Name: In vivo (in vivo) Obrazowanie angiogenezy guza za pomocą fluorescencyjnej wideomikroskopii konfokalnej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 8 s
Description: Poznaj metodę obrazowania angiogenezy guza za pomocą fluorescencyjnej wideomikroskopii konfokalnej. Technika ta pozwala ilościowo ocenić gęstość naczyń włosowatych i przepuszczalność ściany śródbłonka w modelu nowotworu jelita grubego myszy.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Przygotowanie środka kontrastowego
<ol>
	<li>W przypadku FITC-dekstranu o stężeniu 70 kDa wstrzykiwana dawka wynosi 500 mg/kg (10 mg dekstranu FITC rozcieńczonego w 0,1 ml soli fizjologicznej dla myszy o masie ciała 20 g).</li>
	<li>Środek nie powinien być zbyt długo wystawiony na działanie światła. Aby uniknąć wybielania, zaleca się przykrycie tubki folią aluminiową.</li>
</ol>
2. Znieczulenie
<ol>
	<li>Myszy znieczulono przez dootrzewnowe wstrzyknięcie mieszaniny 1:4 ksylazyny (Rompun 2%, Bayer, Puteaux, Francja) i ketaminy (Kétamine 500, Virbac, Carros, Francja), odpowiednio 66 mg/kg i 264 mg/kg dla myszy 20 g.</li>
</ol>
3. Przygotowanie interesującego organu
<ol>
	<li>Ogoliliśmy myszy w miejscu zainteresowania (na przykład nad guzem podskórnym). Sierść zwierzęca jest często autofluorescencyjna, gdy jest biała. Gdy jest, pochłania światło.</li>
	<li>Skóra zwrócona w stronę narządu, który miał być zobrazowany, została nacięta. Ważne jest, aby poczekać, aż krwawienie ustanie przed wstrzyknięciem środka kontrastowego, w przeciwnym razie wycieknie on do krwi i zanieczyści obraz.</li>
</ol>
4. Akwizycja
<ol>
	<li>Środek kontrastowy wstrzykiwano albo przez żyłę szyjną, albo przez żyłę ogonową. Brak sygnału tła w narządzie lub obserwowany jest niewielki przy braku fluorescencyjnego środka kontrastowego.</li>
	<li>Sondę umieszczono przed organem, który miał być zobrazowany. W naszym badaniu był to guz.</li>
	<li>Laser został włączony, aby oświetlić guz i zobaczyć fluorescencję w naczyniach włosowatych.</li>
	<li>Guz badano ręcznie, przesuwając sondę bardzo powolnym ruchem podczas nagrywania w celu wizualizacji sieci naczyń włosowatych. Ważne jest, aby utrzymać pewną rękę, a ta technika wymaga trochę doświadczenia. W naszym badaniu ten pierwszy krok pozwolił na ilościowe określenie funkcjonalnej gęstości naczyń włosowatych.</li>
	<li>Drugim krokiem była dynamiczna akwizycja w czasie. Do tego badania użyliśmy dekstranu FITC o mocy 70 kDa. W większości normalnych narządów nie ma przecieku śródmiąższowego, ale jest w guzach. Aby uzyskać obrazy tej samej lokalizacji w czasie (tak jak w naszym przypadku), ważne jest, aby skonfigurować system utrzymujący sondę na obszarze zainteresowania. Dokonano tego za pomocą ręcznie wykonanej podpory do trzymania sondy oraz poprzez umieszczenie odrobiny żelu ultradźwiękowego na końcówce sondy. Przed rejestracją poświęcono czas na ustabilizowanie sondy umieszczonej w kontakcie z guzem. Po ustaleniu pozycji ruch był tylko minimalny ze względu na oddech myszy. Laser został włączony tak, aby rejestrować 3 obrazy co 30 sekund przez 20 minut w celu wykrycia obecności nieszczelności kapilarnej. Był wyłączany między każdym nagraniem, aby zmniejszyć wybielanie środkiem kontrastowym.</li>
<li>W naszym eksperymencie myszy zostały poświęcone pod koniec procedury w celu analizy histologicznej guzów.</li>
</ol>

<ol><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamental+concepts+of+the+angiogenic+process%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Fundamental concepts of the angiogenic process.</a> Curr Mol Med. 3 (7), 643-651 (2003).</li>
<li>Laemmel, E., Genet, M., Le Goualher, G., Perchant, A., Le Gargasson, J. F., Vicaut, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibered+confocal+fluorescence+microscopy+%28Cell-viZio%29+facilitates+extended+imaging+in+the+field+of+microcirculation.+A+comparison+with+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">Fibered confocal fluorescence microscopy (Cell-viZio) facilitates extended imaging in the field of microcirculation. A comparison with intravital microscopy.</a> J Vasc Res. 41 (5), 400-411 (2004).</li>
<li>Charnley, N., Donaldson, S., Price, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Imaging angiogenesis.</a> Methods Mol Biol. 467, 25-51 (2009).</li>
<li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Taillieu, F., Cuenod, C., Siauve, N., Clement, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+contrast+enhanced+optical+imaging+of+capillary+leakage%5BTitle%5D)+AND+%22Technol+Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">Dynamic contrast enhanced optical imaging of capillary leakage.</a> Technol Cancer Res Treat. 10 (1), 49-57 (2011).</li>
<li>Kurose, I., Kubes, P., Wolf, R., Anderson, D. C., Paulson, J., Miyasaka, M., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+nitric+oxide+production.+Mechanisms+of+vascular+albumin+leakage%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of nitric oxide production. Mechanisms of vascular albumin leakage.</a> Circ Res. 73 (1), 164-171 (1993).</li>
<li>Faye, N. F. L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+capillary+leakage+is+involved+in+the+onset+of+anaphylactic+hypotension%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Macromolecular capillary leakage is involved in the onset of anaphylactic hypotension.</a> Anesthesiology. , (2012).</li>
<li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. Macromolecular Capillary Leakage Is Involved in the Onset of Anaphylactic Hypotension. Anesthesiology. 117 (5), 1072-1079 (2012).</li>
<li>Tozer, G. M., Kanthou, C., Baguley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disrupting+tumour+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Disrupting tumour blood vessels.</a> Nat Rev Cancer. 5 (6), 423-435 (2005).</li>
<li>Ntziachristos, V., Schellenberger, E. A., Ripoll, J., Yessayan, D., Graves, E., Bogdanov, A., Josephson, L., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+antitumor+treatment+by+means+of+fluorescence+molecular+tomography+with+an+annexin+V-Cy5.5+conjugate%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Visualization of antitumor treatment by means of fluorescence molecular tomography with an annexin V-Cy5.5 conjugate.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (33), 12294-12299 (2004).</li>
<li>Cuccia, D. J., Bevilacqua, F., Durkin, A. J., Merritt, S., Tromberg, B. J., Gulsen, G., Yu, H., Wang, J., Nalcioglu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+quantification+of+optical+contrast+agent+dynamics+in+rat+tumors+by+use+of+diffuse+optical+spectroscopy+with+magnetic+resonance+imaging+coregistration%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Opt%22%5BJournal%5D)">In vivo quantification of optical contrast agent dynamics in rat tumors by use of diffuse optical spectroscopy with magnetic resonance imaging coregistration.</a> Appl Opt. 42 (16), 2940-2950 (2003).</li>
</ol>

Nie mamy nic do ujawnienia.

Badanie mikrokrążenia guza stało się niezbędne do zrozumienia patofizjologii wzrostu, rozprzestrzeniania się i odpowiedzi guza na terapię 1. Obrazowanie optyczne jest jedną z technik, które można wykorzystać do obserwacji naczyń włosowatych za pomocą fluorescencyjnego środka kontrastowego oraz do ilościowego określenia parametrów morfologicznych (funkcjonalna gęstość naczyń włosowatych) i funkcjonalnych (przeciek wskaźnika).
Obrazowanie mikroskopem fluorescencyjnym, które zastosowal...

Angiogeneza to złożony proces 1, który polega na tworzeniu nowych naczyń krwionośnych z wcześniej istniejących naczyń. Patologiczne zmiany w mikrokrążeniu tkankowym, składającym się z tętniczek, naczyń włosowatych i żyłek, są związane z wieloma chorobami, takimi jak rak, stany zapalne lub cukrzyca. W związku z tym konieczne jest opracowanie metod ilościowej oceny struktury i funkcji mikronaczyń. Obrazowanie umożliwia badanie mikronaczyń w sposób nieinwazyjny lub mikroinwazyjny, w czasie rzeczywistym i in vivo, a także powtarzanie pomiarów w czasie u tego samego zwierzęcia 2.
Obecnie, dynamiczne obrazowanie z kontrastem (DCE) 3 jest powszechnie używane do oceny mikrokrążenia tkankowego. Dynamiczne obrazowanie ze wzmocnieniem kontrastowym to technika, która w czasie śledzi biodystrybucję znacznika wstrzykniętego dożylnie. Z tego akwizycji można wyodrębnić parametry ilościowe odzwierciedlające unaczynienie tkanek. Obrazowanie DCE jest najczęściej stosowane w tomografii komputerowej, rezonansie magnetycznym lub ultrasonografii. Te techniki obrazowania nie pozwalają jednak na bezpośrednie oglądanie mikronaczyń, ponieważ ich rozdzielczość, inna niż przy użyciu określonych urządzeń eksperymentalnych, najczęściej pozostaje makroskopowa.
W tym artykule proponujemy zbadanie układu naczyniowego guza w skali mikroskopowej i in vivo za pomocą dynamicznego obrazowania optycznego wzmocnionego kontrastem, z wideomikroskopią konfokalną światłowodową. Zastosowaliśmy makrocząsteczkowy środek kontrastowy (FITC-dextran), który pozostaje wyłącznie w naczyniach lub przecieka przez barierę śródbłonkową do śródmiąższu, zgodnie z jego masą cząsteczkową i charakterystyką śródbłonka badanej tkanki 4. Pozwoliło to na zbadanie zarówno struktury mikronaczyń poprzez prawidłowe wytyczenie naczyń, jak i przepuszczalności kapilarnej, poprzez nieszczelność i gromadzenie się w śródmiąższu.

<table><tbody><tr><td>Serynge insuliny Myjector 1ml 29G</td><td>Terumo Europe</td><td>BS-05M2913</td><td></td></tr><tr><td>Izotiocyjanian fluoresceiny-dekstran 70 kDa </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01619HH</td><td>100 mg/mL rozcieńczony w soli fizjologicznej</td></tr><tr><td>Wideomikroskopia konfokalna z włóknami</td><td>Cellvizio - MaunaKea Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do kalibracji i czyszczenia dla LEICAFCM1000</td><td>Leica Microsystems</td><td>LSU-488</td><td>Sklep pod adresem 4 &deg; C</td></tr><tr><td>ProFlexTM Z</td><td>MaunaKea Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie do mozaiki</td><td>MaunaKea Technologies Oprogramowanie</td><td></td><td></td></tr><tr><td>do wykrywania naczyń</td><td>MaunaKea Technologies</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo (in vivo) obrazowanie angiogenezy guza za pomocą fluorescencyjnej wideomikroskopii konfokalnej

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

Światłowodowa fluorescencja konfokalna in vivo obrazowanie z wiązką światłowodów wykorzystuje tę samą zasadę, co fluorescencyjna mikroskopia konfokalna. Może wzbudzać fluorescencyjne elementy in situ przez światłowody, a następnie rejestrować niektóre z emitowanych fotonów za pośrednictwem tych samych światłowodów. Źródłem światła jest laser, który wysyła ekscytujące światło przez element w wiązce światłowodów, a podczas skanowania próbki odtwarza obraz piksel po pikselu. Ponieważ skan ten jest bardzo szybki, dzięki połączeniu go z dedykowanym oprogramowaniem do przetwarzania obrazu, można uzyskać obrazy w czasie rzeczywistym z częstotliwością 12 klatek na sekundę.
Opracowaliśmy technikę ilościowego charakteryzowania morfologii i funkcji naczyń włosowatych, używając urządzenia do wideomikroskopii fluorescencji konfokalnej. Pierwszym krokiem w naszym eksperymencie było nagranie 5-sekundowych filmów w czterech kwadrantach guza, aby uwidocznić sieć naczyń włosowatych. Wszystkie filmy zostały przetworzone za pomocą oprogramowania (ImageCell, Mauna Kea Technology, Paryż, Francja), które wykonuje automatyczną segmentację naczyń wokół wybranej średnicy (w naszym przypadku 10 μm). W ten sposób możemy określić ilościowo "funkcjonalną gęstość naczyń włosowatych", która jest stosunkiem między całkowitą powierzchnią naczynia a całkowitą powierzchnią obrazu. Parametr ten był zastępczym markerem gęstości mikrokrążenia, zwykle mierzonym za pomocą narzędzi patologicznych.
Drugim krokiem było nagranie filmów guza przez ponad 20 minut, aby określić ilościowo wyciek makromolekularnego środka kontrastowego przez ścianę naczynia włosowatego do śródmiąższu. Mierząc stosunek natężenia sygnału w śródmiąższu do natężenia w naczyniach, uzyskano "nieszczelność wskaźnika", działającą jako zastępczy marker przepuszczalności naczyń włosowatych.

Wykorzystując zgromadzone dane, mogliśmy ilościowo przeanalizować różne parametry odzwierciedlające mikrokrążenie.
Przeprowadziliśmy badanie in vivo obwodowej sieci naczyniowej guza okrężnicy wszczepionego myszom balb-c, wykorzystując system światłowodowej konfokalnej wideomikroskopii fluorescencyjnej (Cellvizio, Maunakea Technology, Paryż, Francja 2), po wstrzyknięciu makromolekularnego fluorescencyjnego środka kontrastowego: izotiocyjaniany fluoresceiny-dekstranu (FITC-de...

W tym artykule przedstawiamy metodę analizy mikronaczyń guza in vivo za pomocą dynamicznej wideomikroskopii fluorescencyjnej wzmocnionej kontrastem. Uzyskano dwa parametry ilościowe: funkcjonalną gęstość naczyń włosowatych odzwierciedlającą unaczynienie guza oraz nieszczelność wskaźnika odzwierciedlającą nieszczelność ściany śródbłonka.

In vivo (in vivo) Obrazowanie angiogenezy guza za pomocą fluorescencyjnej wideomikroskopii konfokalnej

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

Ogólnym celem następnego eksperymentu jest ilościowe określenie mikrokrążenia w modelu guza jelita grubego u myszy z wykorzystaniem konfokalnego systemu wideomikroskopii fluorescencyjnej. Osiąga się to poprzez dożylne wstrzyknięcie środka kontrastowego, a następnie nagranie filmów z mikro naczyń krwionośnych guza. Następnie obrazuje się cztery kwadranty guza, co umożliwia ilościowe określenie funkcjonalnej gęstości naczyń włosowatych.Następnie obserwuje się przenikanie środka kontrastowego z naczyń do przestrzeni śródmiąższowej w celu ilościowego określenia wskaźnika przecieku kapilarnego, odzwierciedlającego przepuszczalność ściany śródbłonka. W konsekwencji można ilościowo określić cechy morfologiczne i funkcjonalne naczyń nowotworowych, aby wykryć różnice między modelami nowotworów lub po zastosowaniu terapii celowanej. Ta technika dynamicznego obrazowania optycznego z kontrastem umożliwia analizę mikrokrążenia w obrębie nowotworu.Metoda ta odzwierciedla architekturę i funkcję naczyń nowotworowych poprzez ilościowe określenie gęstości i przepuszczalności naczyń włosowatych. Chociaż metoda ta pozwala na uzyskanie informacji o fizjologii nowotworu, może być ona stosowana również w innych układach, takich jak wstrząs anafilaktyczny, stany zapalne, choroby sercowo-naczyniowe oraz cukrzyca. Należy rozpocząć od ogolenia znieczulonej myszy w interesującym nas miejscu.Następnie, gdy krwawienie ustanie, nacinamy skórę, kierując się w stronę obrazowanego narządu. Wstrzyknij kontrast w celu ilościowego określenia funkcjonalnej gęstości naczyń włosowatych. Najpierw umieść sondę przed obrazowanym narządem.Następnie włącz laser oświetlający organ. Utrzymując pewny chwyt, powoli przesuwaj sondę, rejestrując obraz w miarę wizualizacji fluorescencyjnej sieci naczyń włosowatych.Aby ustabilizować dynamiczną akwizycję w czasie, nanieś niewielką ilość żelu do badań USG na końcówkę głowicy, a następnie umieść głowicę w uchwycie Handmaid. Po dopasowaniu głowicy do badanego narządu, ustabilizuj jej położenie. Gdy pozycja zostanie zabezpieczona, ustaw laser tak, aby rejestrował trzy obrazy co 30 s przez 20 min w celu wykrycia obecności przecieku kapilarnego.Wyłączenie lasera pomiędzy poszczególnymi pomiarami w celu ograniczenia blaknięcia kontrastu po zarejestrowaniu pięciosekundowych filmów w każdym z czterech kwadrantów badanego narządu, aby zwizualizować sieć naczyń włosowatych. Następnie, przy użyciu odpowiedniego oprogramowania, wykonuje się automatyczną segmentację naczyń na obrazach w oparciu o wybrany średnicę, aby określić funkcjonalną gęstość naczyń włosowatych, definiowaną jako stosunek całkowitej powierzchni naczyń do całkowitej powierzchni obrazu. Następnie, z dynamicznej akwizycji przeprowadzonej w celu wykrycia obecności przecieku z naczyń włosowatych, wyznacza się trzy obszary zainteresowania (ROI) w naczyniach włosowatych oraz trzy obszary zainteresowania w przestrzeni śródmiąższowej w punktach czasowych 0, 5, 10 i 20 minut. Na koniec oblicza się średnią intensywność sygnału w trzech różnych naczyniach włosowatych i przyległych obszarach śródmiąższowych, a następnie wyznacza procentowy indeks przecieku.Zgodnie z tym wzorem, gdzie IP to intensywność okoznaczyniowa lub śródmiąższowa, a II to intensywność wewnątrz naczyniowa, parametr funkcjonalnej gęstości naczyń kapilarnych jest markerem zastępczym gęstości mikronaczyniowej, zazwyczaj mierzonej za pomocą narzędzi patomorfologicznych. Tutaj przedstawiono przykład rodzajów uzyskanych obrazów oraz wynik segmentacji naczyń. W tym przykładzie funkcjonalna gęstość naczyń kapilarnych została zmierzona na poziomie 36%. Na tych obrazach pokazano przykład wycieku środka kontrastowego do śródmiąższu z indeksem wycieku 1,47 w 0, 5, 10 i 20 minutach po wstrzyknięciu.Na każdym z obrazów naczynia pojawiają się jako liniowe struktury o wysokim sygnale bezpośrednio po wstrzyknięciu. W przestrzeni śródmiąższowej nie obserwuje się sygnału. Z czasem można jednak zauważyć przesiąkanie środka kontrastowego do przestrzeni śródmiąższowej poprzez nieprawidłowy guz.Do opanowania tej procedury niezbędne jest doświadczenie w pracy z barierą śródbłonkową. Jednak po jej opanowaniu, technika ta może zostać wykonana w 30 minut, jeśli zostanie przeprowadzona prawidłowo.

in-vivo-imaging-tumor-angiogenesis-using-fluorescence-confocal

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

In vivo Obrazowanie angiogenezy nowotworowej z wykorzystaniem fluorescencyjnej mikroskopii wideokonfokowej

Przedstawiamy nowatorskie podejście do ilościowego określania lokalizacji nanocząsteczek w naczyniach krwionośnych ludzkich guzów ksenoprzeszczepionych z wykorzystaniem dynamicznego obrazowania intravitalnego w czasie rzeczywistym w modelu zarodka ptaka.

Ocena wychwytu nanocząsteczek w guzach w czasie rzeczywistym z wykorzystaniem obrazowania intravitalnego

Film demonstruje metodę obrazowania fluorescencyjnego do lokalizacji przeciwciał in vivo w modelu ksenoprzeszczepu guza myszy. Polega na wstrzyknięciu komórek nowotworowych myszy w celu wytworzenia solidnych ksenoprzeszczepów pod skórą. Późniejsze wstrzyknięcie przeciwciał fluorescencyjnych potwierdza specyficzną lokalizację poprzez wzmocnione sygnały fluorescencyjne w obrębie ksenoprzeszczepu guza.

Obrazowanie fluorescencyjne in vivo w celu zlokalizowania przeciwciał w mysim modelu ksenoprzeszczepu guza

Opisujemy metodę obrazowania odpowiedzi na leczenie przeciwnowotworowe in vivo i w rozdzielczości pojedynczej komórki.

Obrazowanie na żywo odpowiedzi na leki w mikrośrodowisku guza w mysich modelach raka piersi

Opisujemy nowatorską technikę obrazowania in vivo, która łączy fluorescencyjne chimeryczne myszy z oknami wewnątrzczaszkowymi i mikroskopią 2-fotonową o wysokiej rozdzielczości. Ta platforma obrazowania wspomaga badania dynamicznych zmian w tkance mózgowej i mikrokrążeniu na poziomie pojedynczej komórki, po patologicznych urazach i jest przystosowana do oceny wewnątrzczaszkowego dostarczania i dystrybucji leków.

Nowatorska technika obrazowania in vivo o wysokiej rozdzielczości do badania dynamicznej odpowiedzi struktur wewnątrzczaszkowych na wzrost guza i terapie

Opisujemy system wielokątowego rotacyjnego obrazowania optycznego (MAROI) do ilościowego oznaczania in vivo markera fluorescencyjnego dostarczanego przez nanopęcherzyki saposyny C (SapC)-dioleoilofosfatydyloseryny (DOPS). Wykorzystując mysie modele raka i zapalenia stawów, pokazujemy, w jaki sposób analiza krzywej sygnału MAROI może być wykorzystana do precyzyjnego mapowania i biologicznej charakterystyki procesów chorobowych.

In vivo (in vivo) Obrazowanie optyczne guzów mózgu i zapalenia stawów za pomocą fluorescencyjnych nanopęcherzyków SapC-DOPS

Macierz zewnątrzkomórkowa ulega znacznej przebudowie podczas gojenia się ran, stanów zapalnych i nowotworzenia. Przedstawiamy nowatorskie podejście do mikroskopii immunofluorescencyjnej przyżyciowej do wizualizacji dynamiki fibrylarnych, a także siatkowych składników matrycy z wysoką rozdzielczością przestrzenną i czasową przy użyciu mikroskopii epifluorescencyjnej lub dwufotonowej.

Długoterminowe przyżyciowe obrazowanie immunofluorescencyjne składników macierzy tkankowej z mikroskopią epifluorescencyjną i dwufotonową

Opisujemy tutaj metodę obrazowania opartego na światłowodowej konfokalnej mikroskopii fluorescencyjnej (FCFM), która zapewnia innowacyjny sposób zrozumienia zjawisk fizjologicznych na poziomie komórkowym i subkomórkowym u zwierząt.

Toksyczność naczyniowa wywołana chemioterapią - obrazowanie in vivo w czasie rzeczywistym upośledzenia naczyń krwionośnych

Ten protokół opisuje użycie mikroskopii wielofotonowej do wykonywania rozszerzonego obrazowania poklatkowego interakcji wielokomórkowych w czasie rzeczywistym, in vivo w rozdzielczości pojedynczej komórki.

Rozszerzone poklatkowe obrazowanie przyżyciowe dynamiki wielokomórkowej w czasie rzeczywistym w mikrośrodowisku guza

Ten protokół opisuje obrazowanie intrażyciowe transgenicznych myszy wykazujących ekspresję specyficznych dla komórek markerów fluorescencyjnych. Obrazowanie przyżyciowe zapewnia nieinwazyjną metodę obserwacji w wysokiej rozdzielczości u żywych zwierząt za pomocą wszczepialnych okien, przez które możliwa jest mikroskopowa wizualizacja procesów. Ta metoda jest szczególnie przydatna do badania procesów podłużnych.

Mikroskopia przyżyciowa naczyń krwionośnych związanych z nowotworem przy użyciu zaawansowanych komór okiennych grzbietowych fałdów skórnych na transgenicznych myszach fluorescencyjnych

Celem tej metody jest wygenerowanie in vivo modelu angiogenezy guza poprzez ksenografowanie komórek nowotworowych ssaków do zarodka danio pręgowanego, który ma fluorescencyjnie znakowane naczynia krwionośne. Obrazując ksenoprzeszczep i związane z nim naczynia, można uzyskać ilościowy pomiar odpowiedzi angiogennej.

Obrazowanie in vivo i kwantyfikacja odpowiedzi angiogennej gospodarza w ksenoprzeszczepach guza danio pręgowanego

Tłumaczenie wyników mikroskopii przyżyciowej jest utrudnione ze względu na jego płytką głębokość penetracji w tkanki. W tym miejscu opisujemy mysi model komory z oknem grzbietowym, który umożliwia jednoczesną rejestrację mikroskopii przyżyciowej i klinicznie stosowanych metod obrazowania (np. CT, MRI) w celu bezpośredniej korelacji przestrzennej, potencjalnie usprawniając kliniczne tłumaczenie wyników mikroskopii przyżyciowej.

Mysi model guza w komorze grzbietowego fałdu skórnego do połączonej mikroskopii przyżyciowej i obrazowania metodą rezonansu magnetycznego w translacyjnych badaniach nad rakiem

Poznaj metodę obrazowania angiogenezy guza za pomocą fluorescencyjnej wideomikroskopii konfokalnej. Technika ta pozwala ilościowo ocenić gęstość naczyń włosowatych i przepuszczalność ściany śródbłonka w modelu nowotworu jelita grubego myszy.

In vivo (in vivo) Obrazowanie angiogenezy guza za pomocą fluorescencyjnej wideomikroskopii konfokalnej

Przeglądaj więcej filmów