Name: Zbieranie i pomiar biochemicznych mediatorów wysięku z rany w ranach chirurgicznych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 58 s
Description: Poznaj metodę zbierania wysięku z rany chirurgicznej i pomiaru biochemicznych mediatorów zapalnych oraz bólowych. Technika wykorzystuje zmodyfikowany system On-Q do analizy cytokin i neuropeptydów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca dr Carvalho była wspierana przez grant badawczy z Biura Badań nad Zdrowiem Kobiet oraz Narodowego Instytutu Zdrowia Dziecka i Rozwoju Człowieka Narodowych Instytutów Zdrowia (5K12 HD043452). Dr Angst otrzymał zaopatrzenie (On-Q PainBuster Post-Op Pain Relief System) i fundusze (na testy biochemiczne) od I-Flow (Lake Forest, Kalifornia).

1. Protokół badania
<ul>
	<li>Uzyskanie zgody Instytucjonalnej Komisji Rewizyjnej i pisemnej świadomej zgody.</li>
	<li>Należy wybrać odpowiednią populację chirurgiczną do przeprowadzenia badania. Ta metodologia została zastosowana tylko do ran porodowych po cesarskim cięciu, ale większość ran chirurgicznych byłaby odpowiednia.</li>
	<li>Należy wziąć pod uwagę kryteria włączenia i wykluczenia udziału w badaniu. Pacjenci i zabiegi z wysokim wskaźnikiem zakażeń ran chirurgicznych mogą nie być odpowiednie.</li>
	<li>Standaryzacja znieczulenia i postępowania pooperacyjnego dla wszystkich pacjentów, aby uniknąć potencjalnych czynników zakłócających.</li>
</ul>
2. Kolekcja nocyceptywnych i zapalnych mediatorów biochemicznych
<ul>
	<li>Wprowadzić ON-Q PainBuster z ON-Q SilverSoaker (I-Flow, Lake Forest, CA) do warstwy podskórnej tuż przed zamknięciem rany (można rozważyć inne warstwy tkanki). System przeciwbólowy ON-Q PainBuster w sposób ciągły dostarcza zwykłą sól fizjologiczną z szybkością 2 ml/h. Nosicielstwo można łączyć lub porównywać z lekami będącymi przedmiotem zainteresowania, takimi jak znieczulenie miejscowe i niesteroidowe leki przeciwzapalne.</li>
	<li>Do tego systemu należy włączyć standardowy trójdrogowy kran odcinający, aby umożliwić aspirację wysięku z rany w określonych punktach czasowych. Ciągły wlew zapobiega krzepnięciu cewnika i poprawia niezawodność systemu w wytwarzaniu próbek wysięku. Jeśli aspiracja wysięku jest utrudniona (około 5% przypadków), rozważ delikatne przesunięcie się nad ranę, zmianę pozycji pacjenta (np. ułożenie pacjenta w pozycji pionowej lub płasko), użycie 0,5-1 ml zwykłego płukania solą fizjologiczną lub wycofanie cewnika na 1-2 cm.</li>
	<li>W punktach czasowych określonych w protokole (np. 1, 4, 6, 24 i 48 godzin po cesarskim cięciu) należy odessać i pobrać 1 ml wysięku z rany. Przenieś wysięk do polietylenowego kubka zawierającego 30 μl inhibitora proteinazy. Do naszych celów użyliśmy Complete Proteinase Inhibitor (Roche Bioscience, Palo Alto, CA).</li>
	<li>W tym samym czasie, w odstępach czasu określonych w protokole badania, należy pobrać 10 ml krwi. Użyliśmy probówki do pobierania krwi zawierającej heparynę litową; W naszej placówce jest to szklana rurka z zielonym nasadą. Dodać dodatkowe 300 μl inhibitora proteinazy do próbek krwi.</li>
	<li>W ciągu 1 godziny od pobrania umieścić próbki na lodzie i odwirować z prędkością 3 000 obr./min przez 10 minut.</li>
	<li>Usunąć surowicę i supernację z rany, umieścić w standardowej probówce do mikrowirówek i przechowywać w temperaturze -20 °C.</li>
</ul>
3. Analiza testu
<ul>
	<li>Po zebraniu i przechowywaniu wszystkich próbek wysięku i surowicy z badania, należy rozmrozić i przeanalizować próbki w tym samym czasie.</li>
	<li>Zmierzyliśmy cytokiny i chemokiny za pomocą multipleksowego testu immunologicznego. Technika multipleksowego testu immunologicznego pozwala nam na oznaczanie wielu analitów z próbek o małej objętości (50 μl). Multipleks daje wyniki porównywalne z wynikami uzyskanymi za pomocą testu ELISA. Do naszej analizy wykorzystaliśmy system 17-plex Bio-PlexTM (BioRad, Hercules, CA). Test ten jest w stanie zmierzyć czynnik martwicy nowotworu α (TNFα), interferon α (INFα), interleukina 1β (IL-1β), interleukina 2 (IL-2), interleukina 4 (IL-4), interleukina 5 (IL-5), interleukina 6 (IL-6), interleukina 7 (IL-7), interleukina 8 (IL-8), interleukina (IL-10), interleukina 12 (IL-12), interleukina 13 (IL-13), interleukina 17 (IL-17), czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów (G-CSF), czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów i makrofagów (GM-CSF), białko chemoatraktantu monocytów 1 (MCP-1) i białko zapalne makrofagów 1 (MIP-1β). Czynnik wzrostu nerwów mierzono za pomocą przeciwciała NGF DY256, dodając go do płytki 17-plex za pomocą zestawu sprzęgającego aminy Bio-Plex.</li>
	<li>Aby zapewnić dobrą jakość analizy, każdy pomiar powinien być wykonany w dwóch egzemplarzach. Krzywe wzorcowe dla każdego analitu są generowane przy użyciu analitów referencyjnych dostarczonych przez producenta (przy stężeniach 0,20, 0,78, 3,13, 12,5, 50, 200, 800, 3,200 pg/ml plus wzorzec zerowy dla normalnej soli fizjologicznej). Standardowe krzywe są uwzględniane w każdym przebiegu, a stężenia próbek są obliczane za pomocą oprogramowania Bio-Plex Manager.</li>
	<li>Substancję P i prostaglandynę E2 mierzono za pomocą zestawów ELISA o wysokiej czułości. Do tej analizy wykorzystaliśmy Assay Designs, Inc. (Ann Arbor, Michigan). Wykonaj analizę w dwóch egzemplarzach zgodnie ze specyfikacją producenta.</li>
</ul>

<ol><li>Carvalho, B., Clark, D. J., Angst, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+Systemic+Release+of+Cytokines%2C+Nerve+Growth+Factor%2C+Prostaglandin+E2%2C+and+Substance+P+in+Incisional+Wounds+and+Serum+Following+Cesarean+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pain%22%5BJournal%5D)">Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery.</a> J. Pain. 9, 650-657 (2008).</li>
<li>Carvalho, B., Clark, D. J., Yeomans, D. C., Angst, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+subcutaneous+instillation+of+bupivacaine+compared+to+saline+reduces+interleukin+10+and+increases+substance+P+in+surgical+wounds+after+cesarean+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth.+Analg%22%5BJournal%5D)">Continuous subcutaneous instillation of bupivacaine compared to saline reduces interleukin 10 and increases substance P in surgical wounds after cesarean delivery.</a> Anesth. Analg. 111, 1452-1459 (2010).</li>
<li>Verri, W. A., Cunha, T. M., Parada, C. A., Poole, S., Cunha, F. Q., Ferreira, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypernociceptive+role+of+cytokines+and+chemokines%3A+targets+for+analgesic+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Hypernociceptive role of cytokines and chemokines: targets for analgesic drug development.</a> Pharmacol. Ther. 112, 116-138 (2006).</li>
<li>Watkins, L. R., Maier, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulation+of+central+nervous+system+functions%3A+from+sickness+responses+to+pathological+pain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Intern.+Med%22%5BJournal%5D)">Immune regulation of central nervous system functions: from sickness responses to pathological pain.</a> J. Intern. Med. 257, 139-155 (2005).</li>
<li>Beilin, B., Bessler, H., Mayburd, E., Smirnov, G., Dekel, A., Yardeni, I., Shavit, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+preemptive+analgesia+on+pain+and+cytokine+production+in+the+postoperative+period%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Effects of preemptive analgesia on pain and cytokine production in the postoperative period.</a> Anesthesiology. 98, 151-155 (2003).</li>
<li>Wu, C. T., Jao, S. W., Borel, C. O., Yeh, C. C., Li, C. Y., Lu, C. H., Wong, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+epidural+clonidine+on+perioperative+cytokine+response%2C+postoperative+pain%2C+and+bowel+function+in+patients+undergoing+colorectal+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth.+Analg%22%5BJournal%5D)">The effect of epidural clonidine on perioperative cytokine response, postoperative pain, and bowel function in patients undergoing colorectal surgery.</a> Anesth. Analg. 99, 502-509 (2004).</li>
<li>Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+prostaglandin+E2+and+interleukins+in+the+central+nervous+system+and+peripheral+tissue+during+and+after+surgery+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans.</a> Anesthesiology. 104, 403-410 (2006).</li>
<li>Kristiansson, M., Soop, M., Sundqvist, K. G., Soop, A., Suontaka, A. M., Blomback, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+vs.+systemic+immune+and+haemostatic+response+to+hip+arthroplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Anaesthesiol%22%5BJournal%5D)">Local vs. systemic immune and haemostatic response to hip arthroplasty.</a> Eur. J. Anaesthesiol. 15, 260-270 (1998).</li>
<li>Liu, S. S., Richman, J. M., Thirlby, R. C., Wu, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+continuous+wound+catheters+delivering+local+anesthetic+for+postoperative+analgesia%3A+a+quantitative+and+qualitative+systematic+review+of+randomized+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Surg%22%5BJournal%5D)">Efficacy of continuous wound catheters delivering local anesthetic for postoperative analgesia: a quantitative and qualitative systematic review of randomized controlled trials.</a> J. Am. Coll. Surg. 203, 914-932 (2006).</li>
<li>Eriksson, A. S., Sinclair, R., Cassuto, J., Thomsen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+lidocaine+on+leukocyte+function+in+the+surgical+wound%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Influence of lidocaine on leukocyte function in the surgical wound.</a> Anesthesiology. 77, 74-78 (1992).</li>
<li>Clark, J. D., Shi, X., Li, X., Qiao, Y., Liang, D., Angst, M. S., Yeomans, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphine+reduces+local+cytokine+expression+and+neutrophil+infiltration+after+incision%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pain%22%5BJournal%5D)">Morphine reduces local cytokine expression and neutrophil infiltration after incision.</a> Mol. Pain. 3, 28(2007).</li>
<li>Webb, S. T., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-articular+bupivacaine%3A+potentially+chondrotoxic%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Anaesth%22%5BJournal%5D)">Intra-articular bupivacaine: potentially chondrotoxic.</a> Br. J. Anaesth. 102, 439-441 (2009).</li>
<li>Scott, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+infiltration+for+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Wound infiltration for surgery.</a> Anaesthesia. 65, Suppl . 1. 67(2010).</li>
</ol>

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Opisana powyżej metodologia okazała się wystarczająco czuła, aby wykryć biochemiczne mediatory stanu zapalnego i nocyceptywnego w wysięku z rany. Pobieranie próbek w różnych punktach czasowych pozwoliło nam również zaobserwować zmiany tych mediatorów w czasie. 1,2 Nie znamy żadnego innego testu na ranę chirurgiczną u ludzi, który mógłby seryjnie mierzyć profil uwalniania mediatorów stanu zapalnego i nocyceptywnego w wysięku z rany operacyjnej. Wyniki naszej metodologii pobierania wysięku z rany z miejsca nacię...

Po chirurgicznym nacięciu, rezydentne i migrujące komórki zapalne uwalniają pro- i przeciwzapalne cytokiny, prostanoidy, neuropeptydy i chemokiny, które są ważne dla inicjowania i utrzymywania bólu. 3,4 Zdolność do zbierania markerów biochemicznych specyficznych dla danego miejsca ma kluczowe znaczenie dla określenia związku między poziomami w surowicy i ranie pooperacyjnej, zrozumienia złożonego związku między uwalnianiem mediatora a bólem chirurgicznym oraz oceny wpływu podawania leków zarówno ogólnoustrojowych, jak i obwodowych na biochemię rany chirurgicznej. Badania koncentrowały się na ogólnoustrojowych pomiarach mediatorów biochemicznych i nie uwzględniały uwalniania specyficznego dla danego miejsca. 5,6 Pomiary cytokin i chemokin w surowicy mogą nie odzwierciedlać miejscowych zdarzeń biochemicznych związanych z raną pooperacyjną, a jedynie wskazywać na globalną odpowiedź ogólnoustrojową na uraz chirurgiczny. Ten artykuł zawiera szczegółowy i unikalny wizualny opis tej metodologii, do której po raz pierwszy odniesiono się w 2008 roku w Journal of Pain. 1 Celem tego artykułu JoVE jest dostarczenie unikalnego i wizualnie ulepszonego opisu metod.

zbieranie i pomiar biochemicznych mediatorów wysięku z rany w ranach chirurgicznych

Collecting And Measuring Wound Exudate Biochemical Mediators In Surgical Wounds

Opisujemy metodologię, dzięki której jesteśmy w stanie zebrać i zmierzyć biochemiczne mediatory stanu zapalnego i nocyceptywnego w miejscu rany chirurgicznej. Zbieranie markerów biochemicznych specyficznych dla danego miejsca jest ważne dla zrozumienia związku między poziomami w surowicy a raną pooperacyjną, określenia wszelkich powiązań między uwalnianiem mediatorów, bólem, stosowaniem leków przeciwbólowych i innymi interesującymi wynikami oraz oceny wpływu podawania leków ogólnoustrojowych i obwodowych na biochemię ran chirurgicznych. Metodologia ta została zastosowana u zdrowych kobiet poddawanych planowemu cięciu cesarskiemu w znieczuleniu podpajęczynówkowym. Mierzyliśmy wysięk z rany i mediatory surowicy w tych samych odstępach czasu, co ocena bólu pacjentki i zużycie leków przeciwbólowych przez okres do 48 godzin po cesarskim cięciu. Korzystając z tej metodologii, byliśmy w stanie wykryć różne mediatory biochemiczne, w tym czynnik wzrostu nerwów (NGF), prostaglandynę E2 (PG-E2), substancję P, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, TNFα, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 i MIP-1β. Badania z zastosowaniem tego testu biologicznego ran chirurgicznych u ludzi nie wykazały korelacji między stężeniami cytokin w ranie i surowicy ani ich profilem uwalniania w czasie (J Pain. 2008; 9(7):650-7). 1 Udokumentowaliśmy również przydatność tej techniki do identyfikacji zmian w zawartości cytokin w ranie, w których pośredniczą leki (Anesth Analg 2010; 111:1452-9). cyfra arabska

Stosując tę metodologię, byliśmy w stanie wykryć wszystkie opisane powyżej mediatory biochemiczne z wyjątkiem IL-5 w wysięku z rany i w osoczu.1,2 Niektóre dodatkowe cytokiny nie zostały wykryte w osoczu (IL-4, IL-17, TNFα, INFγ, GM-CSF).1 Przebieg czasowy pomiarów cytokin i chemokin w raportowanych badaniach był spójny – osiągnęły one plateau w ciągu pierwszych kilku godzin, które utrzymywało się przez 24-godzinny okres obserwacji.1,2 Jednakże poziom NGF wzrostył stale w ciągu 24-godzinn...

Ten artykuł zawiera szczegółowy i wizualny opis metodologii zbierania i pomiaru biochemicznych mediatorów stanu zapalnego i nocyceptywnego w miejscu rany operacyjnej po cesarskim cięciu. Ten ludzki test biologiczny został wykorzystany do określenia korelacji między stężeniami cytokin w ranie i surowicy a zmianami w cytokinach, chemokinach i neuropetydach spowodowanych lekiem.

Zbieranie i pomiar biochemicznych mediatorów wysięku z rany w ranach chirurgicznych

We describe a methodology by which we are able to collect and measure biochemical inflammatory and nociceptive mediators at the surgical wound site. ...

System przeciwbólowy On-Q został opracowany z myślą o precyzyjnym podawaniu znieczulenia w miejscu operowanym. Naukowcy mogą jednak zmodyfikować to urządzenie, aby analizować wydzielinę z rany. Aby rozpocząć tę analizę, chirurg wprowadza system On-Q do warstwy podskórnej tuż przed zamknięciem rany.Po przymocowaniu On-Q do skóry za pomocą paska chirurgicznego i przezroczystej taśmy, urządzenie jest napełniane solą fizjologiczną, znieczuleniem miejscowym lub badanym lekiem. Trójdrożny kurek zatrzymujący jest następnie wbudowany w ten system, aby umożliwić aspirację wysięku z rany w określonych punktach czasowych w danym czasie. Punkt pierwszy, mililitr wysięku można odessać za pomocą strzykawki i przechowywać do wykorzystania w przyszłości lub analizować.Cześć, nazywam się Brendan Cavallo i pracuję na Wydziale Anestezjologii w Centrum Medycznym Uniwersytetu Stanforda. Dzisiaj pokażemy Wam procedurę pobierania i pomiaru wysięku z rany oraz mediatorów biochemicznych z rany operacyjnej. Będziemy używać tej procedury do badania specyficznych dla miejsca mediatorów nocyceptywnych i zapalnych z ran chirurgicznych w regularnych odstępach czasu, zgodnie z protokołem badania dotyczącym porodu cesarskiego.Dobra, więc teraz zacznijmy. Zespół chirurgiczny rozpoczyna zabieg od wprowadzenia systemu przeciwbólowego On-Q On-Q do warstwy podskórnej tuż przed zamknięciem rany. On Q jest następnie mocowany do skóry za pomocą paska chirurgicznego i przezroczystej taśmy.On Q jest wypełniony do 100 mililitrami zwykłej soli fizjologicznej, środka znieczulającego miejscowo lub badanego leku. System w sposób ciągły dostarcza podskórnie do rany zwykłą sól fizjologiczną lub środek znieczulający miejscowo z szybkością dwóch mililitrów na godzinę. To ciągłe dostarczanie zapobiega krzepnięciu cewnika i poprawia niezawodność systemu w wytwarzaniu próbek wysięku.Następnie do tego systemu wbudowany jest trójdrożny kurek zatrzymujący, który umożliwia aspirację wysięku z rany w określonych punktach czasowych w punktach czasowych określonych w protokole. Pobieramy jeden mililitr wysięku z rany do polietylenowego kubka zawierającego 30 mikrolitrów inhibitora proteinazy. W takim przypadku należy zebrać wysięk po sześciu i 24 godzinach po cesarskim cięciu.W tym samym czasie w odstępach czasu pobiera się 10 mililitrów krwi do zielonej górnej probówki do pobierania krwi zawierającej heparynę litową. Próbka krwi jest następnie odwirowywana z prędkością 3000 obr./min przez 10 minut. Supinat surowicy dodaje się następnie do 300 mikrolitrów inhibitora proteinazy.Wysięk z rany jest również odwirowywany, a supinat usuwa ranę, a próbki surowicy umieszcza się następnie w standardowej probówce z mikrowirówką i przechowuje w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza. Po przetworzeniu wszystkich zbiorów mierzy się poziomy mediatorów biochemicznych zarówno w surowicy, jak i wysięku z rany. Właśnie pokazaliśmy, jak mierzyć i pobierać mediatory biochemiczne rany z rany po cesarskim cięciu.Ale jeśli o to chodzi, możesz zastosować to do każdej innej rany chirurgicznej. Chociaż stwierdziliśmy, że ta technika jest bardzo skuteczna w wytwarzaniu wysięku z rany u około 5% pacjentów, mogą wystąpić pewne trudności z zasysaniem wysięku z rany. Techniki, które stosujemy, aby poprawić sytuację, polegają na zmianie pozycji pacjenta z siedzącej na leżącą lub odwrotnie.Delikatnie naciskamy również na brzuch i ranę. Możesz użyć zwykłego spłukiwania solą fizjologiczną o pojemności jednego cm3, a od czasu do czasu musimy wycofać cewnik na jeden do dwóch centymetrów, aby móc wytworzyć wysięk z rany. Więc to wszystko.Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w nauce.

collecting-measuring-wound-exudate-biochemical-mediators-surgical

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Zbieranie i pomiar biochemicznych mediatorów wysięku rannego w ranach pooperacyjnych

Technika pozyskiwania i pomiaru mediatorów biochemicznych w ranie chirurgicznej w określonych punktach czasowych.

Pozyskiwanie i pomiar mediatorów nocyceptywnych i zapalnych w ranach pooperacyjnych

Ten film demonstruje obrazowanie in vivo w celu zbadania dynamiki rekrutacji neutrofili w miejscu infekcji u transgenicznej myszy z obniżoną odpornością, z neutrofilami wykazującymi ekspresję GFP. Polega na wstrzyknięciu bakterii luminescencyjnych w celu wywołania infekcji. Prowadzi to do rekrutacji neutrofili do miejsca infekcji, których śledzenie odbywa się za pomocą obrazowania.

Monitorowanie dynamiki rekrutacji neutrofili i obciążenia bakteryjnego w miejscu zakażenia w modelu mysim

Tutaj opisujemy nowy model myszy z cukrzycą, wykorzystujący bezwłose myszy do nieinwazyjnego monitorowania w czasie rzeczywistym infekcji ran biofilmu bioluminescencyjnych Pseudomonas aeruginosa. Metodę tę można zaadaptować do oceny infekcji innymi gatunkami bakterii i mikroorganizmami modyfikowanymi genetycznie, w tym biofilmami wielogatunkowymi, oraz do testowania skuteczności strategii zwalczania biofilmu.

Przejdźmy na jasną stronę mocy: monitorowanie in vivo zakażeń biofilmem Pseudomonas aeruginosa w ranach przewlekłych w modelu myszy bezwłosej z cukrzycą

Tutaj opisane są dwa modele gojenia ran u myszy, jeden przeznaczony do oceny reakcji na gojenie się ran komórkowych i cytokinowych, a drugi do ilościowego określania szybkości zamykania ran. Metody te mogą być stosowane w złożonych modelach chorób, takich jak cukrzyca, w celu określenia mechanizmów różnych aspektów złego gojenia się ran.

Ocena ostrego gojenia się ran za pomocą grzbietowej podskórnej implantacji gąbki z polialkoholu winylowego i wycinających raki skóry ogona.

Ten protokół opisuje, jak generować obustronne rany wycinające o pełnej grubości u myszy oraz jak następnie monitorować, zbierać i przygotowywać rany do analizy morfometrycznej. Dołączono szczegółowy opis sposobu wykorzystania seryjnych odcinków histologicznych do definiowania, precyzyjnego określania ilościowego i wykrywania wad morfometrycznych.

Mysi model gojenia ran wycinających i histologiczna morfometryczna analiza ran

Tutaj opisujemy metody oceny ex vivo i in vivo rozprzestrzeniania się bakterii po zakażeniu ran u myszy. Protokół ten może być wykorzystany do testowania skuteczności miejscowych terapii przeciwbakteryjnych i przeciw biofilmowi lub do oceny zdolności dyspersji różnych szczepów lub gatunków bakterii.

Ocena dyspersji biofilmu w mysich ranach

Tutaj demonstrujemy zoptymalizowaną technikę oceny gojenia ran za pomocą ludzkiej skóry ex vivo w połączeniu z podejściem polegającym na barwieniu całego wierzchowania. Metodologia ta stanowi przedkliniczną platformę do oceny potencjalnych terapii ran.

Ludzki model ran ex vivo i barwienie całej góry w celu dokładnej oceny naprawy skóry

Przewlekłe rany, które są odporne na antybiotyki, stanowią poważne zagrożenie dla systemu opieki zdrowotnej. Infekcje biofilmem są uporczywe i wrogie i mogą powodować nieprawidłowe zamykanie się ran. Przedstawiamy klinicznie istotny model świń z przewlekłymi ranami pełnej grubości zakażonymi biofilmem. Model ten jest przydatny zarówno w badaniach mechanistycznych, jak i w testowaniu interwencji.

Świński model zakażenia biofilmem i niewidocznymi ranami

Rany stanowią globalne wyzwanie zdrowotne. W ramach tego badania opracowano standaryzowaną kabinę fotograficzną wykorzystującą planimetrię cyfrową w celu zminimalizowania zmienności pomiaru rany. Monitorowanie ran u myszy przez 14 dni wykazało początkowy wzrost powierzchni i obwodu rany, po którym następowało stopniowe zamykanie. Metodologia ta może pomóc w ocenie kinetyki zamykania ran w modelach przedklinicznych.

Planimetria cyfrowa do oceny kinetyki zamykania ran w modelu mysim

To badanie przedstawia model laboratoryjny przeznaczony do oceny kompatybilności materiałów do opatrunków z podciśnieniowymi systemami leczenia ran poprzez ocenę ciśnienia i zbierania płynów przez 72 godziny przy ciągłych i przerywanych ustawieniach ciśnienia.

Opracowanie modelu laboratoryjnego do oceny kompatybilności materiałów opatrunkowych z podciśnieniowymi systemami leczenia ran

Poznaj metodę zbierania wysięku z rany chirurgicznej i pomiaru biochemicznych mediatorów zapalnych oraz bólowych. Technika wykorzystuje zmodyfikowany system On-Q do analizy cytokin i neuropeptydów.

Zbieranie i pomiar biochemicznych mediatorów wysięku z rany w ranach chirurgicznych

Przeglądaj więcej filmów