Name: Przygotowanie i inaktywacja patogenów dwudawkowych produktów płytkowych Buffy Coat z wykorzystaniem układu krwionośnego INTERCEPT (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-07T11:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: Poznaj metodę przygotowania dwudawkowych koncentratów płytek krwi z inaktywacją patogenów za pomocą systemu INTERCEPT. Procedura obejmuje wirowanie, łączenie warstwy leukocytarnej i ocenę jakości przez siedem dni przechowywania.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Finansowanie publikacji zostało zapewnione przez Cerus Corp, producenta systemu INTERCEPT Blood System.

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+to+the+preparation%2C+use+and+quality+assurance+of+blood+components%22">Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components</a>. , 16th, Council of Europe. (2010).</li>
<li>Van Rhenen, D. J., Vermeij, J., Mayaudon, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characteristics+of+S-59+photochemically+treated+platelet+concentrates+derived+from+buffy+coats%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Functional characteristics of S-59 photochemically treated platelet concentrates derived from buffy coats.</a> Vox Sang. 79, 206-214 (2000).</li>
<li>Wollowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+DNA+and+RNA+in+pathogens%3A+mode+of+action+of+amotosalen+HCl%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med.+Rev%22%5BJournal%5D)">Targeting DNA and RNA in pathogens: mode of action of amotosalen HCl.</a> Transfus. Med. Rev. 31, 11-16 (2004).</li>
<li>Irsch, J., Lin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen+Inactivation+of+Platelet+and+Plasma+Blood+Components+for+Transfusion+Using+the+INTERCEPT+Blood+SystemTM%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med.+Hemother%22%5BJournal%5D)">Pathogen Inactivation of Platelet and Plasma Blood Components for Transfusion Using the INTERCEPT Blood SystemTM.</a> Transfus. Med. Hemother. 38, (2011).</li>
<li>Lin, L., Dikeman, R., Molini, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemical+treatment+of+platelet+concentrates+with+amotosalen+and+long-wavelength+ultraviolet+light+inactivates+a+broad+spectrum+of+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Photochemical treatment of platelet concentrates with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light inactivates a broad spectrum of pathogenic bacteria.</a> Transfusion. 44, 1496-1504 (2004).</li>
<li>Lin, L., Hanson, C., Alter, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+viruses+in+platelet+concentrates+by+photochemical+treatment+with+amotosalen+and+long-wavelength+ultraviolet+light%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Inactivation of viruses in platelet concentrates by photochemical treatment with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light.</a> Transfusion. 45, 580-590 (2005).</li>
<li>Allain, J. P., Cianco, C., Blajchman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protecting+the+blood+supply+from+emerging+pathogens%3A+the+role+of+pathogen+inactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus.+Med.+Rev%22%5BJournal%5D)">Protecting the blood supply from emerging pathogens: the role of pathogen inactivation.</a> Transfus. Med. Rev. 19, 110-126 (2005).</li>
<li>Stramer, S., Hollinger, F., Katz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+infectious+disease+agents+and+their+potential+threat+to+transfusion+safety%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Emerging infectious disease agents and their potential threat to transfusion safety.</a> Transfusion. 49, 1S-29S (2009).</li>
<li>Nussbaumer, W., Allesdorfer, D., Grabmer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+transfusion+of+platelet+components+contaminated+with+low+levels+of+bacteria%3A+a+comparison+of+bacteria+culture+and+pathogen+inactivation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Prevention of transfusion of platelet components contaminated with low levels of bacteria: a comparison of bacteria culture and pathogen inactivation methods.</a> Transfusion. 47, 1125-1133 (2007).</li>
<li>Schlenke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+against+Transfusion-Associated+Graft-versus-Host+Disease+in+Blood+transfusion%3A+Is+Gamma-Irradiation+the+Only+Answer%3F+Transfus%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Hemother%22%5BJournal%5D)">Protection against Transfusion-Associated Graft-versus-Host Disease in Blood transfusion: Is Gamma-Irradiation the Only Answer? Transfus.</a> Med. Hemother. 31, 24-31 (2004).</li>
<li>Lin, L., Corash, L., Osselear, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+Against+TA-GVHD+Due+to+Platelet+Transfusion+By+Using+Pathogen+Inactivation+with+the+INTERCEPT+Blood+SystemTM+-+Gamma+Irradiation+is+Not+the+Only+Answer%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Protection Against TA-GVHD Due to Platelet Transfusion By Using Pathogen Inactivation with the INTERCEPT Blood SystemTM - Gamma Irradiation is Not the Only Answer.</a> Haematologica. 95 (Extra 1), 230-237 (2010).</li>
<li>Corash, L., Lin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+processes+for+inactivation+of+leukocytes+to+prevent+transfusion-associated+graft-verus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transplant%22%5BJournal%5D)">Novel processes for inactivation of leukocytes to prevent transfusion-associated graft-verus-host disease.</a> Bone Marrow Transplant. 33, 1-7 (2004).</li>
</ol>

Produkcja i wolny dostęp do tego artykułu są sponsorowane przez Cerus.

Przygotowanie płytek krwi z warstwy leukocytaresowej (buffy coat) wymaga kilku etapów przetwarzania, które generują koszty po pobraniu, w tym czas pracy personelu, materiały eksploatacyjne, sprzęt oraz utylizację odpadów, co musi zostać uwzględnione w całkowitym koszcie wytworzenia jednostek płytek krwi. Poprawa wydobycia płytek z każdej warstwy leukocytaresowej (poprzez optymalizację objętości warstwy leukocytaresowej i hematokrytu) umożliwia produkcję jednostki płytek krwi o podwójnej dawce z puli siedmiu warstw leukocytaresowych. Przy zastosowaniu tej optymalizacji liczba warstw leukocytaresowych wymaganych do wytworzenia określonej liczby dawek płytek może zostać zmniejszona, co poprawia ogólną utylizację warstw leukocytaresowych i umożliwia produkcję dodatkowych koncentratów krwinek płytkowych (PC). Czas pracy personelu, jak również koszty materiałów eksploatacyjnych i sprzętu, takich jak zestawy do łączenia, roztwór dodatkowy do płytek krwi, sterylne łączniki waflowe, zestawy filtracyjne oraz procedury wirowania, zostają zredukowane o maksymalnie 50%. Oprócz optymalizacji produkcji płytek i redukcji powiązanych kosztów, ta metoda łączenia pozwala na uzyskanie koncentratu krwinek płytkowych (PC), który spełnia wymagania wejściowe do zastosowania z zestawem do przetwarzania w podwójnym pojemniku do przechowywania INTERCEPT, co pozwala nam zapewnić również zwiększoną ochronę odbiorców transfuzji.
System INTERCEPT Blood System do inaktywacji patogenów wykorzystuje amotosalen oraz światło ultrafioletowe A (UVA) do kowalencyjnego sieciowania DNA i RNA, co zapobiega replikacji kwasów nukleinowych i sprawia, że patogeny nie są w stanie wywoływać chorób.3 Skutecznie inaktywuje on szerokie spektrum patogenów, w tym wirusy, bakterie, pasożyty oraz zanieczyszczające krew leukocyty dawcy.4-6 INTERCEPT stanowi alternatywę dla obecnego modelu testowania w kierunku nowych patogenów, który historycznie wiąże się ze znacznym opóźnieniem podczas opracowywania nowego testu i ostatecznie wymaga dużych nakładów finansowych na jego wdrożenie po udostępnieniu.7,8 Może on również stanowić alternatywę dla redundantnych środków bezpieczeństwa, takich jak detekcja bakterii9 i irradiacja gamma.10-12 Dodatkowo INTERCEPT pozwala nam na przetwarzanie jednostek płytek krwi w podwójnej dawce, co zwiększa wydajność produkcji i pomaga nam w przestrzeganiu budżetów.
Metodę INTERCEPT oraz metodę podwójnej dawki warstwy leukocytowej (buffy coat) można dostosować do różnych standardów pracy centrów krwiodawstwa. Przykładowo, objętość pobranej krwi pełnej można zwiększyć do 500 ml; pobrane jednostki mogą być również przechowywane przez noc w temperaturze 22 °C przed rozdzieleniem. Dodatkowo możliwe jest zastosowanie alternatywnej metody łączenia warstw leukocytowych (np. metody „octopus” zamiast metody „train”) oraz/lub wykorzystanie urządzenia zautomatyzowanego (np. TACSI) do drugiego wirowania i oddzielenia zawiesiny płytek krwi od pozostałych erytrocytów.
Jeśli wymagana jest zwiększona zawartość płytek krwi, dostępne są różne techniki, w tym wstępna selekcja dawców na podstawie liczby płytek, inkubacja krwi pełnej przez noc, dostosowanie parametrów wirowania lub wykorzystanie puli 8 warstw leukocytowych zamiast 7.
Ze względu na ograniczenia w aktualnie dostępnych zestawach do łączenia oraz pojemność koszy wirówki, całkowita objętość puli warstw leukocytowych (buffy coat) powinna wynosić około 600 ml. Proces i ustawienia wirowania opisane w niniejszym protokole zostały zoptymalizowane w celu uzyskania produktu spełniającego parametry INTERCEPT dla puli składającej się z 7 warstw leukocytowych. Ustawienia wirowania muszą zostać zmodyfikowane, jeśli zmieni się liczba warstw leukocytowych w puli.
W niektórych krajach minimalna dawka płytek krwi jest wyższa, a wymagania dotyczące kontroli jakości (QC) są bardziej rygorystyczne niż w Szwecji. W związku z tym nasze wyniki mogą nie być uniwersalne. W tych krajach podwójna dawka koncentratu płytek krwi (PC) przed opracowaniem metodą INTERCEPT będzie musiała zawierać większą liczbę płytek, aby spełnić lokalne wymogi po zastosowaniu procesu INTERCEPT i rozdzieleniu. Ponieważ maksymalna zawartość płytek oraz objętość opracowania dla metody INTERCEPT wynoszą odpowiednio 7x1011 płytek i 420 ml, odsetek jednostek, które przekraczają wymagania procesu INTERCEPT lub mają niewystarczającą zawartość płytek, aby można było je rozdzielić na dwie dawki terapeutyczne, będzie się różnić w zależności od takich czynników, jak lokalne wymagania dotyczące dawki płytek, kryteria QC, wyniki optymalizacji warstwy leukocytarnej (buffy coat) oraz stabilność produkcji.
Jeśli podwójna dawka PC przekracza wymagania przetwarzania INTERCEPT, można ją dostosować ręcznie, aby spełnić te wymagania, a następnie poddać obróbce. W nielicznych przypadkach, gdy pula 7 warstw leukocytowych (buffy coat) dostarcza niewystarczającą liczbę płytek do uzyskania produktu o podwójnej dawce po zastosowaniu INTERCEPT, decydujemy się nie przeprowadzać obróbki INTERCEPT. Alternatywnie, inne centra krwiodawstwa mogą zdecydować o poddaniu PC obróbce za pomocą zestawu INTERCEPT do pojedynczej dawki (i.e. zestawu do dużych objętości) i przechowywaniu PC jako pojedynczej, większej dawki terapeutycznej, przeprowadzając w ten sposób inaktywację patogenów we wszystkich jednostkach. Aby zapewnić spełnienie wymagań QC oraz inaktywację patogenów w jak największej liczbie jednostek płytek, wybieramy warstwy leukocytowe na podstawie liczby płytek u dawców, co po połączeniu w puli zapewni minimalną zawartość 5.6x1011 płytek w puli. Gwarantuje to wystarczającą liczbę płytek do wytworzenia dwóch dawek terapeutycznych po obróbce INTERCEPT.
Nasza walidacja wykazuje, że 7 jednostek warstwy leukocytarnej (buffy coat) uzyskanych z krwi pełnej może zostać z powodzeniem połączonych i poddanych procesowi INTERCEPT dla koncentratów krwineczek płytkowych, co skutkuje otrzymaniem 2 produktów krwineczek płytkowych z inaktywowanymi patogenami, które spełniają kryteria akceptacji dla produkcji (wymagania szwedzkie i wytyczne europejskie) oraz dla wsparcia pacjentów wymagających transfuzji krwineczek płytkowych zgodnie z wytycznymi praktyki klinicznej i standardowymi metodami infuzji krwineczek płytkowych w Szwecji.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Pobieranie krwi pełnej, separacja pierwotna i pozyskiwanie koncentratu płytkowego</td></tr><tr><td>Zestaw do pobierania krwi</td><td>Fenwal</td><td>R6485</td><td>Zestaw górny/dolny</td></tr><tr><td>Zautomatyzowany ekstraktor komponentów</td><td>Fenwal</td><td>Optipress-II</td><td></td></tr><tr><td>System mieszadła do krwi i wagi</td><td>Baxter</td><td>Easymix V3</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do filtracji leukocytów z koncentratu krwineczek*

*(Alternative technical translation: Zestaw do leukoredukcji płytek krwi)</td><td>Fenwal</td><td>K4R7042</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka</td><td>Hettich</td><td>Roto Silenta 63 RS</td><td>Wersja 5.5</td></tr><tr><td>Roztwór dodatkowy do platelets – SSP+</td><td>MacoPharma</td><td>SSP2030U</td><td>300 ml</td></tr><tr><td>Sterylny spawać rurek</td><td>Terumo</td><td>T-SCD</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">leczenie metodą INTERCEPT &amp;amp; przechowywanie</td></tr><tr><td>zestaw do przetwarzania INTERCEPT</td><td><a href="http://www.interceptbloodsystem.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Cerus</a></td><td>INT2503</td><td>zestaw do podwójnego przechowywania (DS)</td></tr><tr><td>Oświetlacz INTERCEPT</td><td><a href="http://www.interceptbloodsystem.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Cerus</a></td><td>INT100</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw próbek PC</td><td>Fenwal</td><td>FTX 1122</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Helmer</td><td>PC2200/PC3200</td><td></td></tr><tr><td>Mieszadło</td><td>Helmer</td><td>PF48H/PF96H</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Ocena &lt;em&gt;in vitro&lt;/em&gt; Funkcja płytek krwi</td></tr><tr><td>Analizator gazometrii krwi</td><td>Radiometr</td><td>ABL 735</td><td>Stosowane do pomiaru pH, gazometrii krwi i poziomu mleczanów</td></tr><tr><td>Układ chemiczny</td><td>Ortho Clinical Diagnostics</td><td>Vitros 5.1</td><td>Stosowane do pomiaru poziomu glukozy</td></tr><tr><td>Analizator hematologiczny</td><td>Boule Medical AB</td><td>Medonic CA620-Cellguard</td><td>Stosowane do pomiaru liczby płytek krwi</td></tr><tr><td>Cytometr przepływowy</td><td>BD</td><td>FACSCanto</td><td>Stosowane do pomiaru liczby białych krwinek</td></tr></tbody></table>

przygotowanie i inaktywacja patogenów w koncentratach płytek krwi z podwójnej dawki warstwy leukocytowej z wykorzystaniem systemu intercept blood system

Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Centra krwiodawstwa mierzą się z wieloma wyzwaniami, w tym z maksymalizacją wydajności produkcji z otrzymanych donacji produktów krwi oraz zapewnieniem najwyższego możliwego poziomu bezpieczeństwa pacjentów poddawanych transfuzji, w tym ochrony przed chorobami przenoszonymi przez krew. Musi być to realizowane w sposób odpowiedzialny finansowo, minimalizujący koszty operacyjne, w tym między innymi koszty materiałów zużywalnych, sprzętu, utylizacji odpadów oraz personelu.
Dostępnych jest kilka metod wytwarzania koncentratów platelets do transfuzji. Jedną z najczęstszych jest metoda warstwy leukocytarnej (buffy coat), w której pojedyncza terapeutyczna jednostka platelets (≥ 2,0 x1011 platelets na jednostkę lub zgodnie z lokalnymi przepisami) jest przygotowywana poprzez łączenie warstwy leukocytarnej z maksymalnie sześciu donacji krwi pełnej. Procedura wytwarzania platelets pochodnych z krwi pełnej w „podwójnej dawce” została opracowana dopiero niedawno.
W niniejszej pracy przedstawiono nową metodę przygotowywania podwójnych dawek koncentratów krwineczek płytkowych pochodzących z krwi pełnej z puli 7 warstw leukocytarnych (buffy coats), a następnie poddawanie tych jednostek o podwójnej dawce działaniu systemu INTERCEPT Blood System w celu inaktywacji patogenów. System INTERCEPT został opracowany w celu inaktywacji wirusów, bakterii, pasożytów oraz zanieczyszczających białych krwinek dawcy, które mogą występować w donowanej krwi. Połączenie systemu INTERCEPT z metodą podwójnej dawki z warstw leukocytarnych poprzez zastosowanie zestawu do przetwarzania INTERCEPT z podwójnymi pojemnikami do przechowywania (tzw. „zestaw DS”), pozwala centrom krwiodawstwa na przetwarzanie każdej jednostki o podwójnej dawce w jednym zestawie do inaktywacji patogenów, co maksymalizuje bezpieczeństwo pacjenta przy jednoczesnej minimalizacji kosztów. Metoda podwójnej dawki z warstw leukocytarnych wymaga mniejszej liczby warstw leukocytarnych i redukuje zużycie materiałów eksploatacyjnych nawet o 50% (np. zestawów do pulowania, zestawów filtracyjnych, roztworów dodatkowych do płytek oraz sterylnych złączy) w porównaniu z przygotowaniem i przetwarzaniem jednostek płytek o pojedynczej dawce z warstw leukocytarnych. Inne oszczędności kosztów obejmują mniejszą ilość odpadów, rzadszą konserwację sprzętu, niższe zapotrzebowanie na energię, zmniejszenie czasu pracy personelu oraz niższy koszt pobrania w porównaniu z techniką aferezy.

W niniejszym artykule opisano proces stosowany w Szpitalu Uniwersyteckim w Örebro do otrzymywania koncentratów płytkowych z warstwy leukocytarnej o podwójnej dawce, przygotowywanych z donacji krwi pełnej i poddawanych inaktywacji patogenów za pomocą systemu INTERCEPT Blood System. Jakość jednostek płytkowych in vitro oceniano w ciągu 7 dni przechowywania.

Przygotowanie i inaktywacja patogenów w koncentratach płytek krwi z podwójnej dawki warstwy leukocytowej z wykorzystaniem systemu INTERCEPT Blood System

Centra krwiodawstwa mierzą się z wieloma wyzwaniami, w tym z maksymalizacją wydajności produkcji z otrzymanych donacji produktów krwi oraz zapewnieniem...

W tym filmie przygotowany zostanie koncentrat płytek krwi w podwójnej dawce z puli siedmiu warstw buforowych (buffy coats), a następnie zostanie on poddany działaniu preparatu Intercept. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać dokładną wiedzę na temat tego, jak wytworzyć inaktywowany patogenowo koncentrat płytek krwi w podwójnej dawce. W pierwszej kolejności przedstawiamy schematyczny przegląd, po którym następuje demonstracja.Pierwsze siedem jednostek donowanej krwi pełnej poddaje się wirowaniu i separacji, aby uzyskać siedem jednostek warstwy leukocytowej (buffy coat), które spełniają wymagania dotyczące objętości i hematokrytu. Warstwy leukocytowe są łączone w jedną pulę i wirowane. Następnie zawiesina płytek krwi jest oddzielana od pozostałych erytrocytów w celu otrzymania podwójnej dawki koncentratu płytek krwi do inaktywacji patogenów i leukocytów.Koncentrat płytek krwi w podwójnej dawce jest przetwarzany przy użyciu systemu Intercept, który sieciuje kwasy nukleinowe. Ostatecznie procedura ta pozwala na uzyskanie dwóch terapeutycznych dawek płytek o akceptowalnej jakości in vitro przez siedem dni przechowywania, co potwierdzono poprzez pomiar pH, glukozy, mleczanu, PO2 i PCO2 oraz testy stabilności. Technik z mojego centrum krwiodawstwa zaprezentuje tę procedurę, a my opiszemy wymagania dotyczące przetwarzania.Najpierw należy upewnić się, że podwójna dawka koncentratu krążka płytek krwi spełnia specyfikacje przetwarzania przeplotowego: objętość od 300 do 420 mililitrów, dawka płytek od 2,5 do 7 × 10¹¹ oraz liczba erytrocytów poniżej 4 × 10⁶ na mililitr. Rozpocznij tę procedurę, wykorzystując siedem jednostek krwi pełnej pobranych do zestawów do pobierania o pojemności 450 mililitrów.Umieść jednostki krwi w naczyniach do wirowania i wykonaj wirowanie o wysokiej prędkości przy 4 880 RCF przez 11 minut w temperaturze pokojowej z ustawieniem hamowania B5 zgodnie z instrukcjami producenta. Po wirowaniu krew zostanie rozdzielona na trzy warstwy: erytrocyty, warstwę leukocytarną (buffy coat) oraz osocze. Przelej osocze do górnego worka satelitarnego, a erytrocyty do dolnego worka satelitarnego, pozostawiając warstwę leukocytarną o objętości około 48 ml i hematokrycie 37% w pojemniku do pobierania.Umieść warstwy leukocytarne (buffy coats) w temperaturze pokojowej na agitatorze do płytek krwi przez noc; sterylnie połącz siedem warstw leukocytarnych oraz 300 mililitrów SSP z roztworem dodatkowym do płytek krwi. W konfiguracji drenującej, z roztworem dodatkowym na górze, zaklemuj linię pomiędzy roztworem dodatkowym a pierwszą warstwą leukocytarną, jak pokazano tutaj. Otwórz zgrzewy pomiędzy jednostkami warstw leukocytarnych i pozwól im spłynąć do ostatniego pojemnika z warstwą leukocytarną.Następnie otwórz zacisk oraz zgrzew pomiędzy roztworem dodatku a pierwszą warstwą leukocytarną i pozwól, aby około jednej trzeciej roztworu dodatku (około 100 ml) przepłukała kolejno każdy z pojemników z warstwą leukocytarną przed zamknięciem zacisku; powtórz płukanie jeszcze dwa razy, za każdym razem używając około 100 ml roztworu dodatku. Odłącz pojemnik z połączoną warstwą leukocytarną od pustych pojemników. Objętość połączonej warstwy leukocytarnej, wliczając roztwór dodatku, powinna wynosić około 600 ml.Umieść połączone warstwy leukocytarne (buffy coats) na mieszadle na jedną godzinę w temperaturze pokojowej. Następnie podłącz pojemnik do przechowywania płytek krwi z zintegrowanym filtrem do redukcji leukocytów do worka zawierającego pulę warstw leukocytarnych. Umieść połączone warstwy leukocytarne oraz pojemnik do przechowywania płytek krwi w wirówce i wiruj przy 462 RCF przez dziewięć minut i 20 sekund.Po wirowaniu przelać zawiesinę płytek przez filtr redukcyjny Luca do pojemnika do przechowywania płytek. Wynikiem jest podwójna dawka koncentratu płytek zawierająca około 7×10¹¹ płytek w 420 ml, która może zostać poddana inaktywacji patogenów za pomocą systemu Intercept. Podwójną dawkę koncentratu płytek przetwarza się przy użyciu zestawu procesowego Intercept, który składa się z pojemnika do antykoagulanta, pojemnika do naświetlania oraz podwójnych pojemników do przechowywania.Podłącz pojemnik z zawiesiną płytek krwi do pojemnika z aminem w zestawie do przetwarzania przechwytu. Następnie zawieś płytki. Przełam dolną kaniulę w pojemniku z aminem, aby umożliwić przepływ roztworu do pojemnika do iluminacji.Następnie przełam górną kaniulę w pojemniku z Aminem, aby płytki krwi mogły przepłynąć przez pojemnik z Aminem do pojemnika do iluminacji. Delikatnie wymieszaj mieszaninę płytek krwi i amtosyny. Lekko ściśnij pojemnik do iluminacji, aby usunąć z niego powietrze.Uszczelnij rurkę pomiędzy pojemnikiem do iluminacji a pojemnikiem amato w taki sposób, aby z pojemnika do iluminacji wystawało nie więcej niż cztery centymetry rurki. Usuń i wyrzuć puste pojemniki. Umieść zestaw do przetwarzania w iluminatorze, umieszczając pojemnik do iluminacji w dużym przedziale po lewej stronie, a organizer w mniejszym przedziale po prawej stronie.Zeskanuj identyfikator donacji. Kod produktu i przetwarzanie. Wprowadź numer partii do iluminatora.Zamknij metalową pokrywę oraz szufladę. Naciśnij start, aby rozpocząć naświetlanie. Iluminator dostarcza kontrolowaną dawkę światła UVA do mieszaniny płytek krwi i amin w pojemniku do naświetlania.Amina wiążą się pomiędzy parami zasad kwasów nukleinowych patogenów, które mogą znajdować się w jednostce platelets. Po naświetleniu powstają trwałe wiązania sieciowe, które blokują DNA lub RNA, w wyniku czego patogeny nie mogą się już replikować ani wywoływać choroby u biorcy produktu krwi. Po naświetleniu należy usunąć zestaw do przetwarzania.Następnie wyjmij pojemniki z organizera, a płytki i zestaw do przetwarzania zawieś. Odłam kaniulę przy wylocie pojemnika oświetlającego i pozwól płytkom wpłynąć do pojemnika CAD. Wewnątrz pojemnika CAD znajduje się wafel z unieruchomionymi makroporowatymi kuleczkami polistyrenowymi, które redukują poziom resztkowej amoniaku w produkcie krwi.Należy uważać, aby nie wygiąć płytki CAD. Wypchnąć powietrze z pojemnika CAD do pojemnika z oświetleniem. Uszczelnić rurkę w pobliżu otworu wlotowego pojemnika CAD.Zdjąć i wyrzucić pusty pojemnik do oświetlania. Umieścić pojemnik CAD wraz z dołączonymi pojemnikami do przechowywania na agitatorze płytek na okres od sześciu do 16 godzin. Pozwoli to na zredukowanie pozostałego amlinu do stężenia mniejszego lub równego 2 µM.Po zakończeniu procesu CAD wyjmij jednostki płytek krwi z agitatora, powieś płytki, przełam kaniulę przy wylocie pojemnika CAD i pozwól płytkom spłynąć do dwóch pojemników do przechowywania. Następnie usuń powietrze z pojemników do przechowywania. Uszczelnij przewody powyżej rozdzielacza w kształcie litery Y i zdejmij pojemnik CAD.W wyniku otrzymano dwa koncentraty krzep płytek z nieaktywnymi patogenami do oceny funkcji płytek krwawiczych in vitro. Wyznaczono dawkę płytek, pH, pO₂, produkcję mleczanów oraz zużycie glukozy w próbkach. Parametry koncentratów krzep płytek określano do siódmego dnia przechowywania.Rysunek ten przedstawia średnią początkową dawkę płytek w podwójnej dawce koncentratu płytek przed zabiegiem intercept oraz średnią dawkę płytek w każdym z leczonych produktów rozdzielonych do siódmego dnia przechowywania. Jak widać, strata płytek podczas przechowywania wyniosła około 9%. Redukcja ta nie różni się od oczekiwanej straty płytek podczas przechowywania konwencjonalnych koncentratów płytek. Zgodnie z wymogami europejskimi, pH płytek musi pozostać powyżej 6,4 do końca okresu ważności.Podczas przetwarzania pH koncentratów platelets spada nieznacznie, w zależności od objętości stężenia platelets oraz przepuszczalności gazowej pojemnika do ich przechowywania. Rysunek ten przedstawia pH rozdzielonych produktów platelets w ciągu siedmiu dni przechowywania; podczas tego okresu pH pozostaje stabilne i utrzymuje się w granicach wymagań procesowych. Metabolizm tlenowy powinien nadal zachodzić w przechowywanych platelets i jest wskaźnikiem zdolności platelets do funkcjonowania in vivo po przetoczeniu pacjentowi.Zużycie O2 oraz produkcja CO2 przez płytki krwi wskazują na kontynuację procesu oddychania w płytkach znajdujących się w pojemniku PL 24 10 podczas siedmiodniowego przechowywania. Podobnie, w przechowywanych płytkach powinien kontynuować się metabolizm beztlenowy. Zatem zużycie glukozy i produkcja mleczanów są również wskaźnikami zdolności płytek do funkcjonowania po transfuzji.Te dwie ryciny przedstawiają poziomy mleczanów i glukozy w ciągu siedmiu dni przechowywania. Zużycie glukozy przez płytki krwi oraz produkcja mleczanów są ze sobą spójne. W ciągu siedmiu dni przechowywania w pięciu jednostkach poziom glukozy wynosił mniej niż 1,11 mmol/L, co stanowi dolną granicę oznaczalności testu glukozy.Przygotowanie i walidacja łączenia warstwy leukocyto-płytkowej (buffy coat) pozwoliły na uzyskanie koncentratów płytkami krwi spełniających kryteria wejściowe dla procesu inaktywacji patogenów (intercept treatment), w szczególności w zakresie objętości, liczby płytek krwi, stosunku osocza oraz stopnia zanieczyszczenia erytrocytami. Końcowe jednostki spełniały kryteria walidacyjne przez siedem dni przechowywania, w tym w odniesieniu do dawki płytek oraz pH. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z konwencjonalną metodą przygotowania warstwy leukocyto-płytkowej, która pozwala na uzyskanie pojedynczej dawki koncentratu płytek, jest maksymalizacja wydajności komponentów z pobranych jednostek krwi, obniżenie kosztów operacyjnych dzięki zastosowaniu techniki podwójnej dawki oraz poprawa bezpieczeństwa pacjentów poprzez inaktywację patogenów przenoszonych drogą transfuzyjną.

preparation-pathogen-inactivation-double-dose-buffy-coat-platelet

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przygotowanie i inaktywacja patogenów produktów trombocytów z podwójnej warstwy bufrowej za pomocą systemu INTERCEPT Blood System

W tym filmie pokazujemy izolację komórek jednojądrzastych krwi obwodowej, PBMC, zawierających monocyty i limfocyty z ludzkiej kożuchy przez wirowanie w gradicynacji gęstości. Wyizolowane PBMC można wykorzystać do dalszej analizy.

Izolacja komórek jednojądrzastych krwi obwodowej z ludzkich płaszczy kożucha

W tym filmie opisujemy protokół oczyszczania płytek krwi z pełnej krwi mysiej i ich późniejszej aktywacji za pomocą trombiny agonisty płytek krwi. Podczas analizy za pomocą cytometrii przepływowej, oczyszczone spoczynkowe płytki krwi są charakteryzowane na podstawie ekspresji ich markera powierzchniowego komórki CD41, podczas gdy oczyszczone aktywowane płytki krwi wykazują współekspresję zarówno markerów powierzchniowych CD41, jak i CD62P.

Oczyszczanie i aktywacja płytek krwi z mysiej krwi pełnej

Ten film pokazuje proces redukcji patogenów oparty na ryboflawinie i świetle UV przeciwko skażeniu bakteryjnemu o wysokim mianie w produktach z płytek krwi u ludzi. Proces ten może przyczynić się do zmniejszenia ryzyka poważnych niepożądanych zdarzeń transfuzji związanych ze skażeniem bakteryjnym.

Leczenie produktów płytkowych ryboflawiną i światłem UV w celu wyeliminowania bakterii

Warunki przechowywania produktów płytkowych tworzą idealne środowisko do namnażania się zanieczyszczeń bakteryjnych do niebezpiecznych poziomów.  Celem tego badania było wykorzystanie testu tworzenia kolonii do oceny procesu redukcji patogenów opartego na ryboflawinie w stosunku do zanieczyszczenia bakteryjnego o wysokim mianie w ludzkich produktach płytkowych.

Leczenie produktów płytkowych ryboflawiną i światłem UV: skuteczność w walce z wysokim mianem bakterii

Transfuzja płytek krwi i hemostaza były modelowane za pomocą komór do rekonstytucji krwi i przepływu mikroprzepływowego w celu zbadania funkcji płytek krwi bankujących. Dane wskazują na wpływ zmian spichrzających płytki krwi na hemostazę in vitro.

Mikroprzepływowe komory przepływowe wykorzystujące rozpuszczoną krew do modelowania hemostazy i transfuzji płytek krwi in vitro

W tym artykule opisujemy metodę oceny śródbłonkowego uwalniania czynnika von Willebranda i późniejszego wychwytywania płytek krwi pod wpływem stresu ścinającego płyn w odpowiedzi na bodźce zapalne za pomocą systemu komór przepływowych in vitro.

Badanie patofizjologii czynnika von Willebranda przy użyciu modelu komory przepływowej tworzenia się czynnika von Willebranda i sznurka płytkowego

Zarządzanie inwentaryzacją płytek krwi oparte na badaniu zawartości mikrocząsteczek w koncentratach płytek krwi to nowa inicjatywa poprawy jakości w szpitalnych bankach krwi. Celem jest odróżnienie płytek krwi aktywowanych od nieaktywowanych, aby zoptymalizować wykorzystanie płytek krwi. Dostarczanie nieaktywowanych płytek krwi pacjentom hematologicznym i onkologicznym może zmniejszyć ich wysokie ryzyko wystąpienia oporności na krwiożerczość.

Rutynowa metoda badań przesiewowych na obecność mikrocząstek w transfuzjach płytek krwi

Ten protokół przedstawia przystępny przewodnik do zbierania, przechowywania i rozmrażania komórek jednojądrzastych krwi obwodowej, odpowiedni do dalszych analiz i procesów takich jak cytometria przepływowa i sekwencjonowanie RNA. Zademonstrowano również kolekcje płaszczy plazmowych i buffy.

Izolacja i kriokonserwacja wysoce żywotnych ludzkich komórek jednojądrzastych krwi obwodowej z krwi pełnej: przewodnik dla początkujących

Ten protokół szczegółowo opisuje metodę kompatybilną z automatyzacją o wysokiej przepustowości, polegającą na izolowaniu ludzkich komórek jednojądrzastych krwi obwodowej do biobankowania i innych celów.

Izolowanie ludzkich komórek jednojądrzastych krwi obwodowej od kożuchów za pomocą wysokoprzepustowej separacji kulek immunomagnetycznych

Funkcja płytek krwi pod przepływem może być oceniona, a symulowana resuscytacja hemostatyczna może być modelowana za pomocą urządzenia mikroprzepływowego, które ma zastosowanie w medycynie urazowej i transfuzjologicznej.

Mikrofluidyka w ocenie funkcji płytek krwi

Metabolizm płytek krwi jest interesujący, szczególnie w odniesieniu do roli nadmiernej i hipoaktywności płytek krwi w krwawieniach i zaburzeniach zakrzepowych. Izolowanie płytek krwi z osocza jest konieczne w przypadku niektórych testów metabolicznych; Przedstawiono metodę izolacji metabolitów wewnątrzkomórkowych z przemytych płytek krwi.

Przygotowanie przemytych ludzkich płytek krwi do ilościowych badań przepływu metabolicznego

Poznaj metodę przygotowania dwudawkowych koncentratów płytek krwi z inaktywacją patogenów za pomocą systemu INTERCEPT. Procedura obejmuje wirowanie, łączenie warstwy leukocytarnej i ocenę jakości przez siedem dni przechowywania.

Przygotowanie i inaktywacja patogenów dwudawkowych produktów płytkowych Buffy Coat z wykorzystaniem układu krwionośnego INTERCEPT (Wideo) | JoVE Journal

Przygotowanie i inaktywacja patogenów w koncentratach płytek krwi z podwójnej dawki warstwy leukocytowej z wykorzystaniem systemu INTERCEPT Blood System

Przeglądaj więcej filmów