Metody wykonywania krzyżówek w Setaria viridis, nowym systemie modelowym dla traw

Ogólnym celem tej procedury jest pokazanie, jak wykonywać krzyże dla cter verus nowego systemu modelowego dla traw. Osiąga się to poprzez najpierw wybranie, przycięcie i oznaczenie szczytu. Drugim krokiem jest wykastrowanie przyciętej wiechy poprzez zanurzenie jej w kąpieli wodnej o temperaturze 48 stopni Celsjusza.

Następnie przycięty szczyt jest używany jako samica do zapylania przez szczyt, który zrzuca pyłek. Ostatnim krokiem jest zbiór nasion dwa tygodnie po zapyleniu krzyżowym. Ostatecznie, barwienie Gusem domniemanych nasion hybrydowych służy do pokazania skuteczności tej techniki.

Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak fizyczna kastracja, jest to, że jest mniej inwazyjna i stosunkowo łatwa do ustalenia w laboratorium. Metoda ta pomoże przyspieszyć przyjęcie cter verus jako modelu genetycznego, ułatwiając wykonywanie krzyżówek. Aby rozpocząć, wyjmij jedną komórkę do podlewania, a następnie napełnij tacę czterema na dziewięć komórek Za pomocą metro Mix 360.

Następnie lekko spryskaj komórki i wysiewaj nasiona na powierzchni gleby, po jednym nasionku na komórkę. Następnie przykryj nasiona warstwą gleby, spryskaj powierzchnię gleby spryskaniem o grubości 0,5 centymetra, aby je zwilżyć, a następnie woda spłaszcza się od dołu. Podlewaj komórki od dołu raz do dwóch razy dziennie po wysianiu nasion, uważając, aby nie przelać wody.

Ustaw warunki w komorze wzrostowej na 31 stopni Celsjusza w ciągu dnia i 22 stopnie Celsjusza w nocy z zabiegiem preda 15 stopni Celsjusza od 8:30 do 9:00. Utrzymuj również 12-godzinny harmonogram światła i ciemności i ustaw wilgotność względną na 50%W tych warunkach. Satter verus a 10.1 kwitnie od 21 do 22 dni od wysiewu nasion. Idealnie, kastracja jest wykonywana po południu lub wieczorem.

Wybierz główny pentakl na każdej roślinie, która ma od jednego do pięciu kwitnących kwiatów. Następnie odetnij końcówkę pentaklu i usuń wszystkie kwiaty w dolnej części bliższej części środkowej i podstawowej za pomocą cienkich kleszczy. Jeśli ma tylko jeden, od 10 do jednej piątej kwitnących kwiatów.

Aby zachować dolną część dystalną, środkową i górną część bliższego środka do dalszego przycinania, odetnij końcówkę i przytnij kwiaty od podstawy wiechy. Jeśli wiecha ma od jednej czwartej do połowy kwitnących kwiatów, zachowaj bliższą część środkową do dalszego przycinania i odetnij dystalną środkową część. Po przecięciu pentaklu użyj nożyczek chirurgicznych, aby lekko przyciąć włosie.

Zadbaj o zachowanie włosia w regionie, który będzie zapylany, aby chronić różyczki przed ewentualnymi uszkodzeniami cieplnymi. Dla każdego kłoska zachowaj najwyższą dojrzałą różyczkę. Najwyższa różyczka będzie miała większe prawdopodobieństwo wystąpienia anozy w momencie zapylenia.

Następnie usuń wszystkie kwiaty, które zakwitły i wszystkie niedojrzałe kwiaty, pozostawiając około 20 do 30 kwiatów na szczyt, które są równomiernie rozłożone. Następnie zaznacz jedną stronę każdego kwiatu czerwonym markerem permanentnym. I zapisz liczbę różyczek na szczycie, oznacz szczyt z następującymi informacjami, datą kastracji, czasem trwania i temperaturą, w której kastracja jest wykonywana.

Po przycięciu wiechy usuń wszystkie krzewy z każdej rośliny, aby zapewnić realokację większej ilości zasobów na rozwój głównego szczytu. Na godzinę przed kastracją należy ustawić łaźnię wodną na 48 stopni Celsjusza do obróbki cieplnej. Po podgrzaniu delikatnie zegnij przycięte pentakle i zanurz po trzy do czterech na raz w ciepłej wodzie na trzy do sześciu minut.

Zachowaj ostrożność, aby nie złamać trzonu pentaklu. Liść flagi, który znajduje się pod pentaklem, nie powinien mieć kontaktu z ciepłą wodą. Ma to na celu zapobieżenie uszkodzeniom termicznym tkanki liści.

Po wykastrowaniu przez żądany czas usuń wiechy z łaźni wodnej i delikatnie strząśnij wodę z wiechy. Następnie całkowicie przykryj wykastrowaną wiechę spersonalizowaną torbą na chleb z mikroperforacją i zabezpiecz ją opaską zaciskową. Mikroperforowane torebki na chleb można dostosować do wielkości wiechy.

Na koniec umieść rośliny z powrotem w komorze wzrostowej do następnego dnia. O 9:00 rano drugiego i trzeciego dnia przenieś wykastrowanych rodziców płci żeńskiej i niewykastrowanych mężczyzn z komory wzrostowej do laboratorium, aby wykonać krzyżówki, obserwować i dodawać kolejną czerwień. do kwiatów, które zakwitły lub kwitną.

Za pomocą czerwonego markera permanentnego zapisz całkowitą liczbę kwitnących kwiatów na wiechę. Następnie zapisz datę zapylenia i imię męskiego rodzica na etykiecie, aby śledzić, jakie krzyżówki zostały wykonane. Obserwuj szczytowy czas antytezy u męskich rodziców w naszych warunkach laboratoryjnych, kwiaty na pentaklach męskiego rodzica zaczynają się synchronicznie otwierać około godziny 10:10 Po otwarciu całkowity wysiłek pylnika i uwolnienie pyłku nastąpi po 20 minutach.

Rozpocznij zapylanie natychmiast po zażółceniu. Białe pylniki są widoczne na kwiatach męskiego rodzica. Zapylanie przeprowadza się w drugim i trzecim dniu za pomocą wiechy do zapylania wiechy lub pylnika do zapylania stygmatyzacji.

Używając jednej oderwanej wiechy, gdy samiec delikatnie pociera wiechę razem z wykastrowaną wiechą, aby ułatwić zapylanie i wyrzuć męską wiechę, aby uniknąć zanieczyszczenia, powtarzaj proces zapylania, aż każdy wykastrowany szczyt zostanie zapylony przez dwa do trzech pentakli. Najskuteczniejszą metodą jest pylenie przeciwstygmatyzacyjne za pomocą kleszczy. Wybierz kwiat, który kwitnie z żółtawo-białymi pylnikami lub zbierz pylniki i fizycznie dotknij znamienia kwiatu na żeńskim rodzicu.

Użyj jednego kwiatu od męskiego rodzica, aby zapylić jeden kwiat na wykastrowanej wiechy między zapyleniami różnych męskich rodziców. Zanurz kleszcze w 95% etanolu, a następnie przetrzyj chusteczkami Kim, aby uniknąć zanieczyszczenia spowodowanego przenoszeniem pyłku między różnymi krzyżówkami. Po wykonaniu zapylenia przykryj wiechę matki spersonalizowaną torbą na chleb z mikroperforacją i zabezpiecz ją u podstawy za pomocą opaski zaciskowej.

Po zapyleniu do zbioru nasion należy zebrać nasiona od 14 do 16 dni po dniu zapylenia i umieścić przywieszkę w tej samej kopercie co nasiona. Nasiona z czerwonymi znaczeniami po obu stronach reprezentują nasiona, które powstały w wyniku kontrolowanej krzyżówki genetycznej. Wyrzuć wszystkie nasiona bez czerwonych oznaczeń, ponieważ reprezentują one nasiona, które powstają z nowo rozwiniętych kwiatów.

Po wykastrowaniu nasiona z czerwonymi znaczeniami, tylko z jednej strony będą prawdopodobnie reprezentować nasiona powstałe w wyniku samozapylenia. Na koniec susz nasiona w temperaturze 30 stopni Celsjusza przez dwa dni. Przechowuj suszone nasiona w laboratorium lub najlepiej w komorze nasiennej.

Gdy będziesz gotowy do dalszej analizy, usuń fizy, jeśli to konieczne. Metody opisane w tym filmie były wynikiem licznych prób wykorzystujących różne temperatury i czasy leczenia w celu optymalizacji procesu kastracji. Sukces tego procesu mierzono liczbą uzyskanych nasion hybrydowych.

Sześć nasion z jednego z krzyżówek testowych, w których rodzic płci męskiej niósł reportera. Kodowanie genów dla beta glukuronidazy przedstawiono tutaj. Gen reporterowy powoduje, że nasiona zmieniają kolor na niebieski po zabarwieniu, dzięki czemu liczba nasion hybrydowych jest łatwa do policzenia Po opanowaniu można przekroczyć nawet 15 pentakli dziennie, jeśli procedura zostanie wykonana prawidłowo.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonywać krzyże w Aria verus.