Name: Wykorzystanie przewlekłego stresu społecznego do modelowania depresji poporodowej u gryzoni w okresie laktacji (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: Poznaj model przewlekłego stresu społecznego u gryzoni w okresie laktacji do badania depresji poporodowej. Metoda obejmuje wprowadzanie intruza i analizę zachowań macierzyńskich oraz rozwoju potomstwa.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować Chantal Lau za porady dotyczące oceny spożycia mleka, Klausowi Miczekowi za porady dotyczące stosowania stresu społecznego oraz Sheryl Goodman za informacje zwrotne na temat klinicznego znaczenia przewlekłego stresu społecznego. Rozwój tego protokołu był wspierany przez NICHD K99/R00 HDO59943 BCN.

Dorosłe samice Sprague Dawley są hodowane w naszym ośrodku dla zwierząt, mioty są zabijane do 8-10 szczeniąt o równym stosunku płci, a opieka matczyna i testy agresji są przeprowadzane w domowej klatce szczurów. Osoby eksperymentalne pozostają w tym samym pomieszczeniu przez cały czas trwania badania. Separatory klatkowe o wysokości jednego cala wykonane z przezroczystej pleksiglasu umieszcza się w klatce w 20 lub 21 dniu ciąży. Dzielą one klatkę na 4 ćwiartki, aby zapobiec czołganiu się szczeniąt z powrotem do matki po umieszczeniu w klatce. Typowe zachowanie matki jest potwierdzone u wszystkich matek w dniu porodu (1. dzień laktacji) poprzez bezpośrednią obserwację pozyskiwania młodych, pielęgnacji, pielęgnacji i samodzielnej pielęgnacji. Samce intruzów są mniejszymi lub podobnej wielkości samcami Sprague Dawley, a samice nigdy nie są prezentowane dwa razy z tym samym samcem. Opieka okołoporodowa i agresja matki są nagrane na wideo rankiem w 2., 9. i 16. dniu laktacji, jak opisano poniżej:
<ol>
	<li>Usuń ściółkę z matki, zważ samce i samice oddzielnie i umieść cały miot w czystej klatce na 60 minut.</li>
	<li>Pod koniec 60-minutowej separacji należy zważyć młode samce i samice oddzielnie przed umieszczeniem ściółki w klatce domowej matki, dzieląc młode możliwie równomiernie między 3 ćwiartki klatki niebędące gniazdem. Rozpocznij nagrywanie wideo przed ponownym wprowadzeniem, aby upewnić się, że wszystkie pobrania młodych są nagrywane.</li>
	<li>Nagrywaj wideo opiekę nad matką przez 30 minut. Pozwól matkom na interakcję z ich miotami przez kolejne 90 minut. 120 minut (30 minut nagrywania + dodatkowe 90 minut) Po umieszczeniu młodych w klatce matki, zważ je ponownie, aby określić spożycie mleka w ciągu dwóch godzin. Jedno młode jest poddawane eutanazji z każdego miotu w dniach testów behawioralnych po 120-minutowym okresie karmienia w celu pobrania próbki mleka z żołądka. Celem pobierania mleka od młodych jest ocena poziomu hormonów i innych czynników, które mogą pośredniczyć w behawioralnych i/lub fizjologicznych skutkach przewlekłego stresu społecznego dla potomstwa. </li>
	<li>Po zważeniu należy umieścić młode w matce i wprowadzić do klatki mniejszego lub podobnego wielkości nowego samca intruza na 30 minut, aby przetestować agresję matki. Rozpocznij nagrywanie wideo podczas wprowadzenia, aby upewnić się, że cała agresja została nagrana. W przypadku osób z grupy kontrolnej samiec jest usuwany po 30 minutach nagrania. W przypadku osób z przewlekłym stresem społecznym samce pozostawia się na kolejne 30 minut. W dniach testów niebehawioralnych w okresie od 2 do 16 dni, nowe samce intruzów są umieszczane w klatkach badanych CSS na jedną godzinę bez nagrywania wideo. Narażenie na stres społeczny zostaje zatrzymane, jeśli dojdzie do urazu, a ranne zwierzęta są leczone i usuwane z badania. </li>
	<li>Butelkę z 0,02% sacharyną dodaje się do klatki domowej matki o godzinie 15:00 w dniach 2, 9 i 16 na przemian po prawej i lewej stronie. Zarówno butelki ze zwykłą wodą, jak i sacharyną są ważone o godzinie 15:00, a następnie ponownie o 8:00 następnego ranka, aby określić preferencje dotyczące sacharyny.</li>
	<li>Młode są odsadzane od piersi w 23 dniu, a matki są w tym momencie poddawane eutanazji w celu uzyskania próbek osocza podstawowego i ekstrakcji mózgu do analizy ekspresji genów fizjologicznie i behawioralnie istotnych jąder docelowych.</li>
</ol>
Ocena zachowania matki
Zachowania agresji w opiece nad matką opisane w Tabelach 1 i 2 są oceniane na podstawie filmów za pomocą oprogramowania do analizy behawioralnej Odlog. Klucze są przypisywane do każdego zachowania, a jest przytrzymywany podczas wykonywania każdego zachowania, aby zarejestrować czas trwania tego zachowania. Częstotliwości są sumą naciśnięć dla każdego zachowania. Ten program tworzy zarówno kompletny plik danych z pięciosekundowymi przedziałami ze znacznikiem czasu, jak i tabelę podsumowującą z całkowitymi częstotliwościami i czasami trwania zdefiniowanych zachowań w ciągu 30-minutowego nagrania. Zarówno agresja matczyna, jak i opieka nad matką są oceniane w filmach z agresją matczyną, ponieważ matki reagują matczyno na młode, gdy samiec intruza jest w klatce.
Wkrótce po umieszczeniu szczeniąt w klatce, matka zabierze każde szczenię z osobna z powrotem do gniazda. Pełne aportowanie jest punktowane raz, gdy wszystkie młode są w gnieździe. Podczas gdy pełne odzyskanie jest zwykle punktowane tylko raz, czasami może być punktowane dwukrotnie, jeśli zapora przeniesie cały miot w nowe miejsce po początkowym pełnym odzyskaniu. Zachowanie gniazdowe jest oceniane za każdym razem, gdy materiał gniazdowy jest manipulowany przez matkę za pomocą ust lub łap. Pielęgnacja szczeniąt obejmuje lizanie lub manipulowanie sierścią szczeniaka przez matkę łapami. Punktacja pielęgniarska rozpoczyna się po tym, jak matka przez 10 sekund znajdowała się w nieruchomej pozycji kucającej lub leżącej. Ma to na celu danie szczeniętom czasu na rozpoczęcie ssania. Całkowita opieka matczyna to łączny czas gniazdowania, pielęgnacji szczeniąt i karmienia, ale może być ograniczona do pielęgnacji i karmienia, aby skupić się na zachowaniu ukierunkowanym na szczenięta. Samodzielna pielęgnacja definiuje się jako manipulowanie sierścią matki za pomocą pyska lub łap. Aktywność jest oceniana podczas każdej aktywności lokomotorycznej, która nie jest związana z wcześniej zdefiniowanymi zachowaniami.
Agresja matczyna polega na atakowaniu, gryzieniu, kopaniu i przypinaniu. Atak definiuje się jako boksowanie lub walkę z samcem intruzem. Gryzienie jest punktowane, gdy matka używa zębów na intruzie, a przypinanie jest rejestrowane, gdy tama przytrzymuje samca kończynami lub ciałem. Całkowita agresja to suma atakowania, gryzienia, kopania i przygwajania.
Statystyki
Zachowania matki, spożycie mleka i preferencje sacharyny u matek kontrolnych i CSS były porównywane w każdym dniu laktacji za pomocą jednostronnych testów t, aby ocenić wpływ CSS w poszczególnych dniach. Dane dotyczące wzrostu w 2., 9. i 16. dniu laktacji porównano z jednostronnymi testami t dotyczącymi masy ciała (w gramach) w 2. dniu lub procentowego wzrostu w stosunku do 2. dnia (9. lub 16. dzień masy ciała / dzień 2 x 100). Poziomy ekspresji mRNA OXT zostały znormalizowane w stosunku do trzech połączonych genów porządkowych, b-aktyny, fosforybozylotransferazy hipoksantynowej (HPRT) i dehydrogenazy gliceraldehydo-3-fosforanowej (GAPDH). Względne poziomy ekspresji mRNA OXT porównano z indywidualnymi testami t na każdym peptydzie lub receptorze dla każdego regionu mózgu. Wszystkie wyniki graficzne są przedstawione jako średnie grupowe + SEM, a poziom istotności statystycznej wynosił p ≤ 0,05.

<ol><li>Hammen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpersonal+stress+and+depression+in+women%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Affective+Disorders%22%5BJournal%5D)">Interpersonal stress and depression in women.</a> Journal of Affective Disorders. 74, 49-57 (2003).</li>
<li>Tennant, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+events%2C+stress+and+depression%3A+a+review+of+recent+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+and+New+Zealand+Journal+of+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Life events, stress and depression: a review of recent findings.</a> Australian and New Zealand Journal of Psychiatry. 36, 173-182 (2002).</li>
<li>Lovejoy, M. C., Graczyk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+depression+and+parenting+behavior%3A+A+meta-analytic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Psychology+Review%22%5BJournal%5D)">Maternal depression and parenting behavior: A meta-analytic review.</a> Clinical Psychology Review. 20, 561-592 (2000).</li>
<li>Goodman, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depression+in+Mothers%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Clin.+Psychol%22%5BJournal%5D)">Depression in Mothers.</a> Annu. Rev. Clin. Psychol. 3, 107-135 (2007).</li>
<li>Maestripieri, D., Badiani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prepartal+chronic+stress+increases+anxiety+and+decreases+aggression+in+lactating+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Prepartal chronic stress increases anxiety and decreases aggression in lactating female mice.</a> Behav. Neurosci. 105, 663-668 (1991).</li>
<li>Smith, J. W., Seckl, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+stress+induces+post-partum+depression-like+behavior+and+alters+maternal+care+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Psychoneuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Gestational stress induces post-partum depression-like behavior and alters maternal care in rats.</a> Psychoneuroendocrinology. 29, 227-244 (2004).</li>
<li>King, J. A., Garelick, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedure+for+minimizing+stress+for+fMRI+studies+in+conscious+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Procedure for minimizing stress for fMRI studies in conscious rats.</a> Journal of Neuroscience Methods. 148, 154-160 (2005).</li>
<li>Pardon, M. C., Gérardin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+prepartum+chronic+ultramild+stress+on+maternal+pup+care+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Influence of prepartum chronic ultramild stress on maternal pup care behavior in mice.</a> Biological Psychiatry. 47, 858-863 (2000).</li>
<li>Brunton, P. J., Russell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+Social+Stress+in+the+Rat+Programmes+Neuroendocrine+and+Behavioural+Responses+to+Stress+in+the+Adult+Offspring%3A+Sex-Specific+Effects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Prenatal Social Stress in the Rat Programmes Neuroendocrine and Behavioural Responses to Stress in the Adult Offspring: Sex-Specific Effects.</a> Journal of Neuroendocrinology. 22, 258-271 (2010).</li>
<li>Nephew, B. C., Bridges, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+chronic+social+stress+during+lactation+on+maternal+behavior+and+growth+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stress%22%5BJournal%5D)">Effects of chronic social stress during lactation on maternal behavior and growth in rats.</a> Stress. 14, 677-684 (2011).</li>
<li>Herzog, C. J., Czéh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+social+instability+stress+in+female+rats%3A+A+potential+animal+model+for+female+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Chronic social instability stress in female rats: A potential animal model for female depression.</a> Neuroscience. 159, 982-992 (2009).</li>
<li>Murgatroyd, C. A., Nephew, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+early+life+social+stress+on+maternal+behavior+and+neuroendocrinology%5BTitle%5D)+AND+%22Psychoneuroendcrinology%22%5BJournal%5D)">Effects of early life social stress on maternal behavior and neuroendocrinology.</a> Psychoneuroendcrinology. 38, 219-228 (2013).</li>
<li>Hillerer, K. M., Reber, S. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+Chronic+Pregnancy+Stress+Reverses+Peripartum-Associated+Adaptations%3A+Implications+for+Postpartum+Anxiety+and+Mood+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Exposure to Chronic Pregnancy Stress Reverses Peripartum-Associated Adaptations: Implications for Postpartum Anxiety and Mood Disorders.</a> Endocrinology. 152, 3930-3940 (2011).</li>
<li>Kudryavtseva, N. N., Avgustinovich, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+physiological+markers+of+experimental+depression+induced+by+social+conflicts+%28DISC%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aggressive+Behavior%22%5BJournal%5D)">Behavioral and physiological markers of experimental depression induced by social conflicts (DISC).</a> Aggressive Behavior. 24 (1998), 271-286 (1998).</li>
<li>Nephew, B. C., Caffrey, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+oxygen+level-dependent+signal+responses+in+corticolimbic+%27emotions%27+circuitry+of+lactating+rats+facing+intruder+threat+to+pups%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Blood oxygen level-dependent signal responses in corticolimbic 'emotions' circuitry of lactating rats facing intruder threat to pups.</a> European Journal of Neuroscience. 30, 934-945 (2009).</li>
<li>Neumann, I., Toschi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+defense+as+an+emotional+stressor+in+female+rats%3A+correlation+of+neuroendocrine+and+behavioural+parameters+and+involvement+of+brain+oxytocin%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Maternal defense as an emotional stressor in female rats: correlation of neuroendocrine and behavioural parameters and involvement of brain oxytocin.</a> Eur. J. Neurosci. 13, 1016-1024 (2001).</li>
<li>Douglas, A. J., Meddle, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+stress+induces+hypothalamo-pituitary-adrenal+axis+responses+in+lactating+rats+bred+for+high+trait+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Social stress induces hypothalamo-pituitary-adrenal axis responses in lactating rats bred for high trait anxiety.</a> European Journal of Neuroscience. 25, 1599-1603 (2007).</li>
<li>Nephew, B. C., Bridges, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+actions+of+arginine+vasopressin+and+a+V1a+receptor+antagonist+on+maternal+aggression%2C+maternal+behavior%2C+and+grooming+in+lactating+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Central actions of arginine vasopressin and a V1a receptor antagonist on maternal aggression, maternal behavior, and grooming in lactating rats.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 91, 77-83 (2008).</li>
<li>Lau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Stress+on+Lactation%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Effects of Stress on Lactation.</a> Pediatric Clinics of North America. 48 (05), 221-234 (2001).</li>
<li>Lau, C., Simpson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+the+study+of+the+effect+of+prolonged+stress+on+lactation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Animal models for the study of the effect of prolonged stress on lactation in rats.</a> Physiology & Behavior. 82, 193-197 (2004).</li>
<li>Baranyi, J., Bakos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+instability+in+female+rats%3A+The+relationship+between+stress-related+and+anxiety-like+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Social instability in female rats: The relationship between stress-related and anxiety-like consequences.</a> Physiology & Behavior. 84, 511-518 (2005).</li>
<li>Lazosky, A., Britton, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+5-HT-1A+receptor+agonists+on+CRF-induced+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Effects of 5-HT-1A receptor agonists on CRF-induced behavior.</a> Psychopharmacology. 104, 132-136 (1991).</li>
<li>Spruijt, B. M., Van Hooff, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethology+and+neurobiology+of+grooming+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Ethology and neurobiology of grooming behavior.</a> Physiological Reviews. 72, 825-852 (1992).</li>
<li>Denmark, A., Tien, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+chronic+social+defeat+stress+on+mouse+self-grooming+behavior+and+its+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The effects of chronic social defeat stress on mouse self-grooming behavior and its patterning.</a> Behavioural Brain Research. 208, 553-559 (2010).</li>
<li>Kalueff, A. V., Wheaton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+wrong+with+my+mouse+model%3F%3A+Advances+and+strategies+in+animal+modeling+of+anxiety+and+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">What's wrong with my mouse model?: Advances and strategies in animal modeling of anxiety and depression.</a> Behavioural Brain Research. 179, 1-18 (2007).</li>
<li>Ivy, A. S., Brunson, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysfunctional+nurturing+behavior+in+rat+dams+with+limited+access+to+nesting+material%3A+A+clinically+relevant+model+for+early-life+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dysfunctional nurturing behavior in rat dams with limited access to nesting material: A clinically relevant model for early-life stress.</a> Neuroscience. 154, 1132-1142 (2008).</li>
<li>Brunson, K. L., Kramár, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Late-Onset+Cognitive+Decline+after+Early-Life+Stress%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Late-Onset Cognitive Decline after Early-Life Stress.</a> The Journal of Neuroscience. 25, 9328-9338 (2005).</li>
<li>Murgatroyd, C., Patchev, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+DNA+methylation+programs+persistent+adverse+effects+of+early-life+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dynamic DNA methylation programs persistent adverse effects of early-life stress.</a> Nat. Neurosci. 12, 1559-1566 (2009).</li>
<li>Lupien, S. J., McEwen, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+stress+throughout+the+lifespan+on+the+brain%2C+behaviour+and+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of stress throughout the lifespan on the brain, behaviour and cognition.</a> Nat. Rev. Neurosci. 10, 434-445 (2009).</li>
</ol>

Autorzy nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Dane uzyskane z paradygmatu CSS najprawdopodobniej będą spójne i powtarzalne w stabilnym środowisku badań behawioralnych. Twierdzi się, że trzymanie i hodowla zwierząt laboratoryjnych jest elementem, który należy dokładniej rozważyć w każdym rodzaju badania, zwłaszcza w badaniach behawioralnych. Praktyki w zakresie utrzymania i hodowli, które mogą powodować zakłócenia, obejmują: począwszy od ciężarnych matek wysyłanych od dostawcy, codzienne przenoszenie zapór między pomieszczeniami w celu przeprowadzenia testów behawioralnych, zmianę pory dnia testów behawioralnych, nadmierne narażenie zapór na nowe widoki, dźwięki lub zapachy, nieużywanie klatki domowej do testów behawioralnych, brak lub niespójny materiał do budowy gniazda, oraz niewłaściwa rutynowa opieka nad zwierzętami (np. narażenie na mokrą i zabrudzoną ściółkę). Ponadto włączenie innych testów behawioralnych w okresie laktacji (np. test wymuszonego pływania lub labirynt na wysokości plus plus) może wprowadzać zakłócenia. Jednak zastosowanie nowego środowiska klatkowego lub innego ostrego stresora może być przydatne do ujawnienia różnic behawioralnych, które nie są widoczne w przypadku testów w klatkach domowych ze względu na potencjalne interakcje między przewlekłym stresem, ostrym stresem i zachowaniem. 
Obecnie opisany protokół jest skuteczny w przypadku szczurów Sprague Dawley, ale w przypadku innych szczepów i gatunków mogą być konieczne modyfikacje protokołu. Na przykład szczenięta muszą być chronione barierą przed bardzo agresywnymi samcami Long Evans, aby zapobiec obrażeniom. Kluczowe praktyki dla zarządzania stresem społecznym obejmują wykorzystanie mniejszych lub podobnych rozmiarów samców i pierwszą interakcję samca intruza z wysoce agresywną matką dnia 2, aby zapewnić porażkę i konsekwentne uległe zachowanie u samców. Jeśli samce zaatakują miot, powinny zostać usunięte z badania, ponieważ jest prawdopodobne, że zaatakują kolejne mioty. Jedną z opcji zmniejszenia prawdopodobieństwa wystąpienia nadmiernie agresywnych samców jest pokonanie ich przez większego samca przed rozpoczęciem badania. W przypadku oceny behawioralnej konieczne jest rejestrowanie i analiza zarówno częstotliwości, jak i czasu trwania większości zachowań, aby zapewnić pełny obraz zachowania, a stosowanie krótszych interwałów nagrywania lub kontroli wyrywkowych może skutkować zebraniem niewystarczających danych do dokładnego przetestowania hipotez. Dokładne i konsekwentne szkolenie osób oceniających można osiągnąć za pomocą wcześniej ocenionych filmów behawioralnych.
Głównym zastosowaniem modelu CSS jest testowanie obecnych i nowatorskich metod leczenia depresji poporodowej i lęku. Dodatkowym zastosowaniem tego modelu jest zbadanie wpływu powszechnych praktyk i procedur na opiekę nad matką, takich jak porody przez cesarskie cięcie, poród indukowany i różne harmonogramy laktacji. Dalsze badania nad potencjalnym wpływem stresu na laktację będą cenne, biorąc pod uwagę brak badań na ten temat. O ile próbki mleka od matek byłyby przydatne, o tyle konieczność znieczulenia i egzogennego OXT w pobieraniu tych próbek wprowadza kilka zaburzeń behawioralnych i fizjologicznych, więc badania nad wpływem stresu na laktację mogą nie sprzyjać jednoczesnej analizie behawioralnej. Potencjał badań międzypokoleniowych z modelem CSS jest ogromny, a badania te mogą również obejmować różne metody leczenia stresu dorosłego potomstwa w celu zbadania potencjalnych interakcji między stresem we wczesnym okresie życia a późniejszym narażeniem na stres.
Znaczenie modelu CSS i związanych z nim testów behawioralnych koncentruje się na znaczeniu etologicznym i translacyjnym. Postuluje się, że brak skuteczności obecnych metod leczenia depresji i lęku wynika z braku etologicznego pokrywania się badań na zwierzętach i ludziach. Zwierzęce modele depresji i lęku często opierają się na silnych stresorach fizycznych lub wysoce wyselekcjonowanych szczepach, co może wyjaśniać odkrycie, że obecne terapie przeciwdepresyjne są najbardziej skuteczne w przypadku ciężkiej depresji. Fizyczne czynniki stresogenne, takie jak powściągliwość i narażenie na szeroką gamę losowych stresorów, nie symulują typowych ludzkich doświadczeń. Uzasadnieniem dla randomizowanej ekspozycji stosowanej w paradygmatach przewlekłego łagodnego stresu jest zapobieganie aklimatyzacji. Jest to poważny problem, ale idealną sytuacją może być zastosowanie protokołu, do którego zwierzęta się nie przyzwyczajają, a który bardziej przypomina etiologię depresji i lęku u ludzi, takich jak stres społeczny. Oprócz promowania stosowania większej liczby stresorów etologicznych, kolejną zaletą modelu CSS jest zastosowanie odpowiedniej miary anhedonii, czyli zachowania matki. Jest to silne zachowanie zależne od nagrody, które bezpośrednio pośredniczy w niekorzystnym wpływie depresji u matek na potomstwo. Połączone włączenie stresorów etologicznych i miar anhedonii do badań nad depresją i lękiem będzie szczególnie korzystne w identyfikacji bezpiecznych i skutecznych środków zapobiegawczych i leczenia.
Stres społeczny jest z powodzeniem stosowany u samców i nieródek od kilku lat, a rozszerzenie tej pracy na samice prawdopodobnie przyniesie bogactwo nowych danych na temat depresji poporodowej, a także zaburzeń związanych ze stresem we wczesnym okresie życia zarówno u mężczyzn, jak i kobiet. Postuluje się, że zwiększone wykorzystanie etologicznych modeli zwierzęcych w badaniach nad depresją i lękiem doprowadzi do skuteczniejszych metod leczenia dzięki gromadzeniu danych behawioralnych, które są istotne etologicznie i translacyjnie, mniej zmienne i bardziej powtarzalne.

Etiologia zaburzeń nastroju, w tym depresji poporodowej, często wiąże się z narażeniem na przewlekły stres1,2. Chociaż depresja u matek ma negatywny wpływ zarówno na rodzicielstwo3, jak i na rozwój psychiczny potomstwa4 , zdecydowana większość badań nad depresją i lękiem koncentruje się na samcach zwierząt i ludziach. Chociaż istnieje kilka zwierzęcych modeli zmienionych zachowań matek przy użyciu przewlekłego stresu, większość z nich ma istotne składniki fizjologiczne, które mogą nie odnosić się do przewlekłych stresorów psychospołecznych powszechnie doświadczanych przez ludzi lub skupiać się głównie na okresie przedporodowym. Przewlekły stres związany z powściągliwością w czasie ciąży u szczurów zwiększa opiekę nad matką i niepokój oraz zmniejsza agresję matki w niektórych badaniach 5, ale zmniejsza opiekę matczyną w innych 6. Stres związany z powściągliwością jest silnym stresorem fizycznym 7, a niektóre doniesienia są niezgodne z osłabioną opieką matczyną obserwowaną u ludzkich matek z depresją poporodową 4. Ultrałagodny stres prenatalny nie wpływa na opiekę nad młodymi, ale zmniejsza agresję matki 8. Paradygmaty stresu ultrałagodnego wykorzystują różne losowe czynniki stresogenne (takie jak nachylenie klatki o 30 stopni, odwrócony cykl światła, uwięzienie, nocne oświetlenie i zabrudzona klatka) przez kilka dni, a wpływ poszczególnych składników jest często niejasny. Jest prawdopodobne, że niektóre stresory stosowane w paradygmatach ultrałagodnego stresu, takie jak odwrócony cykl światła i nocne oświetlenie, bezpośrednio wpływają na opiekę matczyną niezależnie od jakichkolwiek skutków stresu, ponieważ opieka matczyna u szczurów ma rytm okołodobowy. Narażenie na mokrą ściółkę jest znacznym stresem termicznym dla szczeniąt i może skutkować śmiertelnością młodych w czasie krótszym niż 24 godziny u młodych miotów (obserwacje osobiste).
Ostatnie badania na gryzoniach skupiają się na wykorzystaniu etologicznie istotnych czynników stresogennych, takich jak przewlekły stres społeczny (CSS), w badaniu wpływu stresu na zachowanie potomstwa i zaburzenia nastroju9-13. Dążąc do opracowania modelu etologicznego depresji poporodowej, zmniejszenia fizjologicznego składnika stosowanego stresora oraz uzyskania spójnych wyników behawioralnych i fizjologicznych, nasze laboratorium skupiło się na wykorzystaniu stresu społecznego. Podczas gdy chroniczna porażka społeczna jest skutecznie wykorzystywana jako model depresji wywołanej stresem społecznym u samców gryzoni14, nie jest to ekologicznie istotny model behawioralny dla wielu matek gryzoni, jeśli wykorzystuje się męskich intruzów, ponieważ pojedyncza porażka społeczna matki gryzonia zwykle skutkuje kanibalizmem miotu przez samca intruza. Jednak ostre narażenie na nowego samca intruza, bez społecznej porażki matki, wywołuje silne reakcje behawioralne i endokrynologiczne na stres u samic karmiących piersiąw wieku 15-18 lat. Istnieją również dowody na to, że przewlekły stres w okresie laktacji, w tym narażenie na kontakt z samcem, bezpośrednio upośledza produkcję mleka 19,20, co może wpływać na wzrost młodych. Wyniki te uzyskane na szczurach-matkach są poparte badaniami na dziewiczych samicach, u których przewlekła niestabilność społeczna (różna izolacja i stłoczenie) zwiększa aktywność osi podwzgórze-przysadka-nadnercza 11,21, zmienia regulację temperatury ciała, zmniejsza spożycie sacharozy i pokarmu i została zaproponowana jako zwierzęcy model depresji u samic11. Samouwodzenie, miara lęku 22,23, jest również wrażliwe na manipulacje stresem społecznym 24,25.
 Przewlekły stres społeczny (CSS) podczas laktacji może zakłócić zachowanie matki i zahamować wzrost matki i potomstwa. Codzienna prezentacja nowego samca intruza w okresie laktacji zmniejsza opiekę matczyną, zwiększa agresję matki wobec nowego intruza płci męskiej i samoopiekę, a także hamuje wzrost zarówno matki, jak i jej potomstwa10. Efekty te wskazują, że CSS jest etologicznie istotnym i skutecznym modelem zaburzeń nastroju, które obejmują upośledzenie opieki nad matką, anhedonię, podwyższony lęk i osłabiony wzrost potomstwa, taki jak depresja poporodowa. Zarówno dane dotyczące opieki nad matką, jak i potomstwa wskazują, że CSS może mieć trwały wpływ na przyszłe pokolenia, a badania nad wpływem przewlekłego stresu na zachowanie matki wspierają hipotezę, że wpływ przewlekłego stresu na zachowanie matki jest zapośredniczony hormonalnie (Murgatroyd i Nephew 2012). Co więcej, ostatnie dane dotyczące dorosłego potomstwa płci żeńskiej zestresowanych matek potwierdzają hipotezę, że CSS jako forma stresu we wczesnym okresie życia powoduje zmiany w centralnej oksytocynie (OXT) i prolaktynie (PRL), które są związane z nieefektywnymi zachowaniami pielęgniarskimi 12. Model CSS uzupełnia inne skuteczne modele zakłóceń w zachowaniu matki wywołanych stresem, takie jak ograniczanie materiału gniazdowego26,27 i separacja matki28,29. Unikalnymi aspektami modelu CSS jest to, że jest on etologicznie istotny zarówno u gryzoni, jak i u ludzi, ma stosunkowo niewielki składnik fizjologiczny i może być łączony z podobnymi stresorami na innych etapach życia (porażka społeczna, przewlekła niestabilność społeczna).
Głównymi celami w rozwijaniu paradygmatu CSS było użycie etologicznie i klinicznie istotnego stresora, wywołanie anhedonii (mierzonej opieką matki i preferencją sacharyny), zwiększenie behawioralnych miar lęku oraz upośledzenie rozwoju fizjologicznego, behawioralnego i/lub endokrynologicznego młodego szczeniaka. Celem modelu jest przetestowanie obecnych i nowatorskich metod leczenia depresji poporodowej i lęku.

<table><tbody><tr><td>Analiza wideo ODlog </td><td>Oprogramowanie Macropod</td><td>Wersja 2.7.2</td><td>Dostępna dla komputerów PC lub Mac </td></tr><tr><td>Rejestrator wideo </td><td>Sony</td><td>HDR-CX130</td><td></td></tr></tbody></table>

wykorzystanie przewlekłego stresu społecznego do modelowania depresji poporodowej u gryzoni w okresie laktacji

Using Chronic Social Stress to Model Postpartum Depression in Lactating Rodents

Narażenie na przewlekły stres jest wiarygodnym predyktorem zaburzeń depresyjnych, a stres społeczny jest powszechnym etologicznie istotnym stresorem zarówno u zwierząt, jak i u ludzi. Jednak wiele zwierzęcych modeli depresji zostało opracowanych u mężczyzn i nie mają one zastosowania ani nie są skuteczne w badaniach kobiet po porodzie. Ostatnie badania wykazały znaczący wpływ przewlekłego stresu społecznego w okresie laktacji, etologicznie istotnego i skutecznego stresora, na zachowanie, wzrost i neuroendokrynologię behawioralną. Niniejszy manuskrypt opisuje ten paradygmat chronicznego stresu społecznego przy użyciu powtarzającego się narażenia matki laktacyjnej na nowego męskiego intruza oraz ocenę behawioralnych, fizjologicznych i neuroendokrynnych skutków tego modelu. Przewlekły stres społeczny (CSS) jest cennym modelem do badania wpływu stresu na zachowanie i fizjologię matki, a także jej potomstwa i przyszłych pokoleń. Narażenie szczeniąt na CSS może być również wykorzystywane jako stres we wczesnym okresie życia, który ma długoterminowy wpływ na zachowanie, fizjologię i neuroendokrynologię.

Poddanie karmiącej samicy działaniu CSS skraca czas pielęgnacji młodych oraz całkowity czas opieki macierzyńskiej podczas 30 min nagrania wideo w 9. dniu laktacji (Nephew and Bridges 2011, Rycina 2). W 16. dniu laktacji wzrastają agresja i autopięlegnacja, będąca miarą lęku (Nephew and Bridges 2011, Rycina 3). Spożycie mleka przez młode samic poddanych CSS jest o 40% mniejsze niż u samic kontrolnych w 9. i 16. dniu laktacji (Rycina 4), a wzrost młodych jest zahamowany w obu tych dniach (Nephew and Bridges 2011, Rycina 5). Preferencja sacharyny jest niższa w 16. dniu u samic traktowanych CSS (Rycina 6).
U dorosłych samic F1 z potomstwa samic traktowanych CSS spożycie mleka (Rysunek 7) oraz preferencja sacharyny (Rysunek 8) są obniżone w dniach 2 i 16. Ekspresja genu oksytocyny w jądrze nadwzrokowym jest niższa u tych samic (Rysunek 9), a podobne wyniki zgłoszono w jądrze przykomorowym, centralnym jądrze ciała migdałowatego oraz przyśrodkowym jądrze ciała migdałowatego (Murgatroyd and Nephew, 2012).
<table border="1">
<tbody >
 	<tr >
 	<td >ZACHOWANIE</td >
 <td >OPIS</td >
 </tr >
 <tr >
 	<td >Przywoływanie</td >
 <td >Przenoszenie młodych z powrotem do gniazda</td >
 </tr >
 <tr >
 	<td >Pełne przywoływanie</td >
 <td >Czas wymagany do przywołania wszystkich 8 młodych</td >
 </tr >
 <tr >
 	<td >Budowa gniazda</td >
 <td >Manipulowanie ściółką w obszarze gniazda za pomocą pyszczka lub łap</td >
 </tr >
 <tr >
 	<td >Pielęgnacja młodych</td >
 <td >Lizanie lub manipulowanie futrem młodego za pomocą łap</td >
 </tr >
 <tr >
 	<td >Karmienie</td >
 <td >Sytuacja, w której matka przyjmuje kucającą lub leżącą postawę podczas karmienia</td >
 </tr >
 <tr >
 	<td >Całkowita opieka macierzyńska</td >
 <td >Całkowity czas trwania budowy gniazda, pielęgnacji młodych i karmienia</td >
 </tr >
 <tr >
 	<td >Autopielęgnacja</td >
 <td >Manipulowanie własnym futrem matki za pomocą pyszczka lub łap</td >
 </tr >
 <tr >
 	<td >Aktywność</td >
 <td >Wszelka aktywność lokomotoryczna niezwiązana z powyższymi zachowaniami</td >
 </tr >
 </tbody >
 </table >
Tabela 1. Opieka macierzyńska.
<table border="1">
<tbody >
	<tr >
 	<td >ZACHOWANIE</td>
 <td >OPIS</td>
 </tr >
 <tr >
 	<td >Atakowanie</td>
 <td >Boksowanie się lub rzucanie na samca intruza</td>
 </tr >
 <tr >
 	<td >Gryzienie</td>
 <td >Użycie zębów do ataku na samca intruza</td>
 </tr >
 <tr >
 	<td >Kopanie</td>
 <td >Użycie tylnych kończyn do uderzenia samca intruza, podobnie jak kopanie u królika</td>
 </tr >
 <tr >
 	<td >Przytrzymywanie</td>
 <td >Samica matka przytrzymująca samca kończynami lub ciałem</td>
 </tr >
 <tr >
 	<td >Całkowita agresja</td>
 <td >Suma czasu trwania atakowania, gryzienia, kopania i przytrzymywania</td>
 </tr >
 </tbody >
</table >
Tabela 2. Agresja macierzyńska.
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig1.jpg" alt="Schemat eksperymentu dotyczącego zachowań macierzyńskich: ważenie młodych, separacja, rejestrowanie opieki, analiza agresji." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Harmonogram protokołu przewlekłego stresu społecznego.
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig2.jpg" alt="Wykres słupkowy opieki macierzyńskiej; grupa kontrolna vs stres; Dzień 9; pielęgnacja młodych, czas karmienia; p=0.06." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2. Przewlekły stres społeczny zmniejsza opiekę macierzyńską w 9. dniu laktacji. Narażenie laktującej samicy na obecność nowego samca intruza przez jedną godzinę dziennie przez 7 dni zmniejszyło czas poświęcony na pielęgnację młodych oraz całkowitą opiekę macierzyńską, obejmującą pielęgnację młodych, karmienie i zachowania związane z budową gniazda, podczas 30-minutowego wideo-rejestracji zachowań macierzyńskich (Nephew and Bridges, 2011). * Oznacza istotną różnicę między grupą kontrolną a grupą stresową, p&lt;0.05, n = 9-10.
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig3.jpg" alt="Analiza odpowiedzi behawioralnej, wykresy słupkowe; stres vs kontrola; czas trwania, częstotliwość; dane badawcze." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3. Przewlekły stres społeczny zwiększa agresję matczyną i lęk w 16. dniu laktacji. Poddawanie laktującej samicy działaniu nowego samca intruza przez jedną godzinę dziennie przez 14 dni zwiększyło czas trwania (A) oraz częstotliwość (B) agresji i pielęgnacji ciała (self-grooming) oraz zmniejszyło aktywność lokomotoryczną podczas 30-minutowego nagrania wideo agresji matczynej (Nephew and Bridges, 2011). * Oznacza istotną różnicę między grupą kontrolną a grupą stresową, p&lt;0.05, n = 9-10.
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig4.jpg" alt="Wykres porównawczy spożycia mleka; grupa kontrolna i grupa stresowana; dni 2, 9, 16; wykres słupkowy; dane naukowe." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 4"> 
Rysunek 4. Przewlekły stres społeczny zmniejsza spożycie mleka przez potomstwo. Całkowite spożycie mleka przez lęgi składające się z 8–10 szczeniąt w ciągu dwugodzinnego przedziału karmienia było mniejsze u zestresowanych matek w 9. i 16. dniu laktacji. * Oznacza istotną różnicę między grupą kontrolną a grupą stresowaną, p&lt;0.05, n = 12-14.
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig5.jpg" alt="Wykres przyrostu masy ciała szczeniąt; porównanie grup kontrolnej i stresowej w dniach 9 i 16; procentowy wzrost." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 5"> 
Rysunek 5. Przewlekły stres społeczny hamuje wzrost szczeniąt w 9. i 16. dniu laktacji. Narażenie matek na przewlekły stres społeczny przez 15 dni podczas laktacji skutkuje zahamowaniem wzrostu szczeniąt (Nephew and Bridges 2011). * Oznacza istotną różnicę między grupą kontrolną a grupą stresową, p&lt;0.05, n = 9-10. 
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig6.jpg" alt="Wykres słupkowy preferencji sacharyny porównujący grupy stresowe i kontrolne w dniach 2, 9 i 16." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 6"> 
Rysunek 6. Przewlekły stres społeczny indukuje zmniejszone spożycie sacharyny w 16. dniu laktacji. Piętnastodniowy stres społeczny zmniejsza procentowy udział spożycia sacharyny w stosunku do wody w okresie 17 hr. * Oznacza istotną różnicę między grupą kontrolną a grupą stresową, p&lt;0.05, n = 9-10.
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig7.jpg" alt="Wykres słupkowy spożycia mleka przez pokolenie F1; kontrola vs stres we wczesnym okresie życia; porównanie dni 2, 9, 16; pomiar w gramach." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 7"> 
Rycina 7. Przewlekły stres społeczny we wczesnym okresie życia zmniejsza spożycie mleka przez potomstwo matek F1. Całkowite spożycie mleka przez potomstwo matek F1 (mioty po 8-10 szczeniąt) w dwugodzinnym przedziale karmienia było zmniejszone w 2. i 16. dniu laktacji. * Oznacza istotną różnicę między grupą kontrolną a grupą stresową, p&lt;0.05, n = 12-14.
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig8.jpg" alt="Wykres preferencji sacharyny; wykres słupkowy; % spożycia w dniach 2, 9, 16; wyniki analizy statystycznej." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 8"> 
Rycina 8. Przewlekły stres społeczny we wczesnym okresie życia indukuje zmniejszone spożycie sacharyny w 2. i 16. dniu laktacji. Piętnastodniowy stres społeczny zmniejsza procentowy udział spożycia sacharyny w stosunku do wody w okresie 17 h. * oznacza istotną różnicę między grupą kontrolną a grupą stresową, p&lt;0.05, n = 12-14.
<img src="/files/ftp_upload/50324/50324fig9.jpg" alt="Wykres słupkowy względnej ekspresji SON OXT, warunki kontrolne vs stresowe, wynik analizy RNA." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 9"> 
Rysunek 9. Przewlekły stres społeczny we wczesnym okresie życia zmniejsza ekspresję mRNA oksytocyny w jądrze nadwzrokowym. Dorosłe żeńskie potomstwo matek poddanych przewlekłemu stresowi społecznemu wykazuje osłabioną centralną aktywność oksytocyny, co wiąże się ze zmniejszoną efektywnością karmienia (Murgatroyd and Nephew, 2012). Poziomy ekspresji mRNA OXT zostały znormalizowane względem trzech połączonych genów gospodarczych: b-aktyny, hypoksantyna-fosforobozylotransferazy (HPRT) oraz dehydrogenazy glikolowej-3-fosforanu (GAPDH). * Oznacza istotną różnicę między grupą kontrolną a grupą stresową, p&lt;0.05, n = 16-18.

Ten artykuł opisuje wykorzystanie chronicznego stresu społecznego intruza jako etologicznie istotnego paradygmatu do modelowania depresji poporodowej i lęku u gryzoni w okresie laktacji.

Wykorzystanie przewlekłego stresu społecznego do modelowania depresji poporodowej u gryzoni w okresie laktacji

Exposure to chronic stress is a reliable predictor of depressive disorders, and social stress is a common ethologically relevant stressor in both animals ...

Ogólnym celem następującego eksperymentu jest stworzenie ekologicznie istotnego modelu gryzoni do badania zaburzeń nastroju w okresie poporodowym. W pierwszej kolejności szczenięta poddawane są okresowi separacji od matki. Następnie szczenięta są zwracane do klatki domowej, a zachowania opiekuńcze matki są rejestrowane w celu wywołania stresu społecznego.Wprowadzony zostaje nowy samiec intruz. Agresję macierzyńską rejestruje się przez 30 minut lub dłużej w celu indukcji chronicznego stresu społecznego. Nasze wyniki wskazują, że chroniczny stres społeczny jest skutecznym i niezawodnym paradygmatem prowadzącym do osłabienia opieki macierzyńskiej.Kolejną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi modelami depresji indukowanej stresem, takimi jak powtarzalne ograniczanie ruchów, porażka społeczna czy paradygmaty przewlekłego łagodnego stresu, w których stosuje się zrandomizowany zestaw stresorów, jest fakt, że stres społeczny nie wprowadza istotnych zakłóceń logistycznych ani fizjologicznych. Wykorzystanie paradygmatów przewlekłego stresu społecznego może prowadzić do zidentyfikowania skuteczniejszych środków zapobiegawczych i metod leczenia zaburzeń nastroju u matek oraz ich potomstwa. Dorosłe samice są hodowane wewnątrz placówki, a testy przeprowadzane są w klatkach domowych, znajdujących się w tym samym pomieszczeniu przez cały okres badania.W 20. lub 21. dniu ciąży w klatce domowej umieszcza się jednoczasowe przegrody wykonane z przezroczystego pleksiglasu o wysokości jednej cala. Dzielą one klatkę na cztery kwadranty, aby zapobiec powrotowi szczeniąt do matki podczas testów. W dniu narodzin u wszystkich matek potwierdza się występowanie typowych zachowań macierzyńskich.Poprzez bezpośrednią obserwację odzyskiwania młodych, pielęgnacji, karmienia oraz autopielęgnacji. Samce intruzy wykorzystane w tym badaniu są mniejsze lub o podobnej wielkości. W przypadku szczurów linii Sprague Dawley, samce i samice nigdy nie są konfrontowane z tym samym samcem dwukrotnie.Użycie samców o rozmiarach zbliżonych do samic zapobiega infanticydowi. W pobliżu klatki zamontowano kamerę wideo, aby móc rejestrować zachowania podczas testów. Na początek oddziel lęg od samicy, zważ osobno młodego samca i samicę, a następnie umieść je w czystej klatce przechowawczej na 60 minut.Po zakończeniu tego 60-minutowego procesu separacji ponownie zważ szczenięta. Przed powrotem szczeniąt do ich domowej klatki uruchom nagrywanie wideo, aby upewnić się, że wszystkie zachowania związane z odzyskiwaniem młodych zostały zarejestrowane. Rozdziel szczenięta tak równomiernie, jak to możliwe, pomiędzy trzy ćwiartki klatki, które nie były wykorzystywane jako strefy testowe.Po ponownym wprowadzeniu zarejestruj zachowania opiekuńcze matki przez 30 minut. Zachowania opiekuńcze zazwyczaj obejmują przenoszenie młodych z powrotem do gniazda, zachowania związane z budową gniazda, pielęgnację młodych lub własną pielęgnację, a także karmienie piersią. Gdy matka wejdzie w interakcję z lęgiem przez łącznie 120 minut, ponownie zważ młode, aby określić ilość pobranego mleka.W ciągu dwugodzinnego okresu, w dniach przeprowadzania testów behawioralnych następujących po tym okresie karmienia, jedno szczenię z każdego miotu jest uśpiane. Aby pobrać próbkę mleka z żołądka, odwracamy szczenięta od matki. Po zważeniu i uruchomieniu nagrywania wideo, do klatki wprowadza się na 30 minut nowego samca o mniejszej lub podobnej wielkości w celu zbadania agresji macierzyńskiej.Zachowania agresywne matek zazwyczaj obejmują atakowanie, gryzienie, kopanie lub przyciskanie intruza (samca) przez samicę. W przypadku osobników kontrolnych samiec jest usuwany po 30-minutowym nagraniu wideo agresji macierzyńskiej w drugim, dziewiątym i szesnastym dniu laktacji; w przypadku osobników poddanych chronicznemu stresowi społecznemu samce pozostają z matkami przez 60 minut każdego dnia. W okresie 15 dni, między drugim a szesnastym dniem laktacji, w dniach drugim, dziewiątym i szesnastym pierwsze 30 minut jest rejestrowane analogicznie do osobników kontrolnych. W drugim, dziewiątym i szesnastym dniu testów, o godzinie 15:00 do klatki domowej matki dodaje się butelkę z 0,02% sacharyną, naprzemiennie po prawej i lewej stronie.Następnie ważone są butelki, aby określić preferencję do sacharyny. Szczenięta są odsadzane w 23. dniu, a matki poddawane są eutanazji w celu pobrania próbek do dalszych analiz. Dorosłe samice potomstwa matek poddanych przewlekłemu stresowi społecznemu później same wydają na świat potomstwo.W celu dalszej analizy wykorzystuje się oprogramowanie do analizy behawioralnej odd log do oceny zachowań macierzyńskich zarejestrowanych podczas badania. W przypadku wszystkich nagrań analizowane są zarówno agresja macierzyńska, jak i opieka macierzyńska. Program ten generuje zarówno kompletny plik danych z pięciosekundowymi przedziałami czasowymi z przypisanymi znacznikami czasu, jak i tabelę podsumowującą z całkowitą częstotliwością i czasem trwania wybranych zachowań w trakcie 30 minutowego nagrania.Przewlekły stres społeczny wywołany wystawieniem karmiącej samicy na obecność samca intruza przez jedną godzinę dziennie przez 15 dni doprowadził do skrócenia czasu pielęgnacji młodych oraz zmniejszenia całkowitej opieki macierzyńskiej. Do dziewiątego dnia laktacji i do 16. dnia laktacji u samicy zaobserwowano zwiększenie intensywności autpielęgnacji, co jest wskaźnikiem lęku oraz zachowań agresywnych. Odpowiednio, spożycie mleka przez młode zmniejszyło się w porównaniu z grupą kontrolną w dziewiątym i 16. dniu laktacji, a wzrost młodych był w obu tych dniach znacząco zahamowany.Stres społeczny zmniejszył również preferencję do sacharyny i wskaźnik hedonii smakowej w badaniu spożycia mleka przez szczenięta samic dorosłych. U potomstwa samic poddanych stresowi społecznemu odnotowano spadek preferencji do sacharyny w drugim i szesnastym dniu laktacji; niższa była również preferencja do sacharyny u samic F1 poddanych przewlekłemu stresowi społecznemu we wczesnych etapach życia. W drugim i szesnastym dniu laktacji ekspresja mRNA oksytocyny była osłabiona w jądrach nadwzrokowca u samic F1 poddanych stresowi we wczesnych etapach życia; podobne efekty zaobserwowano w jądrze przykomorowym.Podczas ustanawiania protokołu przewlekłego stresu społecznego ważne jest zminimalizowanie ekspozycji na dodatkowe stresory, takie jak transport matek z miotami, nadmierne zakłócenia powodowane przez ludzi, zanieczyszczone klatki oraz inne awersyjne bodźce akustyczne, oralne lub zapachowe. Stabilne warunki w pomieszczeniu dla zwierząt oraz spójne zasady chowu pozwolą na uzyskanie najbardziej powtarzalnych danych. Po zastosowaniu tej procedury można pobrać próbki z szerokiego zakresu tkanek w wielu punktach czasowych, aby zbadać wpływ przewlekłego stresu społecznego na inne układy narządowe.Ponadto stresory społeczne mogą być stosowane na wielu etapach cyklu życia, aby zbadać zarówno podatność, jak i odporność na zaburzenia indukowane stresem.

using-chronic-social-stress-to-model-postpartum-depression-lactating

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Stosowanie przewlekłego stresu społecznego do modelowania depresji poporodowej u laktujących gryzoni

Tutaj opisano metody rozwoju mysiego modelu podchronicznego i łagodnego stresu związanego z porażką społeczną i wykorzystano je do zbadania patogennych cech depresji, w tym objawów podobnych do hiperfagii i polidypsji po wzroście masy ciała.

Mysi model podchronicznego i łagodnego stresu porażki społecznej w celu zrozumienia deficytów behawioralnych i fizjologicznych wywołanych stresem

Protokół nieprzewidywalnego chronicznego łagodnego stresu (UCMS) jest sprawdzoną metodą badania zmian behawioralnych i fizjologicznych związanych z przewlekłym stresem i objawami depresyjnymi. Osiem tygodni od nałożenia protokołu UCMS wywołuje zmiany w zachowaniu i złe wyniki zdrowotne u gryzoni obu płci.

Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu w celu wywołania objawów depresyjnych, zmian w zachowaniu i negatywnych skutków zdrowotnych u gryzoni

Tutaj prezentujemy nieprzewidywalny protokół chronicznego łagodnego stresu u myszy. Protokół ten indukuje długoterminowy fenotyp podobny do depresji i umożliwia ocenę skuteczności przypuszczalnych leków przeciwdepresyjnych w odwracaniu behawioralnych i neuromolekularnych deficytów depresyjnych.

Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu do wywoływania anhedonii u myszy

Ten artykuł dostarcza uproszczony i ustandaryzowany protokół indukcji zachowań depresyjnych u myszy chronicznie unieruchomionych za pomocą ogranicznika. Ponadto wyjaśniono zachowanie i techniki fizjologiczne w celu weryfikacji indukcji depresji.

Protokół przewlekłego stresu unieruchamiającego w celu wywołania zachowań podobnych do depresji u myszy

Zadanie bariery labiryntu Y to test zachowania, który bada motywację do wydatkowania wysiłku na nagrodę. W tym miejscu omawiamy testowanie wielu dobrze zweryfikowanych przewlekłych stresorów, w tym przewlekłego kortykosteronu i stresu porażki społecznej z tym zachowaniem, a także nowego przewlekłego niedyskryminującego stresu porażki społecznej (CNSDS), który jest skuteczny u kobiet.

Przewlekły stres zmienia zachowania związane z wysiłkiem w zadaniu bariery Y-Maze u myszy

Paradygmat chronicznego stresu psychospołecznego (CGS) wykorzystuje klinicznie istotne czynniki stresogenne podczas ciąży u myszy do modelowania zaburzeń psychicznych matek i niemowląt. W tym miejscu przedstawiamy procedurę krok po kroku stosowania paradygmatu CGS i dalszych ocen w celu walidacji tego modelu.

Wykorzystanie mysiego modelu stresu psychospołecznego w ciąży jako translacyjnie istotnego paradygmatu dla zaburzeń psychicznych u matek i niemowląt

Opracowaliśmy model przyspieszonego stresu związanego z porażką społeczną dla dorastających myszy C57BL/6, który działa zarówno u samców, jak i samic i umożliwia ekspozycję podczas dyskretnych okresów dojrzewania. Ekspozycja na ten model indukuje unikanie społeczne, ale tylko w podgrupie pokonanych samców i samic myszy.

Model stresu porażki społecznej dla dorastających samców i samic myszy C57BL/6

Ten protokół opisuje model zwierzęcy do badania, jak przeciwności losu we wczesnym okresie życia, sprowokowane przez zubożałe środowisko i nieprzewidywalną opiekę matki we wczesnym okresie poporodowym, wpływają na rozwój mózgu i przyszłe ryzyko zaburzeń psychicznych.

Ograniczone ściółkowanie i gniazdowanie jako model przeciwności losu we wczesnym okresie życia u myszy

Ten protokół szczegółowo opisuje, jak przeprowadzić 10-dniowy przewlekły stres społeczny u wcześnie dorastających samców myszy, aby doprowadzić do długotrwałego unikania społecznego w wieku dorosłym u ponad 60% myszy.

Przewlekły stres związany z porażką społeczną u myszy we wczesnym okresie dorastania

Poprzez integrację czterech codziennych stresorów społecznych, niniejsze badanie opisuje model wielokrotnego zintegrowanego stresu społecznego (MISS) dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J. Po dziesięciu dniach powtarzającej się ekspozycji na MISS myszy rozwinęły fenotypy podobne do depresji i lęku, zapewniając w ten sposób naturalny, oparty na etiologii model zwierzęcy do badania zaburzeń psychicznych u kobiet.

Wieloraki zintegrowany model stresu społecznego dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J

Poznaj model przewlekłego stresu społecznego u gryzoni w okresie laktacji do badania depresji poporodowej. Metoda obejmuje wprowadzanie intruza i analizę zachowań macierzyńskich oraz rozwoju potomstwa.

Wykorzystanie przewlekłego stresu społecznego do modelowania depresji poporodowej u gryzoni w okresie laktacji

Przeglądaj więcej filmów