Name: płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe (BAL) do badań; Uzyskanie odpowiedniej wydajności próbki (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-24T19:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Poznaj technikę płukania oskrzelowo-pęcherzykowego z użyciem niskociśnieniowej ssawki do pobierania komórek immunologicznych z płuc. Metoda zapewnia bezpieczeństwo pacjenta i zachowanie żywotności komórek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękuję Elenie Mitsi (asystentce naukowej) i sr. Carole Hancock (pielęgniarce badawczej) oraz personelowi teatru za ich wkład w filmowanie, a także Davidowi Shawowi (pielęgniarce badawczej) za jego wsparcie w naszych badaniach nad bronchoskopią. Dziękujemy również naszej wolontariuszce Rebecce Dunphy za zgodę na sfilmowanie tego zabiegu.

1. Osoby badane są witane po przyjeździe przez pielęgniarkę zajmującą się badaniami układu oddechowego
<ol>
	<li>Badany pościł przez >4 godzinę w przypadku pokarmów stałych i 2 godziny w przypadku klarownych płynów1.</li>
	<li>Zabieg jest wykonywany w trybie jednodniowym z odpowiednimi kontrolami przed i po zabiegu (zgodnie ze standardową polityką szpitala).</li>
	<li>Podmiot ma na sobie szpitalny fartuch.</li>
	<li>Wprowadza się kaniulę o małej średnicy (najlepiej do lewej ręki) i pozostaje na miejscu do końca okresu rekonwalescencji po zabiegu1.</li>
	<li>Wykonywane są obserwacje przed zabiegiem (ciśnienie krwi, tętno, saturacja tlenem [sats]).</li>
	<li>Pacjent zostaje przeniesiony do pracowni bronchoskopii.</li>
</ol>
2. Pacjent jest przygotowywany do zabiegu w gabinecie przez doświadczonego w bronchoskopii klinicystę zajmującego się badaniami układu oddechowego
<ol>
	<li>Dołączony jest sprzęt monitorujący, w tym: 3-odprowadzeniowe EKG, pulsoksymetr1,10 i ciśnieniomierz. Nie jest potrzebne wsparcie anestezjologiczne, w tym pisemna świadoma zgoda.</li>
	<li>Tlen może być dostarczany przez kaniulę nosową z prędkością do 4 l/min, aby osiągnąć sats >90%1.</li>
	<li>Operator sprawdza bronchoskop, w tym zapewnia skuteczne ssanie poprzez zasysanie sterylnego normalnego roztworu soli fizjologicznej.</li>
	<li>Znieczulenie miejscowe lidokainą uzyskuje się w przewodach nosowych (przy użyciu Instillagel1) i błonie śluzowej jamy ustnej (przy użyciu ksylokainy)</li>
	<li>Jeśli sedacja jest właściwa i żąda tego pacjent, podaje się dożylnie midazolam1. Odpowiedni środek odwracający działanie (flumazenil) jest natychmiast dostępny.</li>
	<li>Sprzęt do resuscytacji powinien być łatwo dostępny1,10.</li>
</ol>
3. Bronchoskop jest włożony i ustawiony
<ol>
	<li>Intubacja odbywa się zwykle przez nos. Jeśli nie jest to możliwe z powodu polipów nosa, stanu zapalnego małżowin usznych lub jakiegokolwiek dyskomfortu, pacjent jest intubowany przez usta (stosuje się ochraniacz na zęby, aby zapobiec uszkodzeniu lunety lub zębów pacjenta).</li>
	<li>Znieczulenie miejscowe na krtań wykonuje się za pomocą 4% lidokainy, zwykle stosuje się łącznie 4-6 ml. Często powoduje to kaszel po zakropleniu.</li>
	<li>Struny głosowe są przepuszczane, a następnie znieczulenie błony śluzowej przy użyciu 2 ml podwielokrotności 2% lidokainy w carina, w podziale prawego dolnego płata (RLL) i prawego środkowego płata (RML) oraz przy wejściu RML.</li>
	<li>Bronchoskop umieszcza się w obrębie RML, najlepiej w segmencie przyśrodkowym, w pozycji, w której jest wystarczająco dystalny, aby znajdować się w bezpiecznej pozycji, ale nie za dystalnie, tak że drogi oddechowe zapadają się po zastosowaniu ssania ("test mrugnięcia" przy użyciu przycisku ssania).</li>
	<li>Dobre ułożenie jest wskazywane podczas testu mrugnięcia przez bronchoskop, który może być w pełni utrzymany w pozycji przez bronchoskopistę oraz drogi oddechowe, które nie zamykają się całkowicie natychmiast po delikatnym odsysaniu.</li>
</ol>
4. BAL jest wykonywany
<ol>
	<li>Cztery strzykawki o pojemności 60 ml są wstępnie napełniane podgrzanym roztworem soli fizjologicznej - 60 ml, 50 ml, 50 ml i 40 ml w kolejnych strzykawkach. Kiedy pacjent i bronchoskopista są gotowi, asystent bronchoskopii wprowadza pierwszą strzykawkę z solą fizjologiczną, podczas gdy bronchoskopista utrzymuje pozycję w RML.</li>
	<li>Delikatne ssanie dłoni jest następnie wykonywane przez asystenta za pomocą tego samego portu i strzykawki o pojemności 50 ml.</li>
	<li>Procedura ta jest następnie powtarzana kolejne 3 razy, z maksymalną objętością 200 ml używaną w naszej konkretnej technice.</li>
	<li>Odzyskany płyn BAL jest delikatnie wydalany do oznakowanych pojemników, które są już trzymane na topniejącym lodzie. Szklane pojemniki mogą być wstępnie silikonowane w celu zahamowania przyczepiania się komórek i maksymalizacji powrotu komórek.</li>
	<li>Płyn BAL wydaje się zamglony w świetle z powierzchniowymi bańkami mydlanymi utworzonymi przez środki powierzchniowo czynne.</li>
	<li>Bronchoskop jest powoli całkowicie wycofywany.</li>
	<li>Płyn BAL jest niezwłocznie transportowany na lodzie w celu natychmiastowego przetworzenia.</li>
</ol>
5. Odzyskiwanie podmiotu
<ol>
	<li>Pacjent jest odzyskiwany przez 2-4 godziny przez pielęgniarkę zajmującą się badaniami układu oddechowego na oddziale.</li>
	<li>W tym czasie mogą odpoczywać, a następnie jeść i pić tylko >60 min1 po zabiegu (gdy ich połknięcie zostanie ocenione jako bezpieczne), aby zmniejszyć ryzyko zachłyśnięcia.</li>
	<li>Obserwacje pozabiegowe są monitorowane i rejestrowane. Badanie kliniczne odbywa się przed wypisem ze szpitala.</li>
	<li>Pacjent jest informowany przed wypisem o częstych skutkach ubocznych (gorączka, łagodny dyskomfort w prawej klatce piersiowej podpiersiowej, ból gardła) i otrzymuje numer kontaktowy w przypadku wystąpienia znaczących skutków ubocznych1.</li>
	<li>Pacjent jest monitorowany po 1-5 dniach od zabiegu z kontaktem klinicznym. Może to nastąpić telefonicznie lub osobiście.</li>
</ol>
6. Komórki są izolowane w laboratorium - jeśli to możliwe, na topniejącym lodzie
<ol>
	<li>Objętość płynu BAL jest rejestrowana i filtrowana przez podwójną warstwę sterylnego wacika z gazy w celu usunięcia czopów śluzowych do wstępnie schłodzonych, sterylnych probówek wirówkowych o pojemności 50 ml.</li>
	<li>Komórki są granulowane przez odwirowanie w temperaturze 500 x g w temperaturze 4 °C przez 5-10 minut i przemywane przez wirowanie w 50 ml zimnego roztworu soli fizjologicznej. Wirowanie powtarza się raz.</li>
	<li>Komórki są ponownie zawieszane w pożywce hodowlanej (RPMI-1640 + 10% płodowa surowica bydlęca + 2 mM L-glutamina + penicylina [40 j.m./ml], streptomycyna [75 j.m./ml] i amfoterycyna B [0,5 j.m./ml]) i liczenie różnicowe przeprowadza się przy użyciu równej objętości błękitu trypanowego i hemocytometru.</li>
	<li>Zawiesina komórek jest normalizowana do wymaganej gęstości (używamy 1 x 106 komórek/ml), wprowadzana przez pipetowanie do odpowiednich płytek do hodowli tkankowych i inkubowana w temperaturze 37 °C przez 3 godziny, aby umożliwić przyleganie makrofagów. 1 ml tej zawiesiny komórek na studzienkę jest odpowiednia dla 24-dołkowych płytek hodowlanych.</li>
	<li>W przypadku pracy z limfocytami, po 3 godzinach inkubacji, pożywka hodowlana jest delikatnie pipetowana w górę iw dół 3x i zbierana. Pożywka ta zawiera limfocyty i nieprzylegające makrofagi i może być stosowana do oceny funkcji limfocytów; może być również stosowany na etapach oczyszczania, np. za pomocą kulek magnetycznych CD14 w celu usunięcia makrofagów.</li>
	<li>W przypadku pracy z makrofagami, po 3 godzinach inkubacji, pożywka jest ostrożnie usuwana przy minimalnym pipetowaniu i zastępowana świeżą, ciepłą pożywką bez antybiotyków (RPMI 1640 + 10% płodowej surowicy bydlęcej + 2 mM L-glutaminy). Makrofagi przylegają do płytki hodowli tkankowej (patrz ryc. 1).</li>
</ol>

<ol><li>BTS, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+British+Thoracic+Society+Bronchoscopy+Guideline+Committee+-+A+sub-Committee+of+the+Standards+of+Care+Committee+of+the+British+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">The British Thoracic Society Bronchoscopy Guideline Committee - A sub-Committee of the Standards of Care Committee of the British Thoracic Society.</a> Thorax. 56 (Suppl I), 1-21 (2001).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+recommendations+and+guidelines+for+bronchoalveolar+lavage+%28BAL%29+report+of+the+European+Society+for+Pneumology+Task+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir%22%5BJournal%5D)">Technical recommendations and guidelines for bronchoalveolar lavage (BAL) report of the European Society for Pneumology Task Group.</a> Eur. Respir. , 561-585 (1989).</li>
<li>Gordon, S. B., Irving, G. R., Lawson, R. A., Lee, M. E., Read, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+trafficking+and+killing+of+Streptococcus+pneumoniae+by+human+alveolar+macrophages+are+influenced+by+opsonins%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Intracellular trafficking and killing of Streptococcus pneumoniae by human alveolar macrophages are influenced by opsonins.</a> Infect. Immun. 68, 2286-2293 (2000).</li>
<li>Gordon, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+immunoglobulin+responses+to+Streptococcus+pneumoniae+are+altered+but+not+reduced+in+human+immunodeficiency+virus-infected+Malawian+adults%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Pulmonary immunoglobulin responses to Streptococcus pneumoniae are altered but not reduced in human immunodeficiency virus-infected Malawian adults.</a> J. Infect. Dis. 188, 666-670 (2003).</li>
<li>Fullerton, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Domestic+smoke+exposure+is+associated+with+alveolar+macrophage+particulate+load%5BTitle%5D)+AND+%22Trop.+Med.+Int.+Health%22%5BJournal%5D)">Domestic smoke exposure is associated with alveolar macrophage particulate load.</a> Trop. Med. Int. Health. 14, 349-354 (2009).</li>
<li>Jambo, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+CD4%2B+T+cell+responses+to+respiratory+antigens+are+impaired+in+HIV-infected+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar CD4+ T cell responses to respiratory antigens are impaired in HIV-infected adults.</a> Thorax. 66, 375-382 (2011).</li>
<li>Eagan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+fluid+immunoglobulin+from+HIV-infected+subjects+has+impaired+opsonic+function+against+pneumococci%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Lung fluid immunoglobulin from HIV-infected subjects has impaired opsonic function against pneumococci.</a> Clin. Infect. Dis. 44, 1632-1638 (2007).</li>
<li>Rose, A. S., Knox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+as+a+research+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage as a research tool.</a> Sem. Respir. Crit. Care Med. 28, 561-573 (2007).</li>
<li>Wright, A. K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Nasal+Challenge+with+Streptococcus+pneumoniae+is+Immunising+in+the+Absence+of+Carriage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage.</a> PLoS Pathog. , (2012).</li>
<li>Bolliger, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERS%2FATS+statement+on+interventional+pulmonology+European+Respiratory+Society%2FAmerican+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">ERS/ATS statement on interventional pulmonology European Respiratory Society/American Thoracic Society.</a> Eur. Respir. J. 19, 356-373 (2002).</li>
<li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Duncan, P. G., Lalor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+I.+Technical+aspects+and+intersubject+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. I. Technical aspects and intersubject variability.</a> Chest. 94, 275-280 (1988).</li>
<li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Redondo, A. A., Duncan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+2.+Safety+and+results+of+repeated+BAL%2C+and+use+in+the+assessment+of+intrasubject+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. 2. Safety and results of repeated BAL, and use in the assessment of intrasubject variability.</a> Chest. 94, 281-285 (1988).</li>
<li>De Brauwer, E. I., Jacobs, J. A., Nieman, F., Bruggeman, C. A., Drent, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+lavage+fluid+differential+cell+count.+How+many+cells+should+be+counted%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Quant.+Cytol.+Histol%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar lavage fluid differential cell count. How many cells should be counted.</a> Anal. Quant. Cytol. Histol. 24, 337-341 (2002).</li>
<li>Mtunthama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malawians+permit+research+bronchoscopy+due+to+perceived+need+for+healthcare%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Ethics%22%5BJournal%5D)">Malawians permit research bronchoscopy due to perceived need for healthcare.</a> J. Med. Ethics. 34, 303-307 (2008).</li>
<li>Pereira, W., Kovnat, D. M., Snider, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+cooperative+study+of+complications+following+flexible+fiberoptic+bronchoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">A prospective cooperative study of complications following flexible fiberoptic bronchoscopy.</a> Chest. 73, 813-816 (1978).</li>
<li>Huang, Y. C., Bassett, M. A., Levin, D., Montilla, T., Ghio, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+phase+reaction+in+healthy+volunteers+after+bronchoscopy+with+lavage%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Acute phase reaction in healthy volunteers after bronchoscopy with lavage.</a> Chest. 129, 1565-1569 (2006).</li>
<li>Gritzfeld, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+Human+Pneumococcal+Carriage%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental Human Pneumococcal Carriage.</a> J. Vis. Exp. (72), (2013).</li>
</ol>

Andrea M. Collins jest finansowana przez Fundację Billa i Melindy Gatesów i nie ma potencjalnych sprzecznych interesów. Otrzymała fundusze od firm Merck (MSD) i GSK na udział w konferencjach i opłaty za wykłady. 50 badań BAL wykonanych niezależnie.
Jamie Rylance jest finansowany przez Wellcome Trust i nie ma konfliktu interesów. Nie otrzymał żadnych innych środków. 70 badań BAL wykonanych niezależnie.
Daniel G. Wootton jest finansowany przez NIHR PhD Fellowship i nie ma konfliktu interesów. 40 badań BAL wykonanych niezależnie.
Angela D. Wright nie ma potencjalnych sprzecznych interesów. Asystował przy ponad 100 badaniach BAL.
Adam K. A. Wright nie ma potencjalnych sprzecznych interesów. Przetworzył ponad 50 próbek BAL.
Duncan G. Fullerton nie ma potencjalnych sprzecznych interesów. 100 badań BAL wykonanych niezależnie.
Stephen B. Gordon nie ma potencjalnie sprzecznych interesów. Otrzymał fundusze od firm Merck (MSD) i Novartis na udział w konferencjach. 400 badań BAL wykonanych niezależnie.

W celu osiągnięcia dobrych wyników pomocne są:
<ol>
	<li>Dobre znieczulenie u podstawy języka i tylnej części jamy ustnej gardła. Jest to ważne, ponieważ poprawia tolerancję zabiegową i ogólny komfort pacjenta.</li>
	<li>Można użyć bronchoskopu pediatrycznego (średnica zewnętrzna 3,4-3,6 mm) lub dorosłego (średnica zewnętrzna 4,8-5,9 mm).</li>
	<li>Jeśli podczas intubacji donosowej występuje dyskomfort, preferowana jest intubacja doustna. Ogólnie rzecz biorąc, intubacja nosa jest albo prostą techniką, albo należy z niej zrezygnować.</li>
	<li>Po wstępnym wkropleniu lidokainy do jamy ustnej gardła pacjent może preferować wycofanie bronchoskopu w oczekiwaniu na początek znieczulenia, zwłaszcza jeśli bronchoskop jest wprowadzany doustnie.</li>
	<li>Upewnij się, że co najmniej 10 strzykawek o pojemności 10 ml jest wstępnie napełnionych tylko 2-4 ml lidokainy. W strzykawkach należy pozostawić powietrze, które pozwoli na lepsze dostarczenie znieczulenia bezpośrednio na pasmo wrozdzielkowe i błonę śluzową oskrzeli.</li>
	<li>Ponieważ kaszel podczas zabiegu znacznie zmniejsza wydajność BAL; Stosowanie podgrzanej soli fizjologicznej i dobre znieczulenie błony śluzowej są ważne, aby to zmniejszyć.</li>
	<li>Strzykawki o pojemności 50 ml muszą być wstępnie napełnione podgrzanym roztworem soli fizjologicznej. Często zdarza się, że pierwsze 50 ml wkroplonej soli fizjologicznej daje od 10 do 20 ml z powodu utraty martwej przestrzeni, a pozostała część spływa do końcowych dróg oddechowych. Dalsze podwielokrotności zwracają większą część płynu.</li>
	<li>Operator powinien zawsze sprawdzić bronchoskop przed intubacją, w tym upewnić się, że jest to skuteczne ssanie poprzez zasysanie sterylnego normalnego roztworu soli fizjologicznej. Utrata ssania może często wystąpić z powodu załamania rurki lub nieszczelności wokół połączeń z bronchoskopem lub urządzeniem ssącym.</li>
	<li>Podczas ręcznego odsysania idealnie byłoby, gdyby drogi oddechowe nie zapadły się. Jeśli ssanie nawracająco zapada drogi oddechowe, powroty BAL są redukowane do mechanizmu zastawki, a miejscowe zapalenie i krwawienie są bardziej prawdopodobne: to z kolei sprawia, że drogi oddechowe są bardziej drażliwe i bardziej prawdopodobne jest kaszel. W związku z tym ważny jest wybór najodpowiedniejszej gałęzi podsegmentowej RML i stosowanie niskich ciśnień ssania.</li>
	<li>Gdy powietrze jest stale zasysane, należy ponownie sprawdzić połączenie strzykawki z bronchoskopem, a także położenie bronchoskopu w dystalnych drogach oddechowych. Jeśli jest to powtarzający się problem, po zabiegu upewnij się, że w samym bronchoskopie nie ma.</li>
	<li>BAL od palaczy jest często ciemniejszy ze względu na obecność cząstek wewnątrzkomórkowych. Palacze mogą gorzej tolerować bronchoskopię i mieć zwiększony kaszel.</li>
	<li>Preferowana wydajność objętościowa BAL wynosi >100 ml. Wydajność >150 ml jest doskonała. Nie doświadczyliśmy żadnych plonów > 170 ml. Nie ma liniowej zależności między wydajnością komórek a wydajnością objętości BAL.</li>
	<li>Z naszego doświadczenia wynika, że plony <100 ml częściej prowadzą do skutków ubocznych, takich jak kaszel, ból w klatce piersiowej i gorączka. Zalecamy, aby osoby z wydajnością <100 ml odzyskały lewą pozycję boczną, co może pomóc w drenażu pozostałego płynu płucnego.</li>
	<li>Kontakt kliniczny należy nawiązać z pacjentem w ciągu 1-5 dni, aby upewnić się, że nie wystąpią żadne skutki uboczne.</li>
	<li>Sedacja midazolamem jest stosowana u <50% pacjentów w Wielkiej Brytanii i <5% w Malawi. Wydaje się, że midazolam nie poprawia bezpośrednio tolerancji; Niektórzy operatorzy uważają, że sedacja może czasami przynieść efekt przeciwny do zamierzonego, jeśli chodzi o utrzymanie spójnego (i uspokajającego) dialogu z pacjentem.</li>
	<li>Z naszego doświadczenia wynika, że ta technika wymaga znacznej nauki. Na przykład koordynacja między lekarzem a pielęgniarką wymaga czasu, a plony są często niższe na początku procesu uczenia się.</li>
	<li>U osób zakażonych wirusem HIV profilaktycznie stosujemy antybiotyki prebronchoskopowe.</li>
</ol>

Tło
Bronchoskopia światłowodowa została opracowana do praktyki klinicznej; jest szeroko stosowana zarówno diagnostycznie, jak i terapeutycznie1,2. Płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe (BAL) usuwa nieprzylegające komórki i płyn wyściełający płuca z powierzchni błony śluzowej; Biopsja służy do pobierania próbek tkanek błony śluzowej i podśluzówkowej. W środowiskach badawczych BAL umożliwia pobieranie próbek wrodzonych (makrofagi płucne3-5), komórkowych (limfocyty B i T6) i humoralnych (immunoglobulina7) odpowiedzi w płucach.
BAL jest międzynarodowo akceptowany do celów badawczych>8, a od 1999 roku technika ta została przeprowadzona na >1,000 osób w Wielkiej Brytanii i Malawi przez naszą grupę. Stosujemy tę technikę w badaniach wrodzonych, komórkowych i humoralnych odpowiedzi immunologicznych na antygen pneumokokowy, w tym eksperymentalne nosicielstwo pneumokokówu ludzi 9,17, dym z biomasy5, HIV i szczepienia oraz badania nad leczeniem wspomagającym w leczeniu wyzdrowienia z zapalenia płuc. Nasza technika wykorzystuje delikatne ręczne odsysanie wkraplanego płynu; ma to na celu maksymalizację zwracanej objętości BAL i przyłożenie minimalnej siły ścinającej do nabłonka rzęskowego w celu zachowania struktury i funkcji komórek w płynie BAL.
W kontekście badawczym BAL wykorzystuje inną technikę niż ta praktykowana przez lekarzy zajmujących się chorobami układu oddechowego i intensywnej terapii (często nazywana płukaniem oskrzeli, płukaniem, płukaniem lub BAL), którzy mają na celu uzyskanie korzyści diagnostycznych lub terapeutycznych. Technika badawcza ma na celu pobieranie komórek i zachowanie ich żywotności w celu ułatwienia wzrostu komórek w hodowli ex vivo. Z tych powodów technika badawcza wykorzystuje większą objętość wkraplania (zwykle rzędu 200 ml) i wykorzystuje ręczne odsysanie w celu zmniejszenia uszkodzenia komórek. Pacjentom podaje się znieczulenie miejscowe, proponuje się świadomą sedację (midazolam) i dobrze znoszą zabieg przy minimalnych skutkach ubocznych. Ustne i pisemne informacje na temat zwiększają tolerancję, a pisemna świadoma zgoda jest obowiązkowa1.
Cel
Ogólnym celem jest, aby procedura była bezpieczna i skuteczna. Pacjenci nie powinni doświadczać żadnych zaburzeń fizjologicznych, a operatorzy powinni konsekwentnie pobierać od nich ponad 100 ml BAL. Po zabiegu pacjenci powinni odczuwać minimalne skutki uboczne.
Bezpieczeństwo
Bezpieczeństwo obiektu jest najważniejsze. Tematy są starannie wybierane na podstawie jasnych kryteriów włączenia i wykluczenia. Protokół ten zawiera opis potencjalnych zagrożeń i kroków podjętych w celu ich ograniczenia.
Przeciwwskazania do bronchoskopii badawczej mogą być wyrażone jako bezwzględne lub względne i są uwzględnione w naszym protokole badania jako kryteria wykluczenia i włączenia. Wszyscy nasi pacjenci są poddawani badaniom przesiewowym, aby zapewnić pełnię zdrowia.
Bezwzględne przeciwwskazania obejmują niestabilny kręgosłup szyjny, niedotlenienie bez reakcji, niestabilną dławicę piersiową, skazę krwotoczną i złośliwą arytmię serca.
Względne przeciwwskazania, w tym te związane ze zwiększonym częstym występowaniem powikłań, obejmują:
Ogólne: słabo współpracujący temat1, jakikolwiek znaczący ogólny problem medyczny, np. epilepsja, wcześniej źle tolerowana bronchoskopia, znane działania niepożądane na lidokainę lub midazolam, ciąża, złe odżywianie.
Oddechowe: niedotlenienie [saturacje (sats) powietrza <94%], hiperkapnia, niestabilna astma1, znacznie upośledzona funkcja oddechowa1 (FEV1< 1 L), nadciśnienie płucne.
Sercowo-naczyniowe: mocznica, w ciągu 6 tygodni od zawału mięśnia sercowego1, niedrożność żyły głównej górnej.
Inne: immunosupresja (nasza grupa regularnie przeprowadza tę procedurę u osób zakażonych wirusem HIV).
Zobacz Tabelę 1 - Ryzyko związane z BAL dla badań.

<table><tbody><tr><td>Bronchoskop światłowodowy, światło i źródło ssania</td><td>nieokreślony</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> Fartuch chirurgiczny, sterylne rękawiczki </td><td>nieokreślony</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> Ciśnieniomierz </td><td>nieokreślony</td><td></td><td> Do ciągłego monitorowania pacjenta </td></tr><tr><td> Pulsoksymetr </td><td>nieokreślony</td><td></td><td> Do ciągłego monitorowania pacjenta </td></tr><tr><td>3-odprowadzeniowy monitor EKG</td><td>nieokreślony</td><td></td><td> Do ciągłego monitorowania pacjenta </td></tr><tr><td>Dostarczanie tlenu przez nos 2-4 l/min</td><td>nieokreślone</td><td> <</td><td> p> </td></tr><tr><td> Lidokaina 10% spray (Xylocaine) </td><td>AstraZeneca</td><td></p</td><td>>Do znieczulenia miejscowego</td></tr><tr><td> Chlorowodorek lidokainy 2% </td><td>nieokreślony</td><td></td><td>Do znieczulenia miejscowego</td></tr><tr><td> Lidokaina w żelu (Instillagel) </td><td>Farco-Pharma, Niemcy</td><td></td><td> Produkty alternatywne dostępne u innych dostawców </td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna, sterylna, 200 ml</td><td>nieokreślona</td><td><</td><td>p>Ciepła do 30 &#176; C</p</td></tr><tr><td>>10 ml strzykawka stożkowa (x10)</td><td>nieokreślona</td><td></td><td> Do podawania lidokainy </td></tr><tr><td>Kaniula dożylna 18 G</td><td>nieokreślona</td><td></td><td> Do podawania midazolamu </td></tr><tr><td> Midazolam </td><td>nieokreślona</td><td></td><td> Do sedacji </td></tr><tr><td> Flumazenil </td><td>nieokreślone</td><td></td><td> Odwrócenie sedacji benzodiazepinowej (tylko do użytku w nagłych wypadkach) </td></tr><tr><td>60 ml strzykawki ze stożkowym końcem (x4)</td><td>nieokreślone</td><td></td><td>Do normalnego wstrzykiwania soli fizjologicznej i pobierania płynu BAL. Może wymagać podłączenia złącza do port iniekcyjny bronchoskopu.</td></tr><tr><td> Sterylny wacik z gazy </td><td>Vernaid, UK<</td><td>p></td><td> Alternatywne produkty dostępne u innych dostawców</tr><tr><td> > Sterylny pojemnik na płyn BAL </td><td>Zobacz tekst i komentarze</td><td></td><td>Silikonowane szklane butelki zmniejszają przyleganie makrofagów. Alternatywnie można użyć probówek wirówkowych o pojemności 50 ml (całkowita pojemność 200 ml)</td></tr><tr><td> Sigmacote </td><td>Sigma, UK<</td><td>p>SL2</td><td> Tylko w przypadku stosowania butelek ze szkła silikonowanego. Uwaga: Szkodliwy i łatwopalny. W przypadku stosowania należy postępować zgodnie ze środkami ostrożności wyszczególnionymi w instrukcjach producenta s MSDS </td></tr><tr><td> Wirówka </td><td>nieokreślona</td><td></td><td>Pojemność probówki co najmniej 4 x 50 ml. Chłodzenie do 4 &#176; Preferowane C.</td></tr><tr><td> Wirówka cytospinowa Shandon </td><td>Thermo Scientific, UK<</td><td>p></td><td> Tylko do liczenia różnicowego </td></tr><tr><td> RPMI 1640 z L-glutaminą </td><td>Sigma, UK<</td><td>p>R8758</td><td> Alternatywne produkty dostępne u innych dostawców </td></tr><tr><td> Surowica bydlęca płodu </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>F6178</td><td> Alternatywne produkty dostępne u innych dostawców </td></tr><tr><td> Penicylina-Streptomycyna </td><td>Sigma, UK<</td><td>p>P4333</td><td> Produkty alternatywne dostępne u innych dostawców </td></tr><tr><td> Amfoterycyna B </td><td>Sigma, UK</td><<td>p>A2942</td><td> Produkty alternatywne dostępne u innych dostawców </td></tr><tr><td> Płytki do hodowli tkankowych </td><td>Greiner Bio-One, UK<</td><td>p>662160</td><td> Produkty alternatywne dostępne u innych dostawców </td></tr><tr><td> Szkiełka mikroskopowe </td><td>nieokreślone</td><td></td><td> Tylko do liczenia różnicowego </td></tr><tr><td> Shandon cytofunnel </td><td>Thermo Scientific, Wielka Brytania<</td><td>p>A78710003 </td><td> Tylko dla zliczania różnicowego </td></tr><tr><td> Shandon cytoclip </td><td>Thermo Scientific, UK<</td><td>p>59910052</td><td> Tylko do liczenia różnicowego </td></tr><tr><td> Zestaw do barwienia Hemacolor (utrwalacz, odczynniki czerwone i niebieskie) </td><td>Merck, Niemcy<</td><td>p>111661</td><td> Stosować zgodnie z zaleceniami producenta" s instrukcje </td></tr></tbody></table>

płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe (bal) do badań; uzyskanie odpowiedniej wydajności próbki

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

Opisujemy technikę badawczą bronchoskopii światłowodowej z płukaniem oskrzelowo-pęcherzykowym (BAL) przy użyciu ręcznego ręcznego ssania w celu usunięcia nieprzylegających komórek i płynu wyściełającego płuca z powierzchni błony śluzowej. W środowiskach badawczych BAL umożliwia pobieranie próbek odpowiedzi wrodzonych (makrofagi płucne), komórkowych (limfocyty B i T) i humoralnych (immunoglobuliny) w płucach.
BAL jest międzynarodowo akceptowany do celów badawczych i od 1999 roku technika ta została przeprowadzona na > 1000 osób w Wielkiej Brytanii i Malawi przez naszą grupę.
Nasza technika wykorzystuje delikatne ręczne odsysanie wkraplanego płynu; ma to na celu maksymalizację zwracanej objętości BAL i przyłożenie minimalnej siły ścinającej do nabłonka rzęskowego, aby zachować strukturę i funkcję komórek w płynie BAL oraz zachować żywotność, aby ułatwić wzrost komórek w hodowli ex vivo. W związku z tym technika badawcza wykorzystuje większą objętość wkraplania (zwykle rzędu 200 ml) i wykorzystuje ręczne odsysanie w celu zmniejszenia uszkodzenia komórek.
Pacjentom podaje się znieczulenie miejscowe, oferuje się świadomą sedację (midazolam) i dobrze znoszą zabieg przy minimalnych skutkach ubocznych. Ustne i pisemne informacje na temat poprawiają tolerancję, a pisemna świadoma zgoda jest obowiązkowa. Bezpieczeństwo obiektu jest najważniejsze. Tematy są starannie wybierane na podstawie jasnych kryteriów włączenia i wykluczenia.
Ten protokół zawiera opis potencjalnych zagrożeń i kroków podjętych w celu ich ograniczenia, listę przeciwwskazań, kontrole przed i po zabiegu, a także precyzyjną bronchoskopię i techniki laboratoryjne.

Dobre wyniki kliniczne to objętość BAL powyżej 100 ml oraz pacjent, który odczuwał co najwyżej niewielki dyskomfort (patrz Tabela 1). Wymaga to rozluźnienia i współpracy pacjenta. Klinicysta musi być pewny siebie, w pełni przygotowany (Materiały) i wykazujący się zrozumieniem wobec wolontariusza.
Opisano zmienność międzyosobniczą i wewnątrzosobniczą w uzysku komórkowym (w tym w rozkładzie komórkowym). Rozkład komórkowy u zdrowych badanych zazwyczaj wykazuje &gt;90% makrofagów, niewielką liczbę neutrofili (&lt;2%) oraz limfocytów (5-10%). Komórki BAL odwirowane na preparaty szkiełkowe można barwić barwnikiem różnicującym jądra komórkowe w celu uzyskania tych informacji (Rysunek 1). Na Rysunku 1 komórki BAL zostały utrwalone i zabarwione metodą Hemacolor zgodnie z instrukcją producenta. Aby uzyskać wiarygodne wyniki dla makrofagów, neutrofili i limfocytów, należy policzyć co najmniej 300 komórek; w przypadku rzadszych typów komórek – 500 komórek.
<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Zagrożenie</td>
			<td>Ryzyko</td>
			<td>W niniejszym protokole zredukowano przez:</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="3">Wpływ bronchoskopii i BAL1,14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Łagodny dyskomfort</td>
			<td>&lt;25%14,#</td>
			<td>Odpowiednia analgezja i sedacja. Pewne i pełne troski podejście do badanego podmiotu.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krwotok z nosa</td>
			<td>&lt;1%#</td>
			<td>Stosować jedynie lekki nacisk podczas intubacji przez nos. W przypadku wystąpienia dyskomfortu u badanego lub zbyt wąskiego otworu – zastosować intubację przezustną.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krwawienie w drogach oddechowych (hemoptyza)</td>
			<td>&lt;0.1%*15</td>
			<td>Nie pobrano biopsji. Staranna kontrola podczas bronchoskopii – unikanie błony śluzowej dróg oddechowych.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nudności, wymioty i zachłystowe zapalenie płuc</td>
			<td>&lt;0.02%14,#</td>
			<td>Post z pokarmów stałych &gt;4 h przed procedurą1. Odpowiednie znieczulenie miejscowe. Pozycja półleżąca podczas procedury. Staranna obserwacja po zabiegu.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gorączka</td>
			<td>0.0114 - 1%#,16</td>
			<td>Dotyczy stanu zapalnego i może zostać zminimalizowane poprzez maksymalną objętość pobrania BAL. Wyłącznie BAL jednego płata.#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ból nosa/gardła i chrypka</td>
			<td>&lt;25%14,#</td>
			<td>Odpowiednie znieczulenie miejscowe nosa, gardła i krtani (w celu zminimalizowania odruchu kaszlowego).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zakażenie</td>
			<td>&lt;0,1% u osób HIV-ujemnych, 1% w grupie osób HIV-dodatnich14,#</td>
			<td>Standardowa procedura mycia bronchoskopu1. BAL tylko jednego płata. # Wczesne rozpoznanie infekcji: badanie kliniczne w ciągu 1 godziny oraz kontakt kliniczny od 1 do 5 dni po bronchoskopii.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ból w klatce piersiowej/kaszel</td>
			<td>&lt;0.2%14,#</td>
			<td>Wyłącznie BAL z jednego płata. Maksymalna objętość zebranego BAL.#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="3">Działanie leków: lidokaina, midazolam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arytmia</td>
			<td>Bardzo rzadkie*</td>
			<td rowspan="3">Maksymalnie 5 mg/kg14 zastosowano lidokainę. Podano podgrzaną sól fizjologiczną. # Pulsoksymetria (saturacja) &gt;90% przy suplementacji tlenem), monitorowanie funkcji serca przez cały czas trwania procedury. Antagonista benzodiazepin (flumazenil) dostępny w trybie natychmiastowym.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dezorientacja / pobudzenie</td>
			<td>&lt;0.1%†#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depresja krążeniowo-oddechowa</td>
			<td>Bardzo rzadko*</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
* Nieprzeprowadzone w naszej grupie w ponad 1 500 procedurach badawczych.
† Reakcja idiosynkratyczna, a nie zależna od dawki.
# Doświadczenie naszej grupy w ponad 1500 procedurach badawczych.
Tabela 1. Ryzyko związane z BAL w badaniach. Zawiera ona opis zagrożeń lub ryzyka oraz sposób ich ograniczania poprzez zastosowanie opisanego techniki. Uwzględniono skutki bronchoskopii/BAL, a także działanie zastosowanych leków.
<img alt="Obraz mikroskopowy morfologii komórek, przedstawiający różne stadia mitozy i cytokinezy." fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/4345/4345fig1highres.jpg" width="500" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 1"> Rysunek 1. Preparat mikroskopowy przedstawiający makrofagi BAL oraz sporadycznie występujące neutrofile. Komórki BAL zostały utrwalone w metanolu i zabarwione barwnikiem Hemacolor czerwonym (eozyna Y) i niebieskim (azure B).

Opisujemy technikę badawczą bronchoskopii światłowodowej i płukania oskrzelowo-pęcherzykowego za pomocą odsysania niskociśnieniowego. Technika ta służy do pobierania komórek odpornościowych z powierzchni oskrzelowo-pęcherzykowych płuc. Stosuje się znieczulenie miejscowe i łagodną świadomą sedację (midazolam). Badani dobrze tolerują zabieg i odczuwają minimalne skutki uboczne.

płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe (BAL) do badań; Uzyskanie odpowiedniej wydajności próbki

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest bezpieczne i skuteczne przeprowadzenie płukania oskrzelowo-pęcherzykowego. Osiąga się to w pierwszej kolejności poprzez zapewnienie bezpieczeństwa, współpracy i komfortu wybranych osób badanych, zgodnie z jasno określonymi kryteriami włączenia i wykluczenia.Wykonuje się również kontrole i obserwacje przedproceduralne. Następnie, po wejściu do gabinetu bronchoskopii i sprawdzeniu całego sprzętu, pacjentowi podaje się znieczulenie miejscowe oraz oferuje sedację świadomą. Następnie, po intubacji strun głosowych, bronchoskop wprowadza się do odpowiedniej pozycji w obrębie dolnego płata prawego (RML).Zapewnia to uzyskanie odpowiedniej objętości płynu z BAL. Na koniec płyn z BAL pobiera się za pomocą delikatnego ssania ręcznego, a następnie niezwłocznie transportuje w lodzie do natychmiastowej obróbki laboratoryjnej. Ostatecznie technika ta pozwala na pozyskanie komórek i zachowanie ich żywotności, co ułatwia wzrost komórek w hodowli ex vivo.Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami stosowanymi przez lekarzy pulmonologów i intensywnej terapii, często określanych jako płukanie oskrzeli, płukanie pęcherzykowo-oskrzeli lub płukanie pęcherzyków płucnych, których celem jest uzyskanie korzyści diagnostycznych lub terapeutycznych, jest zastosowanie łagodnego ręcznego odsysania wprowadzonej cieczy. Rozwiązanie to ma na celu maksymalizację objętości odzyskanego płynu z pęcherzyków płucnych oraz wywarcie minimalnej siły ścinającej na nabłonek migawkowy, aby zachować strukturę i funkcję komórek w płynie pęcherzykowym. Procedura płukania pęcherzykowo-oskrzeli jest wykonywana w trybie jednodniowym, z odpowiednią kontrolą przed i po zabiegu zgodnie ze standardową polityką szpitalną, w tym z zapewnieniem, że pisemny formularz zgody został prawidłowo podpisany i opatrzony datą.Po przybyciu z badanym spotyka się pielęgniarka ds. badań oddechowych, która następnie przeprowadza wszystkie niezbędne kontrole przedzabiegowe, w tym sprawdzenie, czy badany pościł przez minimum cztery godziny w przypadku pokarmów stałych i dwie godziny w przypadku płynów. Jeśli badany spełnia wszystkie wymagane kryteria, przebiera się w koszulę szpitalną, a następnie wykonuje się obserwacje przedzabiegowe, obejmujące pomiary ciśnienia tętniczego, tętna i saturacji tlenowej. W idealnym przypadku w lewą dłoń wprowadza się kaniulę o małej średnicy.Pacjent pozostanie w pomieszczeniu C2 aż do końca okresu rekonwalescencji po zabiegu. Następnie zostaje on przeniesiony do gabinetu bronchoskopii, w którym obecny jest doświadczony bronchoskopista specjalizujący się w badaniach pulmonologicznych. Następnie do pacjenta podłączany jest sprzęt monitorujący.Zestaw ten obejmuje trójoprowadzeniowe EKG, manometr A, rys. o oraz pulsoksymetr. Wsparcie anestezjologiczne nie jest wymagane. Przed wprowadzeniem bronchoskopu wszystkim ochotnikom zakłada się kaniulę nosową; tlen jest podawany z przepływem do czterech litrów na minutę, jeśli saturacja spadnie poniżej 96%.Na tym etapie operator przeprowadza kontrole wstępne bronchoskopu. Obejmuje to sprawdzenie skuteczności ssania poprzez aspirację sterylnej soli fizjologicznej. Gdy operator upewni się, że bronchoskop działa optymalnie, podaje znieczulenie miejscowe do przewodów nosowych i błony śluzowej jamy ustnej badanego, stosując odpowiednio instill agel oraz Xylocaine.Jeśli sedacja jest wskazana i została poproszona przez badanego, podaje się odpowiednią dawkę midazolamu dożylnie. Jak przy wszystkich procedurach z zastosowaniem znieczulenia, należy mieć natychmiastowy dostęp do odpowiedniego środka odwracającego działanie leku. Dodatkowo należy upewnić się, że pod ręką znajduje się sprzęt do resuscytacji.Badany zostaje zaintubowany przez nos. Jeśli nie jest to możliwe, można przeprowadzić intubację przez usta, pod warunkiem zastosowania odpowiedniego klocka nadgardlnego. Po przejściu przez struny głosowe podaje się znieczulenie miejscowe w ilości od czterech do sześciu mililitrów 4% lidokainy.Następnie podaje się znieczulenie błon śluzowych, wykorzystując dwie mililitrowe alikwoty 2% lidokainy w obrębie kąta głównego, na rozdzielnicy dolnego i środkowego płata prawego (RML) oraz u wejścia do RML. Na koniec bronchoskop zostaje wprowadzony do środkowego płata prawego i idealnie ustawiony w segmencie przyśrodkowym w bezpiecznej, dystalnej pozycji. Należy wykonać tzw. test mrugnięcia (wink test) za pomocą przycisku ssania, aby upewnić się, że bronchoskop nie znajduje się w zbyt dystalnym położeniu, co mogłoby spowodować zapadnięcie się dróg oddechowych.Cztery strzykawki o pojemności 60 ml są wstępnie napełnione ogrzaną, sterylną solą fizjologiczną w objętościach: jedna 60 ml, dwie po 50 ml oraz jedna 40 ml. Gdy pacjent i bronchoskopista są gotowi, asystent bronchoskopii podaje pierwszą strzykawkę soli fizjologicznej. Podczas gdy bronchoskopista utrzymuje pozycję w prawym płacie środkowym (RML), asystent wykonuje delikatne odsysanie ręczne, używając tego samego portu i strzykawki.Następnie procedurę powtarza się trzykrotnie, używając kolejno każdej z strzykawek, przy czym w tej konkretnej technice stosuje się maksymalną objętość 200 mililitrów. Odzyskany płyn z BAL jest delikatnie wypuszczany do plastikowych pojemników, które mogą być uprzednio silikonizowane i umieszczone na kruszącym się lodzie. Silikonizacja hamuje przyleganie komórek i maksymalizuje ich odzysk. Płyn z BAL wydaje się mętny pod światło, z widocznymi na powierzchni pęcherzykami mydlanymi, które tworzą białka i surfaktanty.Na koniec bronchoskop jest powoli i całkowicie wycofywany. Podmiot zostaje przekazany do monitorowanego okresu rekonwalescencji, a płyn z BAL jest bezzwłocznie transportowany w lodzie. W przypadku natychmiastowej obróbki próbki, należy pozwolić podmiotowi na rekonwalescencję przez maksymalnie cztery godziny pod opieką pielęgniarki specjalizującej się w badaniach nad układem oddechowym.W tym czasie należy pozwolić badanemu na odpoczynek, jednak nie wolno mu jeść ani pić przez co najmniej 60 minut po zabiegu. Ma to na celu zmniejszenie ryzyka aspiracji, po uprzedniej ocenie bezpieczeństwa zdolności połykania. Obserwacje pozabiegowe są monitorowane i rejestrowane.Przed wypisem z placówki przeprowadzane jest badanie kliniczne. Pacjent zostaje również poinformowany o częstych działaniach niepożądanych i otrzymuje numer kontaktowy na wypadek wystąpienia istotnych skutków ubocznych. Od jednego do pięciu dni po zabiegu lekarz lub pielęgniarka przeprowadza wizytę kontrolną z pacjentem.Może to odbyć się telefonicznie lub osobiście. Po przybyciu do laboratorium badawczego wszystkie manipulacje należy wykonywać na mokrym lodzie, jeśli jest to możliwe.Najpierw należy zmierzyć objętość płynu z przemywania bronchoalveolarnego. Następnie płyn należy przefiltrować przez podwójną warstwę sterylnej gazy, aby usunąć zatory śluzowe, a filtrat zebrać do sterylnych probówek do wirowania o pojemności 50 mililitrów. Komórki należy osadzić poprzez wirowanie przy 500 G w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez 5 do 10 minut.Usunąć supernatant i przemyć 50 mililitrami zimnej soli fizjologicznej. Powtórzyć wirowanie. Ponownie zawiesić komórki w odpowiedniej objętości pożywki hodowlanej.Zazwyczaj dwa mililitry zapewniają odpowiednią gęstość komórek do odliczania. Następnie należy przeprowadzić liczenie komórek przy użyciu hemosytometru i błękitu trypanowego zgodnie ze standardowymi procedurami, a następnie dostosować gęstość zawiesiny komórkowej do 1 × 10⁶ komórek na mililitr poprzez dodanie odpowiedniej objętości pożywki. Następnie należy przenieść jeden mililitr zawiesiny komórkowej do każdego dołka płytki 24-dołkowej.Inkubuj komórki w płytce wielodołkowej w temperaturze 37°C przez trzy godziny, aby umożliwić przyleganie makrofagów przed pracą z limfocytami. Po trzech godzinach inkubacji medium hodowlane należy delikatnie pipetować w górę i w dół trzy razy, a następnie zebrać. Medium to zawiera limfocyty oraz makrofagi nieprzylegające i może być wykorzystane do oceny funkcji limfocytów.Może być również stosowane w kolejnych etapach oczyszczania w badaniach nad makrofagami. Po trzech godzinach inkubacji ostrożnie odessać medium i zastąpić je świeżą, ciepłą pożywką bez antybiotyków; w tym momencie makrofagi przylegają do płytki do hodowli tkanek. Komórki BAL zostały odwirowane na szkiełko mikroskopowe za pomocą wirówki cytokologicznej Thermo Shandin i zabarwione różnicującym barwnikiem jądrowym w celu ujawnienia typów komórek.Większość komórek to makrofagi, takie jak komórka oznaczona literą M, lecz sporadycznie widoczne są również neutrofile oznaczone literą N oraz limfocyty oznaczone literą L. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać dokładną wiedzę na temat bezpiecznego i efektywnego przeprowadzania bronchoskopii oraz pobierania BAL w celach badawczych przy użyciu tej techniki, w tym w szczególności w zakresie prawidłowej anestezji nasady języka i tylnej części gardła, sprawdzania sprawności ssania bronchoskopu oraz wykluczenia nieszczelności powietrza przed procedurą, a także wyboru najbardziej odpowiedniej gałęzi podsegmentalnej prawego płata środkowego. Operatorzy powinni konsekwentnie pobierać ponad 100 ml BAL od badanych, u których występują minimalne działania niepożądane.

bronchoalveolar-lavage-bal-for-research-obtaining-adequate-sample

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe (BAL) w celach badawczych; Uzyskiwanie odpowiedniej wydajności próbki

Źródło: Venuprasad, K., et al. Dotchawicze podawanie Haemophilus influenzae w modelach mysich w celu zbadania stanu zapalnego dróg oddechowych. J. Vis. Exp. (2016)Ten film pokazuje pobieranie i przetwarzanie płynu z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego od myszy poddanej eutanazji zakażonej nietypowalnym Haemophilus influenzae do dalszej analizy.

Pobranie płynu z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego od modelu myszy zakażonego nietypizowalnym Haemophilus influenzae

Ten film demonstruje użycie cytometrii przepływowej do identyfikacji i liczenia różnych komórek odpornościowych w płynie z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego. Początkowo pojedyncze komórki odpornościowe są identyfikowane za pomocą barwnika żywotności, a następnie następuje różnicowe barwienie powierzchniowych białek markerowych, co umożliwia precyzyjne wyliczenie każdego typu komórek.

Identyfikacja i liczenie komórek odpornościowych w płynie płucnym oskrzelowo-pęcherzykowym metodą cytometrii przepływowej

Odpowiedź immunologiczna gospodarza na infekcję patogenem jest ściśle regulowanym procesem. Wykorzystując model ekspozycji płuc na lipopolisacharydy u myszy, możliwe jest przeprowadzenie oceny w wysokiej rozdzielczości złożonych mechanizmów związanych z patogenezą choroby.

Wykorzystanie dotchawczego podawania PAMP w jamie ustnej i gardłowej oraz płukania oskrzeli i pęcherzyków płucnych w celu oceny odpowiedzi immunologicznej gospodarza u myszy

Opisujemy metodę wywoływania neutrofilowego zapalenia płuc poprzez prowokację do aerozolowanego lipopolisacharydu za pomocą nebulizacji, do modelowania ostrego uszkodzenia płuc. Ponadto opisano podstawowe techniki operacyjne izolacji płuc, intubacji tchawicy i płukania oskrzelowo-pęcherzykowego.

Metoda wytwarzania neutrofilii płucnej przy użyciu lipopolisacharydu w aerozolu

Ten artykuł opisuje techniki bronchoskopowe w płucach bydlęcych w warunkach eksperymentalnych, tj. inokulację pod kontrolą bronchoskopową, płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe, szczotkowanie oskrzeli i przezoskrzelową biopsję płuc.

Płuca bydlęce w badaniach biomedycznych: bronchoskopia sterowana wizualnie, inokulacja dooskrzelowa i techniki pobierania próbek in vivo

Stan zdrowia płuc jest odzwierciedlony przez typ i liczbę komórek odpornościowych, które są obecne w oskrzelikach płuc. Opisujemy technikę płukania oskrzelowo-pęcherzykowego, która umożliwia izolację i badanie nieprzylegających komórek i rozpuszczalnych czynników z dolnych dróg oddechowych myszy.

Płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe płuc myszy w celu analizy nacieku komórek zapalnych

Tutaj opisujemy dwa protokoły izolacji pęcherzyków zewnątrzkomórkowych, wirowanie ultrafiltracji i ultrawirowanie z wirowaniem gradientu gęstości, aby wyizolować pęcherzyki zewnątrzkomórkowe z próbek płynu z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego myszy. Pęcherzyki zewnątrzkomórkowe pochodzące z mysiego płynu z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego za pomocą obu metod są określane ilościowo i charakteryzowane.

Izolacja pęcherzyków zewnątrzkomórkowych z mysiego płynu płucnego z oskrzelowo-pęcherzykowego przy użyciu techniki wirowania ultrafiltracji

Opisujemy metodę przetwarzania płynu z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego i dopasowanej krwi obwodowej od osób przewlekle zakażonych wirusem HIV na terapii antyretrowirusowej w celu oceny rezerwuarów HIV w płucach. Metody te prowadzą do pozyskania wysoce czystych limfocytów T CD4 i makrofagów pęcherzykowych, które można następnie wykorzystać do immunofenotypowania i kwantyfikacji HIV DNA/RNA za pomocą ultraczułej reakcji łańcuchowej polimerazy.

Przetwarzanie płynu z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego i dopasowanej krwi do makrofagów pęcherzykowych i immunofenotypowania limfocytów T CD4+ oraz oceny rezerwuaru HIV

Ten manuskrypt opisuje protokół określający, czy narażenie na ozon, podstawowe zanieczyszczenie powietrza, upośledza efferocytozę makrofagów pęcherzykowych in vivo. Protokół ten wykorzystuje powszechnie stosowane odczynniki i techniki i może być dostosowany do wielu modeli uszkodzenia płuc w celu określenia wpływu na efferocytozę makrofagów pęcherzykowych.

Ocena in vivo efferocytozy makrofagów pęcherzykowych po ekspozycji na ozon

Ten manuskrypt opisuje stworzenie zakaźnego modelu zapalenia płuc u myszy i odpowiednią charakterystykę leczenia urazów wraz z metodami hodowli bakterii i wkraplania dotchawiczego. Opisano również nowatorskie podejście wykorzystujące wysokowymiarową cytometrię przepływową do oceny krajobrazu immunologicznego.

Eksperymentalny model do oceny ustąpienia zapalenia płuc

Poznaj technikę płukania oskrzelowo-pęcherzykowego z użyciem niskociśnieniowej ssawki do pobierania komórek immunologicznych z płuc. Metoda zapewnia bezpieczeństwo pacjenta i zachowanie żywotności komórek.

płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe (BAL) do badań; Uzyskanie odpowiedniej wydajności próbki

Przeglądaj więcej filmów