Procedura mająca na celu zbadanie wpływu długotrwałego ograniczenia pokarmowego na poszukiwanie heroiny u szczurów abstynentów

Opisana jest procedura, która pozwala na demonstrację solidnego wspomagania poszukiwania narkotyków u szczurów z ograniczeniami żywieniowymi. Po szkoleniu w zakresie samodzielnego podawania heroiny, szczury przechodzą przez okres abstynencji w środowisku wolnym od narkotyków, podczas którego są łagodnie ograniczane w jedzeniu. Poszukiwanie narkotyków jest następnie testowane w środowisku związanym z narkotykami.

Ogólnym celem tej procedury jest zbadanie wpływu manipulacji środowiskowych, takich jak chroniczne ograniczanie pokarmu, na nawrót poszukiwania heroiny w laboratoriach w warunkach odstawienia. Osiąga się to poprzez najpierw chirurgiczne wprowadzenie cewnika dożylnego do żyły szyjnej szczura, aby umożliwić samodzielne podanie heroiny po okresie rekonwalescencji. Szczury są szkolone do samodzielnego podawania heroiny w komorach kondycjonowania instrumentalnego przez okres 10 dni.

Kolejnym etapem procedury jest faza abstynencji, w której szczury są transportowane do obiektu dla zwierząt i poddawane okresowi ograniczonego lub nieograniczonego dostępu do pożywienia. Na koniec szczury są wracane do komór kondycjonowania instrumentalnego, aby przejść test poszukiwania heroiny, w którym reakcje na dźwignię upośledzoną heroiną skutkują aktywacją sygnału, światła i tonu przy braku dostarczania heroiny. Ostatecznie, szczury z chronicznym ograniczeniem żywności Z historią heroiny, samodzielne podawanie będzie wykazywać silny wzrost poszukiwania heroiny w warunkach odstawienia, wynikający z ponownego narażenia na środowisko przyjmowania narkotyków i sygnałów związanych z narkotykami.

Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi metodami, takimi jak procedura przywracania, jest brak wyraźnego wygaszania instrumentalnego, które nie jest obserwowane w kondycji ludzkiej. Co więcej, stosowanie przewlekłych i ostrych manipulacji pozwala na większą trafność konstrukcji w odniesieniu do kondycji ludzkiej. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie uzależnienia od narkotyków, takie jak powszechne mechanizmy neurologiczne leżące u podstaw zachowań związanych z poszukiwaniem narkotyków i jedzenia.

Cewniki są przygotowywane luzem i sterylizowane w autoklawie do użytku przez długi czas. Aby skonstruować cewnik, najpierw tnie elastyczną rurkę na kawałki o długości 12 centymetrów. Użyj wykałaczki lub igły o rozmiarze 18, aby umieścić małą kroplę silikonu wokół cewnika w odległości trzech centymetrów od końcówki.

Pozostaw silikon do wyschnięcia na 24 godziny przed autoklawowaniem, zegnij długą rurkę kaniuli z pięcioma otworami, która posłuży jako łącznik pod kątem prostym do plastikowego cokołu przed autoklawowaniem. Aby założyć cewniki w dniu operacji, należy przesunąć dłuższy bok rurki scholastycznej nad wygiętą metalową rurką kaniuli z pięcioma otworami mniej więcej w połowie wysokości do plastikowego cokołu. Podłącz pięć górnych rurek za pomocą rurki tigon i mieszanej igły o rozmiarze 22 do jednomililitrowej strzykawki wypełnionej sterylną solą fizjologiczną.

Przepłukać sól fizjologiczną przez cewnik, aby zapewnić niezakłócony przepływ. Aby rozpocząć znieczulenie zwierzęcia przed goleniem i oczyszczeniem obszaru na prawym ramieniu i głowie alkoholem i peelingiem chirurgicznym. Po nałożeniu żelu na oczy, aby zapobiec wysuszeniu, wstrzykuje się penicylinę i sól fizjologiczną w celu ochrony przed infekcją i odwodnieniem.

Użyj standardowych technik, aby odsłonić zewnętrzną żyłę szyjną po odizolowaniu od otaczającej tkanki. Włóż zakrzywione kleszcze pod żyłę, aby była uniesiona i lekko rozciągnięta. Wykonaj małe nacięcie w kształcie litery V na żyle i przytrzymaj nacięcie otwarte.

Za pomocą rozszerzacza naczyń przesuń krótką, trzycentymetrową końcówkę cewnika do żyły w kierunku serca, aż kropla silikonu znajdzie się w miejscu nacięcia. Przywiąż cewnik do żyły trzema szwami, z których jeden jest jak najdalej rozpieszczony. Jeden po prostu rostral do kropli silikonu, a trzeci tak daleko rostralny, jak to możliwe.

Przepuść sól fizjologiczną przez cewnik, aby upewnić się, że pozostaje zatkany i że szwy nie są zbyt ciasne. Następnie ułóż szczura brzuszną stroną do dołu. Naciąć głowę i wprowadzić hemostat, aby oddzielić skórę od leżącej pod nią tkanki i utworzyć kieszeń podskórną.

Sprowadzić hemostat pod skórą w kierunku otworu na ramionach, w którym wprowadzono cewnik. Przebij się przez tkankę łączną i mocno zaciśnij cewnik w najbardziej rostralnym punkcie poniżej podstawy pięciu w górę. Odłącz pięć cewników i przeciągnij długi koniec cewnika pod skórę i wyjdź z nacięcia znajdującego się na czubku głowy.

Użyj nożyczek, aby przeciąć cewnik poniżej miejsca, w którym hemostat został zaciśnięty i ponownie przymocuj długi koniec pięciu do góry. Przeciągnij cewnik wzdłuż metalowego trzonka pięciu aż do plastikowego cokołu, przepuść przez niego sól fizjologiczną, aby zapewnić swobodny przepływ. Po zamknięciu ran szwami umieść szczura w aparacie stereotaktycznym.

Gdy odsłonięta czaszka jest czysta i sucha, użyj ręcznego wiertła, aby wywiercić od czterech do pięciu otworów w powierzchni. Następnie włóż maszynowe w otwory, aby działały jako rusztowanie dla nasadki głowicy. Umieść pięć łączników górnych między i wsuń nadmiar długości cewnika do wykonanej wcześniej kieszonki podskórnej.

Na koniec użyj cementu dentystycznego, aby przymocować pięć do górnej części czaszki. Usunąć szczura z aparatu stereotaktycznego po całkowitym wysuszeniu cementu i monitorować, aż do całkowitego wyzdrowienia. Szczury są trzymane pojedynczo w komorach kondycjonowania instrumentalnego.

Zamknięty w komorach dźwiękochłonnych wyposażonych w wentylator. Dwie wysuwane dźwignie są zamontowane dziewięć centymetrów nad podłogą prawej ściany bocznej, a nad każdą dźwignią znajduje się lampka sygnalizacyjna. Moduł dźwiękowy jest umieszczony nad aktywną dźwignią, a czerwone światło domu jest umieszczone w górnej środkowej części lewej ściany bocznej.

Jedzenie i woda są dostępne w libitum. Pompa leku jest przymocowana do cewnika za pomocą krętlika do płynu i rurki tigon zabezpieczonej metalową sprężyną. Samodzielne podawanie heroiny rozpoczyna się po powrocie do zdrowia po operacji i 24-godzinnym okresie przyzwyczajenia.

Na początek przepłucz cewnik roztworem heparyny gentamycyny. Następnie podłącz złącze pięć w górę do rurki Tigon i przymocuj metalową sprężynę. Rozpocznij każdą sesję na początku fazy ciemności od wysunięcia aktywnych i nieaktywnych dźwigni, a także oświetlenia światła w domu i aktywacji kompleksu tonów światła Q.

Przez 30 sekund szczury mogą samodzielnie podawać heroinę przez 10 dni podczas trzech trzygodzinnych sesji oddzielonych trzygodzinnymi odstępami. Reakcje na aktywną dźwignię skutkują aktywacją pompy leku i zainicjowaniem 22. okresu limitu czasu, podczas którego światło w domu jest wyłączane, a kompleks tonów świetlnych Q nad aktywną dźwignią jest aktywowany. Nieaktywne reakcje dźwigni są rejestrowane, ale nie mają programowalnych konsekwencji.

Po przeszkoleniu w zakresie samodzielnego podawania należy wyjąć szczury z komór kondycjonowania instrumentalnego i umieścić je indywidualnie w pomieszczeniu dla zwierząt z nieograniczonym dostępem do pożywienia i wody. Przez jeden dzień wypłukiwania leku następnego dnia zmniejsz ilość jedzenia dla grupy z ograniczeniami żywieniowymi, aby rozpocząć okres abstynencji, zachowując jednocześnie nieograniczony dostęp do jedzenia w grupie nasyconej. Wykonaj test na poszukiwanie narkotyków rano w dniu abstynencji.

Dzień 14, włóż szczury z powrotem do komór kondycjonowania instrumentalnego i przymocuj je do metalowej sprężyny. Pozwól na jedno- lub trzygodzinną sesję, podczas której aktywne i nieaktywne reakcje dźwigni mają takie same konsekwencje, jak w treningu samodzielnego podawania, z wyłączeniem dostępności leku. Wyniki te pokazują, że masa ciała pozostaje stabilna w całej heroinie.

Trening samodzielnego podawania Podczas abstynencji szczury z nieograniczonym dostępem do karmy zwiększają masę ciała, podczas gdy te, które mają ograniczenia żywieniowe, zmniejszają masę ciała o około 10 do 15%Jak widać tutaj, infuzje i aktywne reakcje dźwigni wzrosły w ciągu dni treningowych, podczas gdy nieaktywne reakcje dźwigni nie. Po okresie abstynencji aktywna reakcja dźwigniowa u szczurów z ograniczeniami pokarmowymi znacznie wzrosła w porównaniu ze szczurami nasyconymi. Podczas gdy reakcja nieaktywnej dźwigni jest minimalna i porównywalna między grupami, postępując zgodnie z tą procedurą.

Inne metody, takie jak wstrzyknięcia wewnątrzczaszkowe, mikrodializa, western blotting i techniki immunohistochemiczne mogą być stosowane do celowania w określone systemy neurochemiczne i farmakologiczne. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś mieć jasne zrozumienie, jak chirurgicznie wszczepić cewnik dożylny do żyły szyjnej szczura, a także jak przeprowadzić procedurę samodzielnego podawania heroiny w standardowych komorach kondycjonowania instrumentalnego.