Angiogeneza w niedokrwiennym płucu szczura

Ogólnym celem tej procedury jest podwiązanie lewej tętnicy płucnej. Osiąga się to poprzez najpierw intubację i wentylację znieczulonego szczura. Następnie wykonywana jest torakotomia i podwiązanie lewej tętnicy płucnej.

Po podwiązaniu klatka piersiowa jest zamykana i szczur może dojść do siebie. Ostatecznie zakres neowaskularyzacji w lewym płucu można ocenić, mierząc poziom fluorescencji w tkance lub innymi metodami histologicznymi. Główną zaletą tej techniki jest to, że daje ona możliwość zbadania rozwoju in vivo i neowaskularyzacji krążenia oskrzelowego w płucach.

Daje to możliwość zbadania złożonej struktury 3D tego nowego układu krwionośnego w wentylowanym płucu. Jest to bardzo różne od tego, co obecnie robi większość badaczy, którzy tworzą WHO, którzy przeprowadzają badania in vitro badające proliferację komórek śródbłonka i chemotaksję lub tworzenie rurek. Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają tę procedurę, będą miały trudności z próbą wykonania rozwarstwienia między lewą tętnicą płucną a lewym oskrzelem.

Jedyna rada, jaką mogę zaoferować, to ćwiczyć, uzbroić się w cierpliwość i często oglądać ten film, aby sprawdzić, czy w podejściu chirurgicznym nie ma drobnych zmian. Demonstruje tę procedurę John Jenkins, technik z mojego laboratorium. Aby rozpocząć, umieść znieczulonego szczura na tablicy operacyjnej i przymocuj stożek nosowy w celu kontynuacji znieczulenia, zaintubuj zwierzę plastikowym cewnikiem i podłącz szczura do respiratora.

Po nałożeniu maści na oczy połóż szczura na prawym boku i zaklej przydatki. Usuń włosy z obszaru operacyjnego i przygotuj skórę za pomocą wielokrotnych peelingów Betadine i alkoholu. Gdy będziesz gotowy, wykonaj poprzeczne nacięcie przez skórę.

Następnie tępo przeprowadź przez warstwy tłuszczu i tkanki, aby odsłonić klatkę piersiową. Po odsłonięciu zidentyfikuj trzecią przestrzeń międzyżebrową i użyj kleszczy, aby wykonać nacięcie między trzecim a czwartym żebrem. Włóż separatory żeber do otworu i delikatnie pociągnij żebra, aż płuco będzie widoczne.

Zabezpiecz otwór. Najpierw przesuń lewe płuco do tyłu prawą ręką. Następnie za pomocą prostych kleszczy chwyć lewą tętnicę płucną i drogi oddechowe lewą stroną.

Lewa tętnica płucna powinna leżeć na górze dróg oddechowych, a kleszcze powinny być prostopadłe do stołu. Po wyrównaniu prawidłowo użyj rzeźbionych kleszczy, aby oddzielić tętnicę od lewego głównego oskrzela pnia na ich naturalnych granicach. Ta linia separacji wydaje się cienka i biała między dwiema pojedynczymi strukturami.

Uważając, aby nie przejść przez statek. Przesuń końcówki kleszczy wzdłuż separacji. Kontynuuj w ten sposób, aż lewa tętnica płucna znajdzie się na krzywiźnie kleszczy.

Lewą ręką delikatnie zwolnij proste kleszcze i chwyć kawałek wstępnie przyciętego szwu. Otwórz zakrzywione kleszcze, obejmując tętnicę na tyle, aby chwycić szew. Delikatnie przeciągnij szew ruchem do góry w stosunku do krzywizny kleszczy.

Po przejściu zaciśnij szew, aby zamknąć lewą tętnicę płucną i odetnij pozostały szew, trzymając je razem kleszczami. Zszyj żebra. Uważając, aby nie zszyć skóry luźno.

Zawiąż kwadratowy węzeł, który później zamknie żebra. Nadmiernie napompuj płuco, na krótko zamykając linię wydechową respiratora, a następnie zaciśnij szew. Zabezpiecz szew, wykonując kolejny pełny węzeł przed odcięciem końcówek.

Usuń końcowe ciśnienie wydechowe i obserwuj przez 30 sekund, aby upewnić się, że płuca się nie zapadną. Na koniec nałóż pięć kropli. Bupiwakainę, zamknij skórę klejem tkankowym.

Wyłącz jonizację fluoru, ale kontynuuj wentylację szczura przez jedną do dwóch minut na powietrzu w pomieszczeniu, aż spontaniczne oddychanie powróci do stanu ustalonego. Następnie odłącz rurkę dotchawiczą od respiratora i upewnij się, że szczur oddycha spontanicznie przed jej usunięciem. Miejscowy lek przeciwbólowy należy podawać okresowo przez następne 24 godziny.

Na koniec wytrzyj maść z oczu i monitoruj zwierzę, aż wyzdrowieje w pożądanym czasie. Punkty po niedokrwieniu znakowane mikrosferami mogą być wstrzykiwane. Aby ocenić wielkość perfuzji oskrzeli, stosuje się pompę infuzyjną o małej objętości, która dostarcza znakowane mikrosfery do lewej tętnicy szyjnej ze stałą szybkością.

Podłącz cewnik do igły o rozmiarze 25 i czterokierunkowego kranu odcinającego. Na początek postępuj zgodnie z przygotowanymi wcześniej przygotowaniami chirurgicznymi. Gdy będziesz gotowy, wykonaj nacięcie nad linią środkową wzdłuż szyi.

Wypreparuj tkankę, aby odsłonić tchawicę i lewą tętnicę szyjną. Po odizolowaniu od dwóch szwów pod tętnicą szyjną mocno zawiąż szew proksymalny. Następnie wykonaj małe nacięcie w tętnicy i wprowadź cewnik wypełniony solą fizjologiczną.

Zabezpiecz to na miejscu za pomocą szwu poprzedzającego. Ten odlew naczyniowy zapewnia niezwykłą wizualizację angiogenezy oskrzeli w płucach. 28 dni po podwiązaniu lewej tętnicy w tym miejscu pokazany jest odcinek dróg oddechowych z lewego płuca trzy dni po zabiegu.

Zwróć uwagę na dwa wystające naczynia oskrzelowe wypełnione czerwonymi krwinkami znajdującymi się w ścianie dróg oddechowych. Wstawka jest barwiona, aby pokazać proliferujące komórki śródbłonka tętnicy oskrzelowej. Ten przykład pokazuje wycinek lewego płuca pobrany 14 dni po podwiązaniu.

Należy zwrócić uwagę na zwiększony rozmiar naczyń oskrzelowych w tym punkcie czasowym i zwiędłą fluorescencję tętnicy płucnej używaną do oceny wielkości perfuzji ogólnoustrojowej była praktycznie niewykrywalna w lewym płucu nieleczonych szczurów. Jednak u szczurów w lewym płucu mierzony był znaczny, znaczący i stały poziom. Studiował 14 dni po podwiązaniu Raz opanowane.

Tę technikę można wykonać w mniej niż godzinę, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak zaintubować szczura, wykonać torakotomię i pomyślnie podwiązać tętnicę płucną. W zależności od zmiennej wynikowej powinieneś być w stanie kaniulować lewą tętnicę szyjną i podać znakowane mikrosfery do analizy perfuzji.