Przeszczep do przedniej komory oka w celu podłużnego, nieinwazyjnego obrazowania in vivo z rozdzielczością pojedynczej komórki w czasie rzeczywistym

Cześć, nazywam się Doretta i pracuję w Instytucie Badań nad Cukrzycą w Miller School of Medicine na Uniwersytecie w Miami. W tym filmie pokażę, jak przeszczepić oczka trzustki do wewnętrznej komory oka myszy. Procedura składa się z dwóch etapów.

Pierwszym krokiem jest umieszczenie izolowanych oczek trzustki do kaniuli, a drugim krokiem jest właściwa procedura przeszczepu. Szczegółowe informacje na temat oprzyrządowania i odczynników można znaleźć w załączonym tekście. Podkreślamy tutaj zmotoryzowany sterownik strzykawki z zamontowaną strzykawką oraz nasadkami zbiornika i kaniuli, na których skupimy się w poniższym filmie.

Zaczynamy od załadowania oczek do kaniuli. Wszystkie zabiegi wykonywane są pod stereoskopem. Zacznij od wyśrodkowania oczek, obracając lub obracając naczynie w kółko.

Po wyśrodkowaniu odłącz kaniulę od zbiornika i wypłucz wszelkie pęcherzyki powietrza, popychając zmotoryzowany sterownik strzykawki do przodu. Odbywa się to poprzez naciśnięcie przedniego pedału nożnego. Gdy będziesz gotowy, zacznij zasysać oczka do zbiornika, kierując teraz zmotoryzowany sterownik strzykawki w kierunku wstecznym.

I znowu, odbywa się to poprzez naciśnięcie pedału nożnego do tyłu. Zwróć uwagę, jak oczka mają tendencję do gromadzenia się na dnie zbiornika. Następnie ponownie podłącz kaniulę do zbiornika i wysuń oczka ze zbiornika.

Następnie rurkę do kaniuli, aby usunąć oczka ze zbiornika i zachęcić je do pozostania zapakowanymi w rurce. Postukaj w zbiornik, przesuwając zmotoryzowany sterownik strzykawki do przodu. Zwróć uwagę, jak upakowane są oczka w rurce, gdy zaczynają wchodzić z tyłu kaniuli.

Do tej pory powinieneś być gotowy do przeszczepienia oczek. Umieść mysz w rozmiarze NS na podkładce i odsłoń lub wysuń oko, które ma zostać przeszczepione, ciągnąc za skórę głowy palcem wskazującym i kciukiem. Używanie nowej igły jako skalpela.

Zbliż się do oka ze skośnym końcem skierowanym w dół, aby zapobiec kontaktowi i obrażeniu tęczówki. Wbić końcówkę igły do rogówki i wykonać boczne nacięcie. Następnie wprowadź kaniulę, wstępnie załadowaną powiekami, do wewnętrznej komory przez nacięcie i zacznij ponownie wdmuchiwać oczka do komory, napędzając zmotoryzowany sterownik strzykawki do przodu.

Nie martw się o pęcherzyki powietrza, które mogą zostać uwięzione wewnątrz kaniuli, ponieważ później się rozproszą. I będą działać jako naturalna bariera, która zminimalizuje lub zapobiegnie wydostawaniu się powiek z komory. Powoli i ostrożnie wyjmij kaniulę z komory wewnętrznej.

Teraz przemyj oko sterylnym PBS. Wstrzyknij preferowany środek przeciwbólowy, a na koniec nałóż maść z antybiotykiem okulistycznym. Przeszczep jest zakończony.

Teraz pokazujemy reprezentatywne wyniki dotyczące powiek trzustkowych przeszczepionych do wewnętrznej komory oka. Do badań obrazowania podłużnego poszczególnych oczek w siódmym dniu. Po przeszczepie oczka są wyraźnie wszczepione na szczycie tęczówki do 28 dnia.

Oczka znajdują się w tych samych miejscach, co wcześniej 42 dni po przeszczepie. Oczka są wyraźnie widoczne w tych samych miejscach. Zwróć również uwagę na to, jak dobrze zagoiło się nacięcie, co wyklucza jakąkolwiek możliwość ingerencji w obrazowanie poszczególnych oczek.