DOI: 10.3791/50294-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Obecność stabilnych mikroRNA (miRNA) w egzosomach wzbudziła ogromne zainteresowanie jako nowy sposób komunikacji międzykomórkowej, ze względu na ich potencjalną użyteczność jako biomarkery i jako droga do interwencji terapeutycznej. Tutaj demonstrujemy oczyszczanie egzosomów z krwi i pożywek hodowlanych, a następnie ilościowy PCR w celu identyfikacji transportowanych miRNA.
Ogólnym celem tej procedury jest identyfikacja i ilościowe określenie mikroRNA obecnych w egzosomach uzyskanych z krwi lub pożywki do hodowli komórkowych. Osiąga się to poprzez pierwsze oczyszczenie egzosomów z pożywki krwi lub hodowli komórkowej za pomocą wirowania różnicowego. Drugim krokiem jest oczyszczenie całkowitego egzoomalnego RNA za pomocą zestawu do izolacji mikro RNA nirwany.
Po potwierdzeniu integralności i stężenia oczyszczonego RNA, jest on przekształcany w CDNA za pomocą odczynników w zestawie reakcyjnym odwrotnej transkryptazy Megaplex. Następnie wykonywany jest etap wstępnego wzmacniania przy użyciu starterów przedwzmacniacza Megaplex i miksu głównego attack man preempt. Aby amplifikować mikroRNA, ostatnim krokiem jest przeprowadzenie reakcji PCR w czasie rzeczywistym przy użyciu 2 384-dołkowych kart mikroprzepływowych lub kart TAC man o niskiej gęstości zawierających wysuszone sondy starterowe TAC MAN.
09:43
Related Videos
100.5K Views
06:46
Related Videos
17.9K Views
08:49
Related Videos
11.7K Views
06:59
Related Videos
10.9K Views
09:48
Related Videos
12.5K Views
06:03
Related Videos
23.8K Views
09:22
Related Videos
17.4K Views
09:18
Related Videos
10.2K Views
10:55
Related Videos
8.7K Views
09:59
Related Videos
26.1K Views
