krok po kroku, wyjaśniając możliwe pułapki, co pomaga im szybko zdobyć doświadczenie i uniknąć niepotrzebnego uśmiercania zwierząt doświadczalnych.

Hiperplazja neointimy jest główną przyczyną zwężenia w żyłach arteryalizowanych. Proponujemy nowy protokół, w którym żyła zewnętrzna szyjna prawa jest przeszczepiana z wykorzystaniem techniki mankietowej do tętnicy szyjnej wspólnej u szczurów Sprague Dawley. Przeżywalność w momencie uśmiercenia zwierząt wynosiła 100 %.

Szkolenie z zaawansowanej techniki mikrosurgicalnej: Interpozycja przeszczepu z żyły szyjnej zewnętrznej w tętnicy szyjnej wspólnej u szczurów

Hiperplazja neointimy jest jedną z głównych przyczyn zwężenia w arteriolizowanych żyłach, które mają ogromne znaczenie w chirurgii pomostowania tętnic wieńcowych, w...

Hiperplazja neointimy jest jedną z głównych przyczyn stenozy w żyłach arteryalizowanych stosowanych w pomostowaniu tętnic wieńcowych, w pomostowaniu tętnic obwodowych, a także w przetokach tętniczo-żylnych. Interpozycja w tętnicy szyjnej wspólnej była przeprowadzana w kilku projektach badawczych w celu zbadania etiologii hiperplazji neointimy oraz obecnie dostępnych opcji terapeutycznych. Jednak konwencjonalne techniki mikrochirurgiczne z wykorzystaniem modeli małych zwierząt są skomplikowane, uciążliwe i wymagają nadmiernego poświęcenia zwierząt doświadczalnych w celu uproszczenia całej procedury.Niniejszy film przedstawia szczegółowy protokół operacyjny, który pomoże początkującemu chirurgowi opanować technikę cięcia oraz zespolenia przeszczepu żylnego w pozycji pośredniej w tętnicy szyjnej wspólnej. 21 samic szczurów linii Sprague-Dawley pochodzących od komercyjnego hodowcy podzielono na trzy równe grupy, które poddano operacji, a następnie uśmiercono odpowiednio w 21., 42. i 84. dniu. Narkozę ogólną zwierząt wprowadzono za pomocą skrzynki z pleksiglasu podłączonej do aparatury anestezjologicznej z przepływem tlenu ustawionym na 1 l/min oraz parownika izofluranu z 5% gazem anestetycznym.Na tej ilustracji widać naukowców przed przecięciem prawego mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowatego. Przedstawiona jest tutaj żyła szyjna zewnętrzna. Tutaj widać naukowców po przecięciu prawego mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowatego, gdzie odsłonięto prawą tętnicę szyjną wspólną oraz prawy nerw błędny.W trakcie następnej operacji anastomozy wykonuje się przy użyciu techniki mankietowej. Mankietki są wykonywane ręcznie z plastikowej rurki przeciętej na długość trzech milimetrów. Mankietki te składają się z rurkowatego korpusu mankietu, obejmującego pełną objętość plastikowej rurki, oraz uchwytu mankietu stanowiącego połowę objętości mankietu.Zarówno korpus mankietu, jak i jego uchwyt mają taką samą długość. Mankiet naciąga się na wspólną tętnicę szyjną. Naczynie oraz uchwyt mankietu można bezpiecznie zacisnąć razem za pomocą mini-zacisku typu bulldog.Następnie naczynie jest odchylane i przeciągane nad zewnętrzną stroną korpusu mankietu. Potem zostaje ono unieruchomione za pomocą ligatury jedwabnej. W ten sposób światło mankietu zostaje wyścielone śródbłonkiem.Przeszczep żylny można nasunąć na oba zakurczone kikuty wspólnej tętnicy szyjnej i przymocować go jedwabną ligaturą. Aby zapobiec tworzeniu się zakrzepów, szczególnie w anastomozie dystalnej, niezbędne jest zawiązanie przeszczepu żylnego bardzo blisko krawędzi mankietu, aby krew nie miała kontaktu z wiązaniem utrzymującym tętnicę na miejscu. Wykonuje się 2,5 centymetra długie cięcie pośrodkowo szyjne bezpośrednio nad mostkiem, bocznie w stosunku do mięśnia mostkowo-obojczykowo-mastoidalnego. Widoczna jest szeroka żyła szyjna zewnętrzna, która została całkowicie oddzielona od otaczających tkanek.Tutaj widoczna jest w pełni zmobilizowana żyła szyjna zewnętrzna, w której dopływy żylne zostały podwiązane szwami jedwabnymi 7-0. Tutaj przygotowano mięsień mostkowo-obojczykowo-sutkowaty po przecięciu mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowatego. Teraz widoczna jest prawa wspólna tętnica szyjna.Tętnicę wspólną szyjną przygotowuje się ostrożnie, dbając o to, aby nie ucisnąć tętnicy ani nerwu błędnego; obecnie widoczna jest tętnica wspólna szyjna na całej swojej długości. Następnie zostaje ona dwukrotnie podwiązana w połowie za pomocą szwów jedwabnych 7-0. Po tym zabiegu tętnicę wspólną szyjną przecina się dokładnie pomiędzy dwiema podwiązkami.Następnie nylonową mankietkę składającą się z korpusu i uchwytu nasuwa się na dystalny koniec wspólnej tętnicy keratynowej w taki sposób, aby uchwyt mankietki znajdował się za naczyniem. Następnie zaciska się koniec dystalnej wspólnej tętnicy keratynowej z założoną mankietką za pomocą mini klemy typu bulldog bezpośrednio na uchwycie mankietki. Zapewnia to stabilność.Następnie tętnicę przecina się bezpośrednio za podwiązką w taki sposób, aby powstały kikut tętnicy był tak samo długi jak korpus mankietu. Światło tętnicy płucze się roztworem soli fizjologicznej z heparyną. Następnie pętlę ligacyjną odsuwa się na bok.Bezpośrednio po tym kikut tętnicy jest podciągany i nasuwany niczym rękaw na korpus mankietu. Następnie pętla ligacyjna jest mocno zaciśnięta i zawiązana, aby zapobiec wysunięciu się tętnicy z rękawa. Stosujemy pewien zabieg, w którym zarówno ścianę tętnicy, jak i szew zaciska się jednocześnie parą pęset, a drugą pęsetą wykonuje się węzeł.Następnie tę samą procedurę powtarza się dla proksymalnego kikutu tętnicy, nasuwając mankiet na koniec proksymalny mankietowanej tętnicy wspólnej szyjnej: zaciskanie, przecięcie tętnicy, płukanie, założenie pętli ligacyjnej na kikut tętnicy, nasunięcie kikuta tętnicy na mankiet, a na koniec zawiązanie pętli ligacyjnej. Wycina się odcinek zakleszczonej żyły zewnętrznej szyjnej o długości jednego centymetra. Dwie mankietowane tętnice znajdują się zbyt daleko od siebie, aby interpozycja żylna mogła zbliżyć je na właściwą dla procedury odległość.Sznur nici Vicryl 3-0 zapętla się wokół każdego z mini-zacisków typu bulldog, a następnie obie nici krzyżuje się. Następnie pociąga się nici w przeciwnych kierunkach, co umożliwia prawidłowe ustawienie wgłębnych kikutów tętniczych. Płukanie roztworem soli fizjologicznej z heparyną.Po zapętleniu nici wokół zwężonego dystalnego tętnicy keratyny, jeden koniec odwróconego i przepłukanego segmentu żyły nasuwa się na zwężoną dystalną tętnicę keratyny. Następnie nić wiąże się w odpowiednim miejscu. Należy przy tym upewnić się, że podwiązanie obejmuje cały obwód przeszczepu żylnego.Następnie odcinek żyły zostaje ponownie przepłukany roztworem soli fizjologicznej z heparyną, a drugi koniec odcinka żyły nasuwa się na proksymalny kikut tętnicy keratin. Następnie kończy się podwiązywanie. Tutaj można zobaczyć kompletny przeszczep żylny w pozycji interpozycyjnej.Następnie usuwa się dwa mini-zaciski typu bulldog. Najpierw ten dystalny, a potem proksymalny. W efekcie przeszczep interpozycyjny z tętnicy zastępującej żyłę znajduje się na swoim miejscu.Tętnienie jest widoczne w tętnicy szyjnej wspólnej oraz w przeszczepie żylnym. Po zdjęciu klem zapobiegających wyciekowi podczas zamykania rany, wykonuje się ciągły szew podskórny nicią 4-0 Vicryl, natomiast do ciągłego szwu skórnego używa się nici 3-0 Vicryl. Zwierzęta dochodziły do siebie na płaskiej ściółce papierowej pod lampą grzewczą na podczerwień.Zwierzętom po operacji podawano podskórnie roztwór norphiny w stężeniu od 0,03 do 0,05 mg/kg masy ciała co 8–12 godzin przez dwa dni; w momencie uboju przeżyło 100% zwierząt. Ponadto wskaźnik drożności przeszczepu wyniósł 60% dla pierwszych 10 zoperowanych zwierząt i 82% dla pozostałych 11 zwierząt. Przepływ krwi w momencie uboju wynosił 8 ± 3 mL/min.Dzięki zastosowaniu techniki mankietowej (cuff technique) można wykonać anastomozę naczyń o różnych średnicach światła. Ważne jest, aby podwiązać cały obwód naczyń w miejscu mankietu oraz naczyń TED, aby uniknąć krwawienia po reperfuzji. Aby zapobiec tworzeniu się zakrzepów, szczególnie w anastomozie dystalnej, niezbędne jest zawiązanie sznurka przeszczepu żylnego bardzo blisko krawędzi mankietu, tak aby krew nie miała kontaktu z wiązaniem utrzymującym tętnicę na miejscu.Model ten jest bardzo odpowiedni do symulacji hemodynamiki przy wysokiej prędkości przepływu krwi i niskim naprężeniu ścinającym oraz do badania mechanizmów wpływających na rozwój hiperplazji neointimy. W przeciwieństwie do procedury z wykorzystaniem żyły głównej jako przeszczepu, ta autotransplantacja z użyciem żyły szyjnej zewnętrznej jako graftu pozwala na zmniejszenie wymaganej liczby zwierząt doświadczalnych o połowę. W ostatecznym rozrachunku, interpozycja przeszczepu z żyły szyjnej zewnętrznej w tętnicę wspólną jest wyrafinowaną techniką mikrochirurgiczną.Niniejszy film pomaga chirurgowi opanować metodę Sonata w minimalnym czasie, przy mniejszym zużyciu zwierząt doświadczalnych. Model ten stanowi doskonałe narzędzie dla początkujących chirurgów do ćwiczenia techniki mankietowej, która jest obecnie stosowana w transplantacjach narządów litego u małych zwierząt.

training-sophisticated-microsurgical-technique-interposition-external

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Trening wyrafinowanych technik mikrochirurgicznych: Wszczepienie przeszczepu żyły skroniowej zewnętrznej w tętnicę szyjną wspólną u szczurów

Opisano zoptymalizowaną technikę mikrosurgicalnego tworzenia tętniaków rozwidleń tętniczych, naśladujących ludzkie tętniaki rozwidleń naczyń mózgowych. Torebka żylna zostaje wszyta w sztucznie stworzone prawdziwe rozwidlenie obu tętnic szyjnych wspólnych. Zastosowanie ułatwionych technik mikrosurgicalnych oraz agresywnego przeciwkrzeplenia i analgezji pooperacyjnej prowadzi do zminimalizowania wskaźników zachorowalności oraz wysokiego stopnia drożności tętniaków.

Mikrochirurgiczne tętniaki rozwidleń tętniczych z wykorzystaniem zastawki żylnej w modelu królika: aspekty techniczne

W tym filmie demonstrujemy procedurę chirurgicznego pobrania odcinka żyły szyjnej z modelu królika. Wycięty segment może być używany jako autologiczny przeszczep żyły do badania przerostu błony wewnętrznej, który rozwija się z powodu ciśnienia tętniczego krwi.

Pobranie przeszczepu żyły szyjnej od modelu królika: zabieg chirurgiczny polegający na wycięciu odcinka żyły szyjnej królika do badań ex vivo

Ten film pokazuje interpozycję tętnicy szyjnej królika z żyłą szyjną w celu wywołania przerostu żył wewnętrznych poprzez poddanie żył ciśnieniu tętniczemu. Model ten pomoże w badaniu interwencji molekularnych i genetycznych w celu osłabienia progresji przerostu błony wewnętrznej po operacjach rewaskularyzacji.

Interpozycja tętnicy szyjnej i żyły szyjnej: technika wywoływania przerostu żylnej błony wewnętrznej w modelu królika

W tym filmie pokazujemy zabieg chirurgiczny kaniulacji lewej tętnicy szyjnej na modelu szczurzym.

Kaniulacja tętnicy szyjnej w modelu szczurzym

Dostęp naczyniowy do pomiaru hemodynamiki, dostarczania płynów i pobierania próbek krwi jest ważny dla każdego badania na małym modelu zwierzęcym. Przedstawiamy technikę wszczepiania cewników do tętnicy szyjnej i żyły szyjnej wspólnej u znieczulonego szczura w celu podłączenia do systemu w celu przeprowadzenia monitorowania, infuzji i pobierania próbek.

Cewnikowanie tętnicy szyjnej i żyły szyjnej w celu wykonania pomiarów hemodynamicznych, infuzji i pobierania próbek krwi w świadomym modelu szczurzym

Opisany poniżej model uszkodzenia balonu szyjnego u szczura pozwala badaczom ocenić leki lub terapie, które negują przerost tętnic wywołany urazem. Opisano szczegółowe przygotowanie przedoperacyjne, zabieg chirurgiczny i opiekę pooperacyjną nad zwierzęciem.

Model uszkodzenia balonu szyjnego szczura do testowania terapii przeciwnaczyniowej

Ta metoda opisuje umieszczanie przeszczepów żył interpozycyjnych u królików, transdukcję przeszczepów i osiągnięcie trwałej ekspresji transgenu. Pozwala to na badanie fizjologicznych i patologicznych ról transgenów i ich produktów białkowych w przeszczepionych żyłach oraz testowanie terapii genowych w chorobach przeszczepów żył.

Króliczy model trwałej ekspresji transgenu w przeszczepach interpozycji żyły szyjnej do tętnicy szyjnej wspólnej

Obecny protokół ma na celu eksperymentalne stworzenie przerostu żył wewnętrznych poprzez poddanie żył działaniu ciśnienia krwi tętniczej w celu opracowania strategii osłabienia przerostu żył wewnętrznych po operacji rewaskularyzacji za pomocą przeszczepów żyłowych.

Model wstawiania żył królika naśladujący operację rewaskularyzacji przy użyciu przeszczepów żył do oceny przerostu błony wewnętrznej pod ciśnieniem tętniczym krwi

Szczegółowe techniki mikrochirurgiczne zostały zademonstrowane w celu stworzenia długoterminowego modelu kaniulacji żyły szyjnej dla sekwencyjnego pobierania krwi u tego samego zwierzęcia. Parametry fizjologiczne i hematologiczne były monitorowane w fazie rekonwalescencji szczura. Model ten został zastosowany do badania farmakokinetyki polifenoli podawanych doustnie bez wywoływania stresu u zwierząt.

Umiejętności mikrochirurgiczne w zakresie zakładania stałej kaniulacji żyły szyjnej u szczurów w celu seryjnego pobierania krwi z leku podawanego doustnie

Celem tego manuskryptu jest opisanie mikrochirurgicznych kroków wymaganych do przeprowadzenia heterotopowego przeszczepu krtani u myszy. Zaletami tego mysiego modelu w porównaniu z innymi zwierzęcymi modelami przeszczepu krtani są jego opłacalność oraz dostępność testów i danych immunologicznych.

Heterotopowy model myszy do badania przeszczepu krtani

Ten protokół eksperymentalny opisuje model szczura z kanalikiem limfatycznym wątroby, który umożliwia bezpośrednią i ilościową ocenę limfatycznego i naczyniowego drenażu wątroby. Model pozwala na jednoczesne pobieranie limfy wątrobowej i krwi ogólnoustrojowej w celu zbadania transportu, metabolizmu i sygnalizacji odpornościowej wątroby, wspierając badania farmakokinetyki leków i biologii specyficznej dla wątroby.

Kompleksowy model szczura do oceny dróg transportu wątrobowego poprzez jednoczesne pobieranie próbek limfatycznych i krwionośnych

Naucz się techniki mikrochirurgicznej wstawienia zewnętrznej żyły szyjnej do wspólnej tętnicy szyjnej u szczurów Sprague Dawley metodą mankietową. Protokół upraszcza zabieg i zwiększa przeżywalność przeszczepów.

Szkolenie wyrafinowanej techniki mikrochirurgicznej: wstawienie zewnętrznego przeszczepu żyły szyjnej do wspólnej tętnicy szyjnej u szczurów (Wideo) | JoVE Journal

Szkolenie z zaawansowanej techniki mikrosurgicalnej: Interpozycja przeszczepu z żyły szyjnej zewnętrznej w tętnicy szyjnej wspólnej u szczurów

Przeglądaj więcej filmów