Dwu- i trójwymiarowe obrazowanie żywych komórek białek odpowiedzi na uszkodzenia DNA

Demonstracja ta wykorzystuje obrazowanie żywych komórek w dwóch kolorach i 3D, aby zrozumieć przestrzenne relacje czasowe białek zaangażowanych w odpowiedź na uszkodzenie DNA. Po pierwsze, przetransfekuj lub przetransdukuj wybraną linię komórkową za pomocą konstruktów ekspresyjnych zawierających odpowiednie markery fluorescencyjne. Tutaj M, Cherry i GFP uzyskują następnie serię filmów kontrolnych pokazujących fluorescencyjnie znakowane komórki w normalnych warunkach.

Następnie zastosuj odpowiednią obróbkę i uchwyć dane dotyczące wpływu leczenia na proces komórek fluorescencyjnych i przeanalizuj dane wideo pod kątem przestrzennych relacji czasowych białek. Ostatecznie mikroskopia fluorescencyjna żywych komórek może szczegółowo opisać dynamikę komórkową, taką jak tworzenie się ognisk 53 BP w odpowiedzi na czynniki uszkadzające DNA lub zachowanie 53 BP podczas mitozy. Po raz pierwszy zainteresowaliśmy się obrazowaniem stylu życia w dwóch i 3D, kiedy chcieliśmy zbadać, jak różne terapie wpływają na mitozę w niektórych liniach komórkowych.