Name: Stała niedrożność naczynia mózgowego poprzez podwójne podwiązanie i przecięcie (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Poznaj metodę trwałej okluzji naczynia mózgowego u gryzoni poprzez podwójne podwiązanie i przecięcie. Technika zapewnia spójne obszary zawału przy ograniczonej śmiertelności zwierząt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez American Heart Association Predoctoral Fellowship 788808-41910, NIH-NINDS NS-066001 i NS-055832, oraz The Center for Hearing Research NIH Training Grant 1T32DC010775-01.

1. Wprowadzenie: Wymagane narzędzia chirurgiczne
Zobacz Rysunek 4
<ol>
	<li>Wiertarka dentystyczna (Kavo Dental Equipment, model: UMXL-TM), wiertarka 2-bitowa i wiertarka 3-bitowa</li>
	<li>Dwie igły podskórne o rozmiarze ~30</li>
	<li>Pęseta ząbkowana, opcjonalnie zakrzywiona końcówka (może być pomocna, ale nie jest niezbędna)</li>
	<li>Dwie pęsety z cienką końcówką</li>
	<li>przecinaki do drutu</li>
	<li>Nici do szwów</li>
	<li>Mikro nożyczki</li>
</ol>
2. Tworzenie okna chirurgicznego
<ol>
	<li>Znieczulenie: Procedury są zgodne z wytycznymi NIH i zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt UC Irvine. Obiektami doświadczalnymi są samce szczurów Sprague Dawley o wadze 295-400 g (Charles River Laboratories, Wilmington, MA, USA) i należy zastosować następującą procedurę znieczulenia:
	<ol>
		<li>Wstrzyknąć szczurowi dootrzewnowo bolus pentobarbitalu sodu (55 mg/kg m.c.), a następnie domięśniowo wstrzyknąć atropinę (0,05 mg/kg m.c.) w tylną nogę i podać podskórnie 3,0 ml 5% dekstrozy w wodzie.</li>
		<li>W razie potrzeby należy uzupełnić wstrzykiwania pentobarbitalu sodu (27,5 mg/kg mc.) w zastrzykach. Podaj okulistyczną maść z antybiotykiem do oczu, aby chronić rogówkę podczas poniższych zabiegów. Podawać 5% dekstrozy (3 ml) i atropinę (0,05 mg/kg m.c.) co sześć godzin, zmniejszając wydzielinę z dróg oddechowych podczas znieczulenia. Zmierz temperaturę ciała za pomocą sondy doodbytniczej i utrzymuj temperaturę ciała na poziomie 37 °C za pomocą samoregulującego koca termicznego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zlokalizuj konto MCA za pomocą jednej z następujących opcji:
	<ol class="lalpha">
		<li>Rozrzedzenie okienka obrazowego/wizualizacyjnego 2 x 2 mm nad korą somatosensoryczną za pomocą wiertła HP 3, aż czaszka stanie się prawie przezroczysta, a następnie przerzedzenie do pełnej przezroczystości za pomocą wiertła HP 2. Lokalizacja MCA może być następnie widoczna przez to okno, a jego proksymalna trajektoria służy do przybliżenia lokalizacji początkowego segmentu. MCA będzie na ogół przebiegać po przekątnej w poprzek tego okna w kierunku rostralnym do ogonowego/brzusznego do grzbietowego (na przykład od lewej do prawej/od dołu do góry, patrząc na lewą półkulę z punktu widzenia chirurga). Okno chirurgiczne można następnie utworzyć powyżej, gdzie obserwator szacuje, że segment M1 (proksymalny do rozgałęzienia korowego) jest zlokalizowany na podstawie dystalnych gałęzi widocznych przez pierwsze okienko. W celu zminimalizowania ilości czaszki, która jest usuwana w celu uzyskania dostępu do MCA, okienko obrazowania/wizualizacji powinno być umieszczone blisko, ale oddzielnie od okna chirurgicznego. 
		Lub</li>
		<li>Małe okienko chirurgiczne powinno być umieszczone około 3 mm przed i 1 mm bocznie do otworu owalnego lub nerwu żuchwowego, w pobliżu mównicy łukowej 30,33,34. Aby skutecznie uzyskać dostęp do trzpienia MCA (znanego również jako segment M1), mięsień skroniowy jest tymczasowo odbijany od powierzchni czaszki. (Uwaga: W przypadku długoterminowych operacji przetrwania, doświadczenie naszego laboratorium jest takie, że pozwalając mięśniowi skroniowemu pozostać przyczepionym na swojej kotwicy, mięsień ponownie wygrzewa się na powierzchni czaszki, umożliwiając zdrowe zachowania żywieniowe i skuteczne utrzymanie masy ciała.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Podążaj za MCA do rostralnego, brzusznego rogu okna obrazowania (jeśli używasz go jako odniesienia), aby oszacować, gdzie leży jego początkowa gałąź korowa.</li>
	<li>Utwórz nowy cienki obszar czaszki (nazywamy go oknem chirurgicznym) lekko rostralny i brzuszny do okna obrazowania (jeśli używasz go jako odniesienia), gdzie powinien znajdować się segment M1 (rozgałęzienie przedkorowe) MCA. WAŻNA UWAGA: Pozostaw około 2 mm odstępu między okienkiem obrazowania (jeśli używasz go jako odniesienia) a okienkiem chirurgicznym.</li>
	<li>Zlokalizuj trzon MCA (znany również jako segment M1) tuż przed rozgałęzieniem korowym tętnicy, jak pokazano na rysunkach 1A i 1B.</li>
	<li>Używając wiertła HP-3 o rozmiarze wiertła, rozcieńczyć czaszkę powyżej szacowanego położenia segmentu M1. Gdy czaszka stanie się nieco przezroczysta, zmień wiertło HP-2 o delikatniejszym rozmiarze i rozrzedź czaszkę, aż stanie się całkowicie przezroczysta. Potwierdź wizualnie, gdy obszar okna chirurgicznego staje się wystarczająco cienki, aby zobaczyć unaczynienie, i oceń położenie M1 w tym momencie i wypełnij okno tak, aby po obu stronach długości segmentu M1 było 2-3 mm (zapewnia to miejsce na wprowadzanie i wychodzenie igły do szwu po obu stronach MCA).</li>
</ol>
WAŻNA UWAGA: Przestań przerzedzać, gdy grubość czaszki jest zbliżona do grubości folii. Naczynie pęknie, jeśli wiertło przebije się przez czaszkę i oponę twardą. Z drugiej strony, jeśli czaszka nie jest wystarczająco cienka, usunięcie jej w celu okluzji będzie trudne i może spowodować uszkodzenie kory lub tętnicy.
<ol start="7">
	<li>Weź igłę podskórną o rozmiarze 30 G (30 G) i zegnij końcówkę igły za pomocą ząbkowanej pęsety.</li>
	<li>Za pomocą igły 30 G ostrożnie nakłuć czaszkę w miejscu, które nie znajduje się bezpośrednio nad tętnicą. Użyj tego otworu do nakłucia, aby pęseta mogła chwycić czaszkę i ostrożnie usunąć cienki obszar okna operacyjnego.</li>
	<li>Weź nową potrzebę 30 G, zegnij jej końcówkę jak w kroku 6 i ostrożnie wyjmij oponę twardą.</li>
</ol>
UWAGA: Przecięcie opony twardej spowoduje jej odklejanie się i MCA stanie się bardziej widoczne w wyniku zmniejszonego ciśnienia.
3. Wyłączanie MCA
<ol>
	<li>Użyj nożyc do drutu, aby przyciąć igłę do szwów odwróconych o połowie krzywizny (okrągła igła do szwów 3/8, 16 mm) do około 3-5 mm.</li>
	<li>Nawlecz przyciętą igłę do szwów, jak pokazano na rysunku na rysunku 4E. WAŻNA UWAGA: Ważne jest, aby igła była nawleczona tak, aby oba końce nici do szwów miały jednakową długość. Umożliwia to jednoczesne pociągnięcie obu końców nici pod M1, igłę można następnie odciąć, pozostawiając dwie długości nici, aby zawiązać dwa węzły wokół MCA.</li>
	<li>Użyj ząbkowanej pęsety, wsuń igłę do szwów pod M1. Wkładaj w odległości około 0,5-1 mm od MCA, pozostając tak płytko, jak to możliwe, aby zminimalizować uszkodzenie kory, ale unikając również zbyt dużego obciążenia MCA.</li>
	<li>Gdy igła do szycia wyjdzie z drugiej strony tak, że znajdzie się pod MCA, użyj pęsety z cienką końcówką (jak pokazano poniżej), aby pociągnąć końcówkę igły do szwów z przeciwnej strony, kontynuując karmienie lub popychanie drugiego końca igły do szwu za pomocą pęsety z ząbkowaną końcówką.</li>
	<li>Gdy igła do szycia zostanie całkowicie wsunięta pod MCA i wyciągnięta, kontynuuj ciągnięcie igły lub nici do szwów, aż długość nici będzie równa po obu stronach MCA. Naciskanie na nić podczas jej podawania w celu zminimalizowania obciążenia MCA może być pomocne w zapobieganiu pęknięciu, gdy nić przechodzi pod tętnicą.</li>
	<li>Przeciąć nić blisko igły do szycia.</li>
	<li>Użyj obu cienkich pęset, aby rozplątać dwie powstałe nitki szwu tak, aby pod MCA były dwie niezależne nitki, które się nie stykają. Idealnie, gwinty będą oddalone od siebie o około 1 mm w miejscu, w którym przechodzą pod MCA.</li>
	<li>Użyj obu cienkich końcówek pęsety, aby zawiązać dwa oddzielne węzły (dwie ligatury) z nitkami wokół MCA, starając się zachować tę ~1 mm przestrzeni między węzłami, aby zapewnić miejsce na przecięcie.</li>
</ol>
UWAGA: Jeśli pożądana jest wewnętrzna kontrola pozorowana, przygotuj okluzję, pozostawiając węzły okluzji luźne, tak aby w ogóle nie zwężały MCA i zbierz dane przed zaciśnięciem węzłów i przecięciem naczynia. Przytnij nić, aby zapobiec zaczepieniu się o cokolwiek przed okluzją, ale pozostaw wystarczająco dużo nici, aby umożliwić późniejsze zaciśnięcie węzłów. W ten sposób każde obrazowanie wyjściowe lub zbieranie danych może być wykonane z taką samą inwazją chirurgiczną jak okluzja, a węzły zacisnęły się w odpowiednim momencie z niewielkim opóźnieniem.
<ol start="9">
	<li>Gdy węzły zostaną mocno zaciągnięte, użyj mikronożyczek, aby przeciąć M1 między dwoma węzłami.</li>
	<li>W przypadku długoterminowych badań przeżycia:
	<ol class="lalpha">
		<li>Zszyj nacięty płat skóry głowy z powrotem na miejsce za pomocą sterylnej nici chirurgicznej lub zabezpiecz tkankę za pomocą sterylnych klipsów do ran.</li>
		<li>Antybiotyki należy podawać miejscowo w okolice rany (np. maść z bacytracyną) oraz ogólnoustrojowo poprzez profilaktyczne wstrzyknięcie ampicyliny (150 mg/kg mc. domięśniowo).</li>
		<li>Gdy pacjent jest nadal znieczulony, podaj okulistyczną maść z antybiotykiem do oczu.</li>
		<li>Podawać dodatkowo atropinę (0,05 mg/kg domięśniowo) w celu zmniejszenia wydzieliny z dróg oddechowych podczas znieczulenia. </li>
		<li>Wstrzyknąć megluminę fluniksyny (1,1 mg / kg) podskórnie po zakończeniu operacji i ponownie następnego ranka (~ 12 godzin później) w celu kontroli bólu.</li>
		<li>Umieść zwierzę na suchej, ciepłej, pochyłej powierzchni tak, aby nos zwierzęcia znajdował się nad ogonem na pochyłości (ułatwia to oddychanie, dopóki zwierzę się nie obudzi).</li>
		<li>Monitoruj zwierzę, dopóki się nie obudzi i nie będzie się bezpiecznie poruszać samodzielnie.</li>
		<li>Gdy zwierzę wróci do wiwarium, jego aktywność, wygląd, wokalizacja oraz zachowania związane z karmieniem i piciem powinny być codziennie monitorowane.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Eutanazja
<ol>
	<li>Na zakończenie każdego eksperymentu szczury należy poddać eutanazji pentobarbitalem sodu (2-3 ml dootrzewnowo).</li>
</ol>

<ol><li>Caplan, L. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCaplan%2C+LR+%22Caplan%27s+Stroke%2C+A+Clinical+Approach%22">Caplan's Stroke, A Clinical Approach</a>. , 4th edn, Saunder's & Elsevier. (2009).</li>
<li>Blumenfeld, H. Neuroanatomy Through Clinical Cases. , Sinauer Associates. (2002).</li>
<li>Roger, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Disease+and+Stroke+Statistics--2011+Update%3A+A+Report+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart Disease and Stroke Statistics--2011 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. , (2011).</li>
<li>Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathobiology+of+ischaemic+stroke%3A+an+integrated+view%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view.</a> Trends Neurosci. 22, 391-397 (1999).</li>
<li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+ischemic+stroke%3A+overview+of+major+experimental+rodent+models%2C+pathophysiology%2C+and+therapy+of+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Biochem.+Behav%22%5BJournal%5D)">Acute ischemic stroke: overview of major experimental rodent models, pathophysiology, and therapy of focal cerebral ischemia.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 87, 179-197 (2007).</li>
<li>Dietrich, W. D., Ginsberg, M. D., Busto, R., Watson, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+cortical+infarction+in+the+rat.+2.+Acute+and+subacute+alterations+in+local+glucose+utilization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced cortical infarction in the rat. 2. Acute and subacute alterations in local glucose utilization.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 6, 195-202 (1986).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Ann. Neurol. 17, 497-504 (1985).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%2C+I%3A+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Japanese Journal of Stroke. 8, 1-8 (1986).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li>
<li>Howells, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+strokes+for+different+folks%3A+the+rich+diversity+of+animal+models+of+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Different strokes for different folks: the rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 30, 1412-1431 (2010).</li>
<li>Trueman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Critical+Re-Examination+of+the+Intraluminal+Filament+MCAO+Model%3A+Impact+of+External+Carotid+Artery+Transection%5BTitle%5D)+AND+%22Transl.+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">A Critical Re-Examination of the Intraluminal Filament MCAO Model: Impact of External Carotid Artery Transection.</a> Transl. Stroke Res. 2, (2011).</li>
<li>Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDirnagl%2C+U+%22Neuromethods%22">Neuromethods</a>. Waiz, W. olfgang , Spring Science & Business Media. New York. (2010).</li>
<li>Cirstea, M. C., Levin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensatory+strategies+for+reaching+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Compensatory strategies for reaching in stroke.</a> Brain. 123 (Pt. 5), 940-953 (2000).</li>
<li>Nakayama, H., Jorgensen, H. S., Raaschou, H. O., Olsen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+age+on+stroke+outcome.+The+Copenhagen+Stroke+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The influence of age on stroke outcome. The Copenhagen Stroke Study.</a> Stroke. 25, 808-813 (1994).</li>
<li>Nudo, R. J., Plautz, E. J., Frost, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+adaptive+plasticity+in+recovery+of+function+after+damage+to+motor+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Role of adaptive plasticity in recovery of function after damage to motor cortex.</a> Muscle Nerve. 24, 1000-1019 (2001).</li>
<li>Chiganos, T. C., Jensen, W., Rousche, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+response+dynamics+during+focal+cortical+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological response dynamics during focal cortical infarction.</a> J. Neural Eng. 3, 15-22 (2006).</li>
<li>Traversa, R., Cicinelli, P., Bassi, A., Rossini, P. M., Bernardi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+motor+cortical+reorganization+after+stroke.+A+brain+stimulation+study+with+focal+magnetic+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mapping of motor cortical reorganization after stroke. A brain stimulation study with focal magnetic pulses.</a> Stroke. 28, 110-117 (1997).</li>
<li>Weber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+prediction+of+functional+recovery+after+experimental+stroke%3A+functional+magnetic+resonance+imaging%2C+electrophysiology%2C+and+behavioral+testing+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early prediction of functional recovery after experimental stroke: functional magnetic resonance imaging, electrophysiology, and behavioral testing in rats.</a> J. Neurosci. 28, 1022-1029 (2008).</li>
<li>Dirnagl, U., Kaplan, B., Jacewicz, M., Pulsinelli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+measurement+of+cerebral+cortical+blood+flow+by+laser-Doppler+flowmetry+in+a+rat+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Continuous measurement of cerebral cortical blood flow by laser-Doppler flowmetry in a rat stroke model.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 9, 589-596 (1989).</li>
<li>Wintermark, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+admission+perfusion+computed+tomography+and+qualitative+diffusion-+and+perfusion-weighted+magnetic+resonance+imaging+in+acute+stroke+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Comparison of admission perfusion computed tomography and qualitative diffusion- and perfusion-weighted magnetic resonance imaging in acute stroke patients.</a> Stroke. 33, 2025-2031 (2002).</li>
<li>Crafton, K. R., Mark, A. N., Cramer, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+understanding+of+cortical+injury+by+incorporating+measures+of+functional+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Improved understanding of cortical injury by incorporating measures of functional anatomy.</a> Brain. 126, 1650-1659 (2003).</li>
<li>Nudo, R. J., Eisner-Janowicz, I. Ch. 12. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNudo%2C+RJ+%22Reprogramming+the+Cerebral+Cortex%22">Reprogramming the Cerebral Cortex</a>. Lomber, S. tephen, Eggermont, J. os , Oxford Scholarship Online. (2006).</li>
<li>Davis, M. F., Lay, C. C., Chen-Bee, C. H., Frostig, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amount+but+not+pattern+of+protective+sensory+stimulation+alters+recovery+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Amount but not pattern of protective sensory stimulation alters recovery after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> Stroke. 42, 792-798 (2011).</li>
<li>Lay, C. C., Davis, M. F., Chen-Bee, C. H., Frostig, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+sensory+stimulation+completely+protects+the+adult+rodent+cortex+from+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mild sensory stimulation completely protects the adult rodent cortex from ischemic stroke.</a> PLoS One. 5, e11270(2010).</li>
<li>Lay, C. C., Davis, M. F., Chen-Bee, C. H., Frostig, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+sensory+stimulation+reestablishes+cortical+function+during+the+acute+phase+of+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mild sensory stimulation reestablishes cortical function during the acute phase of ischemia.</a> J. Neurosci. 31, 11495-11504 (2011).</li>
<li>Coyle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+young+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Middle cerebral artery occlusion in the young rat.</a> Stroke. 13, 855-859 (1982).</li>
<li>Risedal, A., Zeng, J., Johansson, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+training+may+exacerbate+brain+damage+after+focal+brain+ischemia+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Early training may exacerbate brain damage after focal brain ischemia in the rat.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 19, 997-1003 (1999).</li>
<li>Lay, C. C., Davis, M. F., Chen-Bee, C. H., Frostig, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+sensory+stimulation+protects+the+aged+rodent+from+cortical+ischemic+stroke+following+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association+Cardiovascular+and+Cerebrovascular+Disease%22%5BJournal%5D)">Mild sensory stimulation protects the aged rodent from cortical ischemic stroke following permanent middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of the American Heart Association Cardiovascular and Cerebrovascular Disease. , (2012).</li>
<li>Niiro, M., Simon, R. P., Kadota, K., Asakura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximal+branching+patterns+of+middle+cerebral+artery+%28MCA%29+in+rats+and+their+influence+on+the+infarct+size+produced+by+MCA+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Proximal branching patterns of middle cerebral artery (MCA) in rats and their influence on the infarct size produced by MCA occlusion.</a> J. Neurosci Methods. 64, 19-23 (1996).</li>
<li>Wang-Fischer, Y. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWang-Fischer%2C+Y+%22Manual+of+Stroke+Models+in+Rats%22">Manual of Stroke Models in Rats</a>. , CRC Press. 17-30 (2009).</li>
<li>Quinn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+rat%27s+to+human%27s+age%3A+how+old+is+my+rat+in+people+years%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition%22%5BJournal%5D)">Comparing rat's to human's age: how old is my rat in people years?</a> Nutrition. 21, 775-777 (2005).</li>
<li>Wei, L., Rovainen, C. M., Woolsey, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ministrokes+in+rat+barrel+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Ministrokes in rat barrel cortex.</a> Stroke. 26, 1459-1462 (1995).</li>
<li>Brint, S., Jacewicz, M., Kiessling, M., Tanabe, J., Pulsinelli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+brain+ischemia+in+the+rat%3A+methods+for+reproducible+neocortical+infarction+using+tandem+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+and+ipsilateral+common+carotid+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Focal brain ischemia in the rat: methods for reproducible neocortical infarction using tandem occlusion of the distal middle cerebral and ipsilateral common carotid arteries.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 8, 474-485 (1988).</li>
<li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat%3A+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1981).</li>
<li>Dittmar, M., Spruss, T., Schuierer, G., Horn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((External+carotid+artery+territory+ischemia+impairs+outcome+in+the+endovascular+filament+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">External carotid artery territory ischemia impairs outcome in the endovascular filament model of middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 34, 2252-2257 (2003).</li>
<li>Bederson, J. B., Germano, I. M., Guarino, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+blood+flow+and+cerebral+perfusion+pressure+in+a+new+noncraniotomy+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat.</a> Stroke. 26, 1086-1091 (1995).</li>
<li>Kuge, Y., Minematsu, K., Yamaguchi, T., Miyake, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nylon+monofilament+for+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Nylon monofilament for intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 26, 1655-1657 (1995).</li>
<li>Laing, R. J., Jakubowski, J., Laing, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.+Which+method+works+best%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Which method works best?</a> Stroke. 24, 294-297 (1993).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li>
<li>Schmid-Elsaesser, R., Zausinger, S., Hungerhuber, E., Baethmann, A., Reulen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+reevaluation+of+the+intraluminal+thread+model+of+focal+cerebral+ischemia%3A+evidence+of+inadvertent+premature+reperfusion+and+subarachnoid+hemorrhage+in+rats+by+laser-Doppler+flowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A critical reevaluation of the intraluminal thread model of focal cerebral ischemia: evidence of inadvertent premature reperfusion and subarachnoid hemorrhage in rats by laser-Doppler flowmetry.</a> Stroke. 29, 2162-2170 (1998).</li>
</ol>

Autorzy nie mają w tej chwili nic do ujawnienia.

Protokół ten został opracowany w celu wywołania niedokrwienia w korze gryzoni i zrobienia tego przy minimalnym wpływie obwodowym na osoby eksperymentalne. Metoda podwójnej okluzji i przecięcia pozwala na wizualne potwierdzenie, że naczynie zostało trwale zamknięte i może być wykonane bez nadmiernej inwazji lub uszkodzenia tkanek oraz z wysokim wskaźnikiem przeżycia. Ten protokół okluzji może być zastosowany do dowolnego naczynia korowego, do którego można uzyskać dostęp za pomocą kraniotomii w celu wywołania niedokrwieni...

W celu wywołania stanów niedokrwiennych, które skutecznie naśladują udar niedokrwienny u ludzi, szeroko stosuje się kilka zwierzęcych modeli udaru, co skutkuje różną objętością zawału. W modelu fotozakrzepowym mózg jest napromieniany przez nienaruszoną czaszkę za pomocą oświetlenia laserowego po dożylnym wstrzyknięciu substancji światłoczułej (takiej jak róża bengalska), co powoduje koagulację fotochemiczną, zablokowanie napromienianych naczyń i niedokrwienie otaczającej tkanki 6,7. Fotozakrzepica może powodować bardzo małe, izolowane obszary zawału i jest zwykle stosowana jako sposób modelowania "mini-udarów" lub "mikroudarów".
Powszechnie stosowaną techniką wywoływania udaru niedokrwiennego, szczególnie w tętnicy środkowej mózgu (MCA), jest monofilament śródświetlny model 8, w którym włókno jest chirurgicznie wprowadzane do tętnicy szyjnej zewnętrznej i rozwijane aż do momentu, gdy końcówka zatka podstawę MCA. Podstawowym wyzwaniem związanym z okluzją włókien śródświetlnych jest wysoka śmiertelność (70%, gdy MCA jest niedrożny przez 3 godziny, co jest odpowiednim punktem czasowym dla badań nad udarem) 9. Inne problemy związane z metodą obejmowały możliwy krwotok podpajęczynówkowy, niepełną okluzję i zmienną objętość zawału 10,11. Model ten powoduje rozległy stopień zawału zarówno w korze mózgowej, jak i podkorowo 12 i modeluje masywny udar u człowieka.
Chociaż zarówno modele mikro, jak i masowych uderzeń są ważne, ludzkie uderzenia zazwyczaj plasują się gdzieś pomiędzy. W dużych badaniach klinicznych zawał udaru waha się od 28-80 cm3, co przekłada się na 4,5-14% półkuli ipsi-ishemicznej 9. Dla porównania, wielkość zawału pMCAO u szczurów waha się od około 9 do 35 mm3, co stanowi od 3 do 12% półkuli ipsi-ishemicznej. Nasz model pMCAO jest zatem bardzo podobny do objętości ludzkiego zawału niedokrwiennego udaru mózgu pod względem procentu objętości mózgu.
Oprócz modelowania strukturalnych uszkodzeń spowodowanych udarem, pMCAO skutkuje deficytami funkcjonalnymi i behawioralnymi podobnymi do stanu ludzkiego. Skuteczny model udaru powoduje co najmniej deficyty ruchowe przeciwne do uszkodzenia po udarze 13-15, utratę lub zakłócenie funkcji motorycznych i czuciowych 16,17, utratę lub zakłócenie wywołanej aktywności neuronalnej 16,18, zmniejszenie przepływu krwi w mózgu 19,20 i zawał 21,22. W związku z tym nasze pMCAO modeluje poważną okluzję MCA skutkującą niepełnosprawnością fizyczną, utratą funkcji w korze czuciowej (i sąsiedniej korze), zakłóceniem aktywności neuronalnej, poważnym zmniejszeniem przepływu krwi MCA i zawałem - charakterystycznymi atrybutami udaru niedokrwiennego 23-25, służąc zatem jako skuteczny model udaru u człowieka.
Proceduralnie, pMCAO obejmuje małą kraniotomię, w której ostrożnie usuwamy czaszkę i oponę twardą z "okienka chirurgicznego" o wymiarach 2 x 2 mm nad początkowym (M1) segmentem MCA, tuż przed pierwotnym rozwidleniem MCA na przednią i tylną gałąź korową (Ryc. 1A i 1B). Przepuszczamy igłę do szwów i nić (jedwab 6-0) przez warstwę opon mózgowych, poniżej MCA i powyżej powierzchni kory mózgowej (patrz Tabela konkretnych odczynników i sprzętu do materiałów chirurgicznych niezbędnych do przeprowadzenia pMCAO). Następnie zawiązujemy podwójną ligatrę, zaciskamy dwa węzły wokół MCA i przecinamy naczynie między dwoma węzłami. Podwójna ligatura i przecięcie przez M1 zachodzi tuż dystalnie do rozgałęzienia soczewkowatego, tak że dotknięte są tylko gałęzie korowe MCA - w ten sposób występuje tylko zawał korowy (brak uszkodzenia podkorowego) 26,27 (ryc. 2). Chociaż udar u ludzi często wiąże się z zawałem podkorowym, modelowanie go u gryzoni wymaga zwiększonej inwazyjności (zamknięcie naczyń mózgowych przed rozgałęzieniem kory wymaga dostępu do tętnic przez tętnicę szyjną w szyi i wymaga dodatkowych okluzji) w technice i zwiększonej zmienności wielkości zawału. Opisany tutaj model nie może być wykonany bardziej proksymalnie, ponieważ dostęp do wcześniejszych gałęzi MCA nie jest możliwy za pomocą prostej kraniotomii. Chociaż chirurgicznie możliwe jest wywołanie zawału podkorowego za pomocą pMCAO, okluzja pociągnęłaby za sobą niezwykle inwazyjną procedurę i dlatego nie jest idealna.
Skuteczność okluzji można potwierdzić za pomocą laserowego Dopplera, laserowego obrazowania plamkowego 12,24,25 (Ryc. 3) lub histologicznie pośmiertnego (Ryc. 2). Należy zauważyć, że wcześniejsze badania wykazały, że stymulacja sensoryczna może odgrywać główną rolę w ewolucji i wyniku zawału; Zapewnienie ochrony przed uszkodzeniem po podaniu w ciągu 2 godzin od pMCAO i spowodowanie zwiększenia uszkodzeń spowodowanych udarem po podaniu po 3 godzinach od pMCAO 24,25,28. Potwierdziliśmy, że po 5 godzinach od pMCAO stymulacja nie ma już wpływu na wynik (dane niepublikowane). Dlatego stymulacja sensoryczna badanych powinna być zminimalizowana przez 5 godzin po pMCAO, aby uzyskać objętość zawału przy minimalnej zmienności. W związku z tym nasza grupa przeprowadza "nieleczone kontrole" tego typu, utrzymując szczury w znieczuleniu przez 5 godzin po pMCAO, w ciemności, z minimalną stymulacją sensoryczną i wyraźnie bez stymulacji wąsów.
Należy również zauważyć, że sporadyczne zmiany w strukturze MCA, w tym nadmierne rozgałęzienia, wiele głównych segmentów lub brak tętnic komunikacyjnych mogą wystąpić z częstotliwością od 10 do 30% u dorosłych samców szczurów Sprague Dawley 29,30. Jeśli zaobserwuje się nieprawidłowości w MCA, zaleca się, aby nie używać tego konkretnego tematu, ponieważ dodanie zwierząt z takimi nieprawidłowościami naczyniowymi zwiększy zmienność zawału.
Dodatkowo, istnieje kilka praktycznych aspektów naszej procedury, które sprawiają, że ta metoda okluzji jest korzystna dla badania udaru. Po pierwsze, szwy mogą być założone wokół tętnicy, ale nie dokręcane w celu uzyskania oceny wyjściowej, a następnie ocena po niedokrwieniu po podwiązaniu i przecięciu. W ten sposób przygotowanie chirurgiczne niezbędne do okluzji jest skutecznie kontrolowane u badanych. Ponieważ badani mogą pozostawać nieruchomi lub w stereotaktycznej ramie przez cały czas okluzji, możliwe jest przeprowadzenie eksperymentalnej oceny każdego pacjenta przed, w trakcie i po okluzji bez poruszania obiektem lub zakłócania jakiegokolwiek używanego sprzętu eksperymentalnego 25,28. Co więcej, procedura ta skutkuje bardzo niską śmiertelnością, nawet wśród starszych gryzoni w wieku 21-24 miesięcy (odpowiednik starszego człowieka) 31, a zatem może być wykorzystana do oceny leczenia udaru u szczurów, które bardziej odwzorowują najczęstszy przedział wiekowy osób cierpiących na udar 25,28. Przekrój statku służy również kilku praktycznym celom. Brak krwawienia po przecięciu potwierdza, że naczynie było całkowicie zamknięte w obu miejscach podwiązania. Dodatkowo przecięcie zapewnia trwałe zakłócenie przepływu krwi. Wreszcie, przecięcie zapewnia, że wszelki przepływ krwi wykryty w dystalnych częściach niedrożnego naczynia musi pochodzić z alternatywnego źródła.
Na koniec, chociaż szczegółowo opisujemy tę technikę okluzji dla MCA w tym manuskrypcie i filmie, ta sama technika podwójnej transsekcji ligatury może być zastosowana do każdego naczynia mózgowego, do którego można uzyskać dostęp za pomocą kraniotomii. Nasze laboratorium, na przykład, wykorzystało pMCAO w połączeniu z kilkoma dodatkowymi trwałymi okluzjami dystalnych gałęzi MCA w celu zablokowania zarówno pierwotnego, jak i pobocznego przepływu krwi 24 w sposób podobny do technik zaprojektowanych do selektywnego wywoływania niedokrwienia w obrębie pierwotnej kory somatosensorycznej 32.
Podsumowując, ta metoda trwałej okluzji zastosowana do MCA ściśle modeluje trzy podstawowe aspekty ludzkiego udaru niedokrwiennego: najczęstszą lokalizację (MCA), typ (niedokrwienie) i stopień uszkodzenia (zawał) związane z ludzką literaturą kliniczną dotyczącą udaru. Co więcej, ta metoda okluzji może być stosowana do jednego lub wielu miejsc okluzji w całym mózgu i może być przeprowadzana u osób w podeszłym wieku o wysokim wskaźniku przeżycia. Biorąc pod uwagę dynamiczny, trwały i stosunkowo nieinwazyjny charakter tej okluzji, technika ta stanowi dodatkowe narzędzie dla badaczy przedklinicznych oceniających nowatorskie podejścia do ochrony przed udarem mózgu i jego leczenia.

<table><tbody><tr><td>Bardzo cienkie kleszcze Graefe - końcówki 0,5 mm Lekka krzywizna (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11151-10</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Dumont #5 z powłoką ceramiczną (2)</td><td>Narzędzia do nauki o wysokiej</td> jakości <td>11252-50</td><td></td></tr><tr><td>Bardzo cienkie nożyczki do bonn, proste (1)</td><td>Narzędzia do nauki o naczyniu</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Okrągłe igły do szycia 3/8 (16 mm)</td><td>Narzędzia do nauki</td> o nauce <td>12050-02</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Pleciony jedwab Zszyj</td><td>narzędzia do nauki o NC9071061 <</td><td>br / > Aparat Harvarda nr:</td> igła 510461 <td></td></tr><tr><td>30 gauge i frac12; " długość</td><td>Narzędzia do nauki</td><td>NC9867376 Nr : ZT-5-030-5-L / COL</td><td></td></tr></tbody></table>

stała niedrożność naczynia mózgowego poprzez podwójne podwiązanie i przecięcie

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Udar mózgu jest główną przyczyną śmierci, niepełnosprawności i strat społeczno-ekonomicznych na całym świecie. Większość wszystkich udarów wynika z przerwania przepływu krwi (niedokrwienia) 1. Tętnica środkowa mózgu (MCA) dostarcza zdecydowaną większość krwi do bocznej powierzchni kory mózgowej 2, jest najczęstszym miejscem udaru mózgu u ludzi 3, a niedokrwienie na jej terytorium może prowadzić do rozległej dysfunkcji lub śmierci 1,4,5. Osoby, które przeżyły udar niedokrwienny, często cierpią z powodu utraty lub zaburzenia zdolności motorycznych, deficytów sensorycznych i zawału. Starając się uchwycić te kluczowe cechy udaru, a tym samym opracować skuteczne leczenie, duży nacisk kładzie się na zwierzęce modele niedokrwienia w MCA.
Tutaj prezentujemy metodę trwałego zamknięcia naczynia krwionośnego na powierzchni kory. Przedstawimy tę metodę na przykładzie odpowiedniej niedrożności naczyń, która modeluje najczęstszy typ, lokalizację i wynik udaru mózgu, stałą niedrożność tętnicy środkowej mózgu (pMCAO). W tym modelu chirurgicznie odsłaniamy MCA u dorosłego szczura, a następnie zamykamy go poprzez podwójne podwiązanie i przecięcie naczynia. To pMCAO blokuje proksymalną gałąź korową MCA, powodując niedokrwienie w całym terytorium kory MCA, dużej części kory. Ta metoda okluzji może być również stosowana do zamykania bardziej dystalnych części naczyń korowych w celu uzyskania bardziej ogniskowego niedokrwienia ukierunkowanego na mniejszy obszar kory. Podstawową wadą pMCAO jest to, że zabieg chirurgiczny jest nieco inwazyjny, ponieważ do uzyskania dostępu do MCA wymagana jest mała kraniotomia, chociaż powoduje to minimalne uszkodzenie tkanek. Podstawowymi zaletami tego modelu są jednak: dobrze zdefiniowane miejsce okluzji, stopień zmniejszenia przepływu krwi jest stały, upośledzenie funkcjonalne i neurologiczne występuje szybko, rozmiar zawału jest stały, a wysoki wskaźnik przeżycia pozwala na długoterminową ocenę przewlekłą.

Pomyślną okluzję naczynia można potwierdzić za pomocą obrazowania plamek laserowych (LSI) oraz innych technik obrazowania przepływu krwi. Przepływ krwi w głównych gałęziach korowych tętnicy środkowej mózgu (MCA) powinien spaść do poziomu ~25% wartości bazowej lub mniej po okluzji, w zależności od poziomu szumu w systemie rejestracji oraz czułości zastosowanej techniki. Przedstawione na Rysunku 3 reprezentatywne obrazy LSI pokazują odcinek gałęzi korowej MCA przed i po okluzji MCA. W przy...

Opisujemy wysoce powtarzalną metodę trwałego zamknięcia głównego naczynia krwionośnego mózgu gryzoni. Technikę tę można osiągnąć przy bardzo niewielkim uszkodzeniu obwodowym, minimalnej utracie krwi, wysokim wskaźniku długoterminowego przeżycia i stałej objętości zawału współmiernej do populacji klinicznej ludzi.

Stała niedrożność naczynia mózgowego poprzez podwójne podwiązanie i przecięcie

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest trwałe zamknięcie głównego naczynia mózgowego gryzonia. Osiąga się to poprzez wykonanie najpierw kraniotomii o wymiarach dwa na dwa milimetry powyżej naczynia. Następnie pod docelowym naczyniem i wokół niego przeprowadza się szew.Następnie wokół naczynia krwionośnego zawiązuje się dwie ligatury, a na koniec naczynie zostaje przekrojone pomiędzy węzłami szwu. W rezultacie można uzyskać redukcję przepływu krwi o wartość większą niż lub równą 75%, ocenioną za pomocą obrazowania laserowego speckle lub optycznej koherentnej tomografii. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak metoda okluzji monofilamentem, jest możliwość uzyskania spójnych obszarów zawału w korze kory mózgu gryzonia, ograniczona zmienność wielkości zawału oraz niska śmiertelność badanych osobników.Implikacje tej techniki rozciągają się na diagnostykę i leczenie udaru, ponieważ nowe terapie mogą być oceniane w fazie ostrej oraz w trakcie rekonwalescencji u tych samych osobników. W celu przygotowania do operacji, należy wykorzystać sterylizator szklany do wysterylizowania następujących narzędzi: wiertarki stomatologicznej z wiertłami o rozmiarach 2 i 3, dwóch igieł hipodermicznych o rozmiarze 30 G, pęsety ząbkowanej, dwóch pęset z cienkimi końcówkami, nożyczek do cięcia wstecznego w kształcie półkrzywej, obcinaczy do drutu igieł chirurgicznych, nici chirurgicznych oraz mikronożyczek.Po znieczuleniu szczura rasy Sprague Dawley, zgodnie z metodą zatwierdzoną przez komisję ds. opieki i wykorzystania zwierząt w Twojej instytucji, wprowadź sondę rektalną w celu pomiaru temperatury ciała i umieść szczura na samoregulującym kocu termicznym. Następnie umieść igłę o rozmiarze 26 G w wiertarce stomatologicznej. Aby uzyskać dostęp do tętnicy środkowej mózgu (MCA), użyj kleszczyków hemostatycznych do tymczasowego odsunięcia mięśnia skroniowego od powierzchni czaszki.Po zlokalizowaniu MCA, należy użyć wiertła do wykonania niewielkiego okna chirurgicznego, około trzech milimetrów przed i jednego milimetra bocznie od foramen ovale lub nerwu żuchwowego. Należy zbliżyć się do arch rostrum, aby oszacować położenie gałęzi korowej M c, i śledzić ją do rostralno-brzusznego narożnika okna obrazowania. Następnie należy stworzyć cienki region czaszki, nieco rostralnie i brzusznie względem okna obrazowania, w miejscu, gdzie segment M1 MCA powinien wypływać, pozostawiając niemal dwumilimetrową przerwę między oknem obrazowania a oknem chirurgicznym.Używając wiertła o rozmiarze trzy, należy odchudzić czaszkę nad szacowaną lokalizacją segmentu M1. Gdy czaszka stanie się częściowo przezroczysta, należy przejść na delikatniejsze wiertło o rozmiarze dwa i dalej odchudzać czaszkę. Należy kontynuować ten proces, aż czaszka będzie całkowicie przezroczysta, a jej grubość będzie zbliżona do grubości folii spożywczej.Następnie, używając pęsety ząbkowanej, zagnij końcówkę igły o rozmiarze 30 G i za pomocą igły ostrożnie przebij czaszkę w obszarze, który nie znajduje się bezpośrednio nad tętnicą. Następnie wykorzystaj otwór jako punkt wprowadzenia pęsety. Aby ostrożnie usunąć cieńsze okno chirurgiczne, użyj nowej igły o rozmiarze 30 G i delikatnie usuń oponę twardą, co sprawi, że MCA stanie się bardziej widoczna w wyniku zmniejszenia ciśnienia.Następnie zlokalizuj pień MCA lub segment M1. MCA będzie odróżnialna od często towarzyszących jej żył jako naczynie o jaśniejszym czerwonym kolorze. Potwierdź, że odsłoniłeś MCA tuż przed rozgałęzieniem korowym tętnicy, tak jak pokazano tutaj.Oceń położenie M1 i upewnij się, że okno ma dwa do trzech milimetrów po obu stronach długości segmentu M1. Aby zamknąć tętnicę środkową mózgu, użyj obcinaczek do drutów, aby przyciąć igłę do szwów o połowy krzywizny i odwróconym cięciu do długości około trzech do pięciu milimetrów. Przewlecz przyciętą igłę, upewniając się pod mikroskopem chirurgicznym, że oba końce nici są równej długości.Następnie, używając pęsety ząbkowej, wsuń igłę chirurgiczną pod M1 w odległości około 0,5 do 1 mm od MCA, tak płytko, jak to możliwe, aby zminimalizować uszkodzenia kory, nie napinając przy tym MCA, i jednocześnie prowadząc oraz podając igłę pod MCA za pomocą pęsety ząbkowej. Użyj pęsety z cienką końcówką, aby wyciągnąć igłę z przeciwnej strony. Gdy igła całkowicie przejdzie pod MCA, kontynuuj wyciąganie nici w połowie długości, jednocześnie ją dociskając.Aby zminimalizować naprężenia tętnicy, przetnij nitkę blisko igły chirurgicznej obiema pęsetami z cienkim końcem, tak aby powstały dwie niezależne nitki w odstępie około jednego milimetra. Zawiąż dwa oddzielne węzły wokół MCA, zachowując między nimi odstęp około jednego milimetra po ich mocnym zaciśnięciu. Używając mikronožyczek, przetnij M1 pomiędzy tymi dwoma węzłami.Po pomyślnym przecięciu MCA należy utrzymywać zwierzęta w stanie sedacji, zapewnić im ciepło oraz ciche otoczenie przez okres pięciu godzin, aby zapobiec wystąpieniu ochrony przed udarem wywołanej stymulacją. Po potwierdzeniu skuteczności okluzji za pomocą obrazowania laser speckle lub innej techniki obrazowania, zwierzę pozostawia się do wybudzenia z anestezji, a następnie podaje mu antybiotyki i leki przeciwbólowe. Uszkodzenia wskutek udaru rozwiną się w ciągu 24 do 48 godzin.Pomyślną okluzję naczynia można potwierdzić, stosując techniki obrazowania przepływu krwi, takie jak obrazowanie plamek laserowych (laser speckle imaging) lub LSI; przedstawione tutaj obrazy LSI są reprezentatywne. Są to obrazy fragmentu gałęzi korowej tętnicy środkowej mózgu (MCA) przed i po okluzji MCA. Przepływ krwi w głównych gałęziach korowych MCA po okluzji powinien spaść do około 25% wartości bazowej lub mniej, w zależności od poziomu szumów w systemie rejestracji i czułości techniki. Gdy opisana technika okluzji zostanie zastosowana do odcinka M1 MCA, blokując wszystkie korowe gałęzie MCA i zapobiegając stymulacji sensorycznej, wynikiem po trwałej okluzji i pięciu godzinach bez stymulacji jest zawał korowy o objętości 28,4 ± 2,4 mm³.Po opanowaniu ta technika może zostać wykonana w 20 minut lub krócej. Po zastosowaniu tej procedury można wykorzystać szereg innych technik, takich jak obrazowanie funkcjonalne, obrazowanie laserowego obrazu plamkowego (laser speckle imaging) oraz rejestracja neuronalna, aby odpowiedzieć na pytania dotyczące np. stanu funkcjonalnego i strukturalnego kory po okluzji.

permanent-cerebral-vessel-occlusion-via-double-ligature

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przetrwale zatorowe naczynia mózgowe poprzez podwójne związanie i przecięcie

Ten film przedstawia procedurę wykonywania trwałej dystalnej niedrożności tętnicy środkowej mózgu lub MCAO z tętnicą szyjną wspólną lub podwiązaniem CCA u starszych szczurów w celu modelowania udaru niedokrwiennego. Blokuje to przepływ krwi do mózgu, prowadząc do śmierci neuronów i generowania modelu do badania mechanizmów udaru i potencjalnych metod leczenia.

Wywoływanie niedokrwienia poprzez niedrożność środkowej części mózgu i tętnicy szyjnej wspólnej w modelu szczurzym

Źródło: Larpthaveesarp, A., et. al. Przemijający model niedrożności tętnicy środkowej mózgu udaru noworodka u szczurów P10. J. Vis. Exp. (2017)Ten film pokazuje ustanowienie modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu u szczeniaka szczura. Tętnica szyjna wewnętrzna (ICA) jest odsłonięta, a ligatura jest zabezpieczona, aby ograniczyć napływ krwi. Okluda jest wprowadzana przez ICA, aby dotrzeć do tętnicy środkowej mózgu. Szczenię może następnie dojść do siebie przed dalszą analizą.

Generowanie niedrożności tętnicy środkowej mózgu u szczeniaka szczura w celu wywołania lokalnego niedokrwienia mózgu

Ten protokół opisuje powtarzające się wstępne kondycjonowanie hipoksyjne, czyli krótkie ekspozycje na niedotlenienie ogólnoustrojowe, które zmniejszają objętość zawału i zaburzenie bariery krew-mózg po przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy. Szczegółowo opisano również podwójną kwantyfikację objętości zawału i przerwania bariery krew-mózg po udarze, aby ocenić skuteczność ochrony nerwowo-naczyniowej.

Kwantyfikacja ochrony nerwowo-naczyniowej po powtarzającym się kondycjonowaniu wstępnym hipoksyjnym i przejściowym zamknięciu tętnicy środkowej mózgu u myszy

Tutaj prezentujemy protokół do trwałego zamknięcia dystalnej tętnicy środkowej mózgu u starszych samic szczurów z jednoczesnym zamknięciem tętnic szyjnych w celu wygenerowania dużych zawałów korowych i utrzymujących się deficytów. Pokazujemy potwierdzenie wielkości zmiany za pomocą strukturalnego rezonansu magnetycznego po 24 godzinach i 8 tygodniach po udarze.

Wykonywanie stałej dystalnej środkowej części mózgu z niedrożnością tętnicy szyjnej wspólnej u starszych szczurów w celu zbadania niedokrwienia kory mózgowej z trwałą niepełnosprawnością

Udar noworodkowy jest istotną przyczyną wczesnego uszkodzenia mózgu, wymagającym modelu translacyjnego ze spójnymi wzorcami urazów ogniskowych i wysoką odtwarzalnością, aby umożliwić badanie. W pracy opisano szczegółową procedurę chirurgiczną mającą na celu stworzenie niekrwotocznego, jednostronnego ogniskowego uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego u gryzoni o długości równoważnej.

Przemijający model niedrożności tętnicy środkowej mózgu udaru noworodka u szczurów P10

Ogólnym celem tej procedury jest dostarczenie wysoce powtarzalnej techniki oceny in vivo naruszenia bariery krew-mózg w szczurzych modelach udaru niedokrwiennego.

Ocena in vivo przerwania bariery krew-mózg w szczurzym modelu udaru niedokrwiennego

Mysi model niedokrwienia i reperfuzji mózgu został stworzony w celu zbadania patofizjologii udaru. Podwiązujemy dystalnie prawą środkową tętnicę mózgową i prawą tętnicę szyjną wspólną i przywracamy przepływ krwi po 10 lub 40 minutach niedokrwienia.

Mysi model zamknięcia dwóch naczyń niedokrwienia mózgu-reperfuzji

Ten protokół opisuje model przejściowego ogniskowego niedokrwienia mózgu u myszy poprzez śródświetlne zamknięcie środkowej tętnicy mózgowej. Dodatkowo przedstawiono przykłady oceny wyników z wykorzystaniem rezonansu magnetycznego i testów behawioralnych.

Przejściowy model niedrożności tętnicy środkowej mózgu

Ten protokół opisuje proces przygotowania do reperfuzji niedrożności tętnicy środkowej mózgu przez tętnicę szyjną wspólną.

Zmodyfikowany model preparatu do reperfuzji niedrożności tętnicy środkowej mózgu

Ten protokół opisuje proces wywoływania modelu śpiączki niedokrwiennej mózgu przy użyciu zmodyfikowanej metody okluzji czterech naczyń.

Model śpiączki niedokrwiennej mózgu wywołany zmodyfikowaną okluzją czterech naczyń

Poznaj metodę trwałej okluzji naczynia mózgowego u gryzoni poprzez podwójne podwiązanie i przecięcie. Technika zapewnia spójne obszary zawału przy ograniczonej śmiertelności zwierząt.

Stała niedrożność naczynia mózgowego poprzez podwójne podwiązanie i przecięcie

Przeglądaj więcej filmów