Name: Test pojedynczej muchy na zachowania żerowe u Drosophila (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-04T21:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Poznaj automatyczny test zachowań żerowych u Drosophila melanogaster w neurobiologii. Ta metoda pozwala mierzyć zmiany behawioralne wywołane głodem i badanie obwodów nerwowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez granty badawcze dla J.W.W. z National Institute of Health (R01DK092640) i National Science Foundation (0920668).

1. Zbieranie much i głód
<ol>
	<li>Hoduj eksperymentalne muchy w kontrolowanych warunkach temperatury i wilgotności (np. 21 °C, 50-60% wilgotności względnej) w 12-godzinnym cyklu światła/ciemności.</li>
	<li>Zbierz samice much w dniu zaniku i umieść je, wraz z 4-5 samcami, w nowych fiolkach z pokarmem (maksymalnie 30 na fiolkę). Wiek leci 2-5 dni.</li>
	<li>Przygotuj komory na głód much.
	<ol>
		<li>Wepchnij pojedynczą chusteczkę (4.8 x 8.4 cala) na dno pustej plastikowej fiolki. Całkowicie namocz tkankę wodą destylowaną. Użyj przedmiotu, aby docisnąć tkankę i delikatnie wyciśnij nadmiar wody.</li>
		<li>Odwrócić fiolkę, aby usunąć nadmiar wody. Powinno być wystarczająco dużo wody, aby muchy były nawodnione, a komora głodowa wilgotna, ale nie wystarczająca, aby utopić muchy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przenieś muchy z fiolki z jedzeniem do komory głodowej i zatkaj fiolkę na około 18-24 godziny przed rozpoczęciem eksperymentu. Przechowywać fiolki w kontrolowanych warunkach temperatury i wilgotności przez noc, aż do rozpoczęcia eksperymentu następnego dnia.</li>
</ol>
2. Przygotowanie zapachu żywności
<ol>
	<li>Przygotować 1% roztwór agarozy, dodając 0,1 g agarozy o niskiej temperaturze topnienia do 10 ml wody destylowanej w szklanej kolbie. Podgrzej roztwór agarozy w kuchence mikrofalowej, aż zacznie wrzeć, ale na długo przed wykipieniem.
	<ol>
		<li>Zatrzymaj kuchenkę mikrofalową i raz zakręć kolbą. Powtórz ten krok jeszcze dwa razy, aż agaroza całkowicie się rozpuści. Utrzymywać roztwór agarozy w stanie ciekłym, utrzymując kolbę w cieple na płycie grzejnej ustawionej na 50 °C.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dodaj 990 μl 1% roztworu agarozy i 10 μl octu jabłkowego do 1,5 ml probówki Eppendorf, aby uzyskać 1% roztwór octu jabłkowego. Zmieszać roztwór do momentu wymieszania i umieścić w inkubatorze do suchej kąpieli nastawionym na 50 °C.</li>
</ol>
3. Pomieszczenie testowe i konfiguracja komory zachowania
<ol>
	<li>Ustaw pomieszczenie testowe na żądane warunki (np. temperaturę i wilgotność).</li>
	<li>Włącz panel LED ( 660 nm).</li>
	<li>Opłucz sita i płytki testowe gorącą wodą i podgrzej je w suszarce, aż cała wilgoć wyparuje. Ostudzić sita i płytki do temperatury pokojowej przed rozpoczęciem eksperymentów.</li>
	<li>Umieść płytkie naczynie na płycie dyfuzora i napełnij je wodą, aby zwiększyć lokalną wilgotność i zamaskować wodę w kropli agarozy.</li>
	<li>Umieść sitka nad naczyniem na wodę.</li>
</ol>
4. Ładowanie muchy na płytkach testowych
Diagramy ze specyfikacjami płytek testowych można znaleźć w sekcji Pliki uzupełniające. Płytka testowa wykonana jest z przezroczystego akrylu i składa się z 6 aren testowych. Prosty suwak zawiera komory przetrzymujące, które umożliwiają ładowanie muchy, tymczasowe zabezpieczenie i jednoczesne wypuszczenie 6 much do odpowiednich komór na początku eksperymentu. Krzyżyk wytrawiony na środku każdej areny w płytce wskazuje, gdzie należy pipetować substancje zapachowe.
<ol>
	<li>Włóż suwaki do akrylowej płytki testowej.</li>
	<li>Delikatnie wsuń aspirator do fiolki obok bawełnianej zatyczki i pozwól około 6 muchom wejść do aspirator.it bardzo ważne jest, aby obchodzić się z nimi tak delikatnie, jak to możliwe. Można wykorzystać fototaktyczne zachowanie muchy, aby skłonić muchy do czołgania się w kierunku aspiratora, kierując otwór fiolki w stronę słabego źródła światła. W razie potrzeby można również zastosować delikatne ssanie, aby zassać około 6 samic much.</li>
	<li>Włóż końcówkę aspiratora do pierwszego otworu płytki testowej. Pozwól, aby pojedyncza mucha przeszła do komórki trzymającej i delikatnie przesuń suwak do przodu, aby załadować muchę do następnego otworu. Kontynuuj, aż muchy zajmą wszystkie 6 komórek podtrzymujących płytkę.</li>
	<li>Odpipetować 5 μl 1% octu jabłkowego i roztworu agarozy bezpośrednio na środek krzyża nitkowego po wewnętrznej stronie płytki testowej.</li>
</ol>
5. Ustawianie płytki testowej
<ol>
	<li>Aby wyśrodkować płytkę testową, otwórz plik o nazwie "Pozycjonowanie Tool.vi". "LabVIEW VI for Positioning Tool. vi można znaleźć w sekcji Pliki uzupełniające. Uruchom plik, klikając białą strzałkę w lewym górnym rogu ekranu.</li>
	<li>Umieść płytkę testową na górze sita w taki sposób, aby otwór areny był skierowany w stronę podłogi sita, a cel zapachu znajdował się na suficie płyty. Dopasuj krzyżyk nitkowy wytrawiony z tyłu płytki testowej do krzyżyka na ekranie monitora.</li>
	<li>Po zakończeniu wyrównywania przerwij wykonywanie, klikając czerwoną kropkę znajdującą się w pobliżu lewego górnego rogu monitora.</li>
</ol>
6. Zapisz pozycję lotu podczas eksperymentu
<ol>
	<li>Aby śledzić i rejestrować współrzędne muchy podczas każdej próby wyszukiwania żywności, otwórz plik oprogramowania do akwizycji "Fly Tracking--Six Zones.vi". VI LabVIEW dla "Fly Tracking--Six Zones.vi" można znaleźć w sekcji Pliki uzupełniające. Uruchom plik, klikając białą strzałkę w lewym górnym rogu monitora.</li>
	<li>Przypisz plikowi nazwę i kliknij "OK".</li>
	<li>Przesuń suwaki w komorach testowych, aby wypuścić muchy na areny testowe. Uważaj, aby nie przesuwać komór testowych, ponieważ doprowadzi to do nieprawidłowego wyrównania ze współrzędnymi oprogramowania analitycznego.</li>
	<li>Kliknij "Start" (rozpocznie się nagrywanie) i upewnij się, że jedynym źródłem światła w komorze testowej jest panel LED 660 nm.</li>
	<li>Po zakończeniu próby wyjmij sito i komorę behawioralną. Zdejmij płytkę testową z sita i usuń muchy, zanurzając płytkę w lodzie. Delikatnie wyczyść płytkę gorącą wodą i usuń wszelkie zanieczyszczenia agarozy. Umieść płytki testowe w suszarce w celu usunięcia wilgoci.</li>
	<li>Przewietrzyć obszar testowy, włączając mały wentylator na około 2 minuty. Wyłącz wentylator i załaduj następną grupę much na następną płytkę testową.</li>
</ol>
7. Analiza danych za pomocą niestandardowego oprogramowania
"Analiza danych do śledzenia lotów - Sześć stref" można znaleźć w sekcji Pliki uzupełniające. Podczas akwizycji danych oprogramowanie do akwizycji rejestruje indywidualne współrzędne pozycji lotu dla każdego punktu czasowego w pliku tekstowym. Pojedyncza kamera cyfrowa umieszczona nad płytkami testowymi rejestruje obrazy z częstotliwością odświeżania 0,5 Hz. Program do analizy "Data Analysis for Fly Tracking-Six Zones" wydobywa informacje z tego pliku tekstowego, aby a) obliczyć średnią prędkość, b) określić punkt czasowy, w którym mucha pomyślnie zlokalizowała źródło zapachu, oraz c) zbudować okna graficzne, które pozwalają użytkownikowi zobaczyć: lokalizację lotu, odległość muchy od źródła zapachu w czasie i średnią prędkość lotu w czasie. Formatuje również dane w celu łatwego eksportu do programu do arkuszy kalkulacyjnych. W tym makrze opóźnienie wyszukiwania żywności jest definiowane jako punkt czasowy, w którym muchy spędzają co najmniej 5 sekund w promieniu 5 mm od środka areny.
<ol>
	<li>Otwórz plik oprogramowania analitycznego "Data Analysis for Fly Tracking - Six Zones". W zakładce "Windows" kliknij "Utwórz nową tabelę". Powtarzaj ten krok, aż zostanie utworzonych sześć tabel.</li>
	<li>W zakładce "Makra" kliknij "Foodfinding". Powinien pojawić się panel główny z następującymi opcjami: Otwórz plik danych surowych dla układu; Otwórz plik danych RAW dla pliku danych; Lokalizacja lotu; Odległość; Szybkość; Układ; FormatDataFile.</li>
	<li>Aby wyświetlić surowe dane bez dołączania wartości do pliku tekstowego, kliknij "Otwórz plik danych RAW dla układu". Zlokalizuj i wybierz plik danych eksperymentalnych w wyświetlonym oknie przeglądarki. Kliknij "Otwórz".</li>
	<li>Kliknij "Lokalizacja lotu", aby wyświetlić lokalizację każdej muchy na każdej z sześciu aren (na ekranie powinno pojawić się sześć wykresów X-Y przedstawiających pozycję każdej muchy w czasie).</li>
	<li>Kliknij "Odległość", aby wyświetlić odległość każdej muchy od źródła zapachu (na ekranie powinno pojawić się sześć wykresów przedstawiających odległość muchy od źródła zapachu w czasie). Linia pozioma na wysokości y = 5 mm wskazuje próg, przy którym uważa się, że mucha znajduje się przy źródle pożywienia.</li>
	<li>Kliknij "Prędkość", aby wyświetlić średnią prędkość każdej muchy podczas próby (na ekranie powinno pojawić się sześć wykresów przedstawiających prędkość muchy w czasie).</li>
	<li>Kliknij "Układ", aby wyświetlić układ ze wszystkimi wykresami lokalizacji, odległości i prędkości, a także średnią prędkością (w ciągu pierwszych 50 sekund) i opóźnieniem w znalezieniu źródła zapachu dla każdej muchy (Rysunek 1). Aby poprawnie wyświetlić układ, może być konieczne dostosowanie marginesów. Aby to zrobić, najpierw kliknij okno układu. W zakładce "Plik" kliknij "Ustawienia strony dla układu". Zresetuj marginesy do 0,2 cala i kliknij "OK". Bezpośrednio po lewej stronie każdej wykresu lokalizacji znajduje się mała tabela z nagłówkami "Prędkość" i "Opóźnienie". Wartości wprowadzone pod każdym nagłówkiem wskazują średnią prędkość w mm/s i opóźnienie wyszukiwania żywności w sekundach. Puste wpisy w obszarze Opóźnienie wskazują, że mucha nie mogła zlokalizować źródła zapachu. Opóźnienie wyszukiwania żywności definiuje się jako punkt czasowy, w którym muchy spędziły co najmniej 5 sekund w promieniu 5 mm od środka komory.</li>
	<li>Aby wydrukować układ, kliknij obszar układu (aktualizuje układ do bieżącego pliku). Kliknij "Plik", a następnie kliknij "Drukuj układ".</li>
	<li>Aby wyświetlić następny plik, po prostu kliknij "Otwórz plik danych RAW dla układu". Kliknij następny plik danych raw, który chcesz wyświetlić, i kliknij "OK". Kliknij okno Układ, aby zaktualizować okno o nowy plik danych.</li>
	<li>Ustawienia mogą zostać zapisane w pliku eksperymentu do późniejszego wykorzystania.</li>
</ol>
8. Eksport danych z oprogramowania do analizy danych do programu do arkuszy kalkulacyjnych
<ol>
	<li>Aby wyeksportować dane dotyczące prędkości i opóźnień dla każdego pliku, kliknij "Otwórz plik danych surowych dla pliku danych". Wybierz plik danych eksperymentalnych i kliknij "Otwórz". Pojawi się nowe okno przeglądarki.</li>
	<li>W nowym oknie przeglądarki kliknij prawym przyciskiem myszy "Nowy", a następnie kliknij "Dokument tekstowy". Nazwij nowy dokument tekstowy. Wybierz nowo nazwany plik tekstowy i kliknij "Otwórz". Spowoduje to zapisanie danych z pliku danych surowych w pliku tekstowym.</li>
	<li>Aby wyeksportować dane z innego pliku, kliknij "Otwórz plik danych surowych dla pliku danych". Kliknij inny plik i kliknij "Otwórz". Wybierz plik tekstowy z kroku 8.2). Kontynuuj ten proces dla pozostałych plików danych, które chcesz wyeksportować.</li>
	<li>Po dodaniu wszystkich żądanych plików danych do pliku tekstowego kliknij "Formatuj plik danych". Wybierz dokument tekstowy używany do przechowywania danych z poprzednich kroków i kliknij "Otwórz" (automatycznie otworzy się nowe okno).</li>
	<li>Utwórz nowy dokument tekstowy w oknie, przypisz plikowi nazwę i kliknij "Zapisz". Spowoduje to utworzenie pliku tekstowego, który zawiera nazwę pliku, średnią prędkość i opóźnienie dla każdego lotu i może być importowany do programu arkusza kalkulacyjnego.</li>
	<li>Wykresy skumulowane są konstruowane na podstawie danych dotyczących całkowitej liczby much, które osiągnęły docelowy zapach pokarmu w funkcji czasu (rysunek 3).</li>
	<li>Zestawy danych eksperymentalnych są analizowane pod kątem istotności statystycznej za pomocą testu z dla proporcji.</li>
</ol>

<ol><li>Dethier, V. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDethier%2C+VG+%22The+hungry+fly+%3A+a+physiological+study+of+the+behavior+associated+with+feeding%22">The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding</a>. , Harvard University Press. (1976).</li>
<li>Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+facilitation+by+neuropeptide+signaling+mediates+odor-driven+food+search%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search.</a> Cell. 145, 133-144 (2011).</li>
<li>Root, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+presynaptic+gain+control+mechanism+fine-tunes+olfactory+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A presynaptic gain control mechanism fine-tunes olfactory behavior.</a> Neuron. 59, 311-321 (2008).</li>
<li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li>
<li>Faucher, C., Forstreuter, M., Hilker, M., de Bruyne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+responses+of+Drosophila+to+biogenic+levels+of+carbon+dioxide+depend+on+life-stage%2C+sex+and+olfactory+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral responses of Drosophila to biogenic levels of carbon dioxide depend on life-stage, sex and olfactory context.</a> J. Exp. Biol. 209, 2739-2748 (2006).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 71, 708-712 (1974).</li>
<li>Fishilevich, E., Domingos, A. I., Asahina, K., Naef, F., Vosshall, L. B., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+behavior+mediated+by+single+larval+olfactory+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis behavior mediated by single larval olfactory neurons in Drosophila.</a> Curr. Biol. 15, 2086-2096 (2005).</li>
<li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li>
<li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li>
<li>Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+modification+of+behavior+in+Drosophila+by+targeted+expression+of+a+temperature-sensitive+shibire+allele+in+defined+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons.</a> J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).</li>
<li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14, 341-351 (1995).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów finansowych.

W tym protokole opisujemy krok po kroku procedurę testu zachowań związanych z wyszukiwaniem żywności. Oprócz zapachów związanych z żywnością, może być również przystosowany do badania zdolności muchy do lokalizowania innych obiektów zapachowych. Na przykład można go zastosować do badania zachowań lokalizacyjnych partnera u samców much3 . Istnieje kilka dodatkowych kwestii związanych z tym protokołem, o których wspomnimy tutaj w odniesieniu do tej procedury:
Po pierwsze, temperatura...

Stany głodu sprzyjają dwóm typom zachowań pożądawczych: poszukiwaniu jedzenia i konsumpcji jedzenia1. Ten prosty test behawioralny jest przydatny do badania zachowań chemotaktycznych związanych z żerowaniem2,3. W szczególności śledzi pozycję lotu, prędkość chodzenia i opóźnienie, aby zlokalizować cel zapachu jedzenia. Opóźnienie w znajdowaniu pokarmu służy jako miara do pomiaru zmian czułości systemu wykrywania zapachów muchy po zmianach w jej wewnętrznym stanie pożądawczym. Ręczna wersja tego testu była wcześniej używana do wykazania, że sygnalizacja receptora GABA-B jest ważna dla zachowania lokalizacji zapachu u dorosłych much3. Obecna zautomatyzowana wersja testu odegrała zasadniczą rolę w badaniu, w jaki sposób krótka sygnalizacja neuropeptydu-F (sNPF) zmienia mapę węchową u Drosophila i wpływa na zachowania apetytywne2.
Testowanie odbywa się w ciemnym pomieszczeniu o kontrolowanej temperaturze i wilgotności. Cyfrowe kamery wideo umieszczone nad przezroczystymi akrylowymi płytami testowymi śledzą muchy podświetlane oświetleniem LED o długości fali 660 nm. Informacje z kamery są przetwarzane w czasie rzeczywistym przez komputer umieszczony obok obszaru testowego. Używamy oprogramowania do akwizycji danych do rejestrowania i zapisywania współrzędnych pozycji lotów w okresie testowym.
W tym paradygmacie, obiekt jest wypuszczany na arenę, która zawiera zapach jedzenia w centrum; obiekt zapachu tworzy gradient zapachu jedzenia w arenie, który wywołuje zachowanie związane z poszukiwaniem jedzenia w locie. Podobny protokół poszukiwania zapachów został zastosowany do badania chemosensacji u pojedynczych larw Drosophila 7. Podczas gdy inne testy behawioralne, takie jak czteropolowy olfaktometr4,5 lub t-maze6, oceniają awersję do zapachów lub zachowania związane z przyciąganiem, ten paradygmat najlepiej nadaje się do oceny wrażliwości węchowej i zachowań chemotaksji.
Kilka kluczowych zalet towarzyszy temu testowi. Po pierwsze, pozwala na szybkie pozyskiwanie dużych zbiorów danych, ponieważ gromadzenie i analiza danych są w większości zautomatyzowane. Po drugie, test ten izoluje i mierzy zachowanie pojedynczych much, eliminując w ten sposób społeczne sygnały węchowe, które mogą wpływać na ich zachowanie. Po trzecie, prostota protokołu i prosty projekt eksperymentalny sprawiają, że test jest wydajny i łatwy do nauczenia innych.
Ponadto, ten test może być wykorzystany do dalszego badania obwodów neuronowych leżących u podstaw zachowań związanych z poszukiwaniem pożywienia, łącząc go z obszernym zestawem narzędzi genetycznych dostępnych dla Drosophila melanogaster8. Ukierunkowaną ekspresję transgenów, które wyciszają lub pobudzają neurony, można osiągnąć za pomocą narzędzi takich jak system GAL4-UAS, a także transgeny UAS-shibirets1, UAS-tetanus-toxin i UAS-TrpA1(B)9-12.

<table><tbody><tr><td>Ocet jabłkowy</td><td>Spectrum</td><td></td><td>dostępny na rynku</td></tr><tr><td>Agaroza, typ VII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0701</td> akrylowa płytka testowa <td>agarozy o niskiej temperaturze żelowania</td></tr><tr><td>niestandardowa</td><td>płytka</td><td></td><td>zawiera 6 aren. Każda arena ma średnicę 60 mm i 6 mm wysokości. Zobacz schematy płytek testowych, aby uzyskać szczegółowe pomiary.</td></tr><tr><td>Platforma LabVIEW V.8.5</td><td>National Instruments</td><td>776670-09</td><td>dla programów: PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi UWAGA: "upłynęły time.vi", "czas do file.vi" i "dwa detect.vi obiektów" są dołączonymi podprogramami, które muszą być dostępne, aby główny program do akwizycji danych "FlyTracking--Six zones.vi" mógł działać.</td></tr><tr><td>LabVIEW Vision 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie do akwizycji LabVIEW Vision 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Builder AI 3.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Igor Pro V.6</td><td>Wavemetric, Inc.</td><td></td><td>platforma do makro: Analiza danych do śledzenia lotów - sześć stref</td></tr><tr><td>Aparat cyfrowy Basler scA1390-17fm</td><td>National Instruments</td><td>779980-01</td><td>UWAGA: sterownik do aparatu dostępny pod adresem Baslerweb.com</td></tr><tr><td>obiektyw 8 mm</td><td>National Instruments</td><td>780024-01</td><td>Obiektyw do aparatu cyfrowego Basler</td></tr><tr><td>Szlifowana szklana płyta dyfuzora</td><td>Edmund Optics</td><td>niestandardowy</td><td>Rozprasza światło, 25 cm x 30 cm</td></tr><tr><td>US Std. No. 100</td><td>Fischer Scientific</td><td>04-881X</td><td>Sito o nominalnym otwarciu 150 &mu; m</td></tr><tr><td colspan="4">Opcja oświetlenia 1</td></tr><tr><td>LED podświetlenie 660 nm (20 cm x 20 cm)</td><td>Spectra West</td><td>BL47192</td><td>prostsza, ale droższa opcja oświetlenia.</td></tr><tr><td>Zasilacz do podświetlenia LED</td><td>Spectra West</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Opcja oświetlenia 2</mocne></td></tr><tr><td>660 nm</td><td>Diody LED Superbrightleds</td><td>RL5R1330</td><td>Długość fali 660 nm (około 7 x 7 LED dla panelu 14,7 cala x 9,75 cala)</td></tr><tr><td>Liniowy zasilacz prądu stałego</td><td>GW Instek</td><td>GPS-1830D</td><td>Zasilacz do panelu LED</td></tr><tr><td>Bezlutownicza płytka stykowa</td><td>Digikey</td><td>922354-ND</td><td>Płytka stykowa do diod LED</td></tr></tbody></table>

test pojedynczej muchy na zachowania żerowe u drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

Dla wielu zwierząt, głód sprzyja zmianom w systemie węchowym w sposób, który ułatwia poszukiwanie odpowiednich źródeł pożywienia. W tym artykule wideo opisujemy zautomatyzowany test do pomiaru wpływu głodu lub sytości na zależne od węchu zachowanie związane z poszukiwaniem pożywienia u dorosłej muszki owocowej Drosophila melanogaster. W szczelnym pudełku oświetlonym czerwonym światłem, które jest niewidoczne dla muszek owocowych, kamera połączona z niestandardowym oprogramowaniem do akwizycji danych monitoruje pozycję sześciu much jednocześnie. Każda mucha jest ograniczona do chodzenia po indywidualnych arenach, w których środku unosi się zapach jedzenia. Areny testowe spoczywają na porowatej podłodze, która zapobiega gromadzeniu się zapachów. Opóźnienie w zlokalizowaniu źródła zapachu, metryka, która odzwierciedla wrażliwość węchową w różnych stanach fizjologicznych, jest określana przez analizę oprogramowania. W tym miejscu omawiamy krytyczną mechanikę działania tego paradygmatu behawioralnego i omawiamy konkretne kwestie dotyczące obciążenia muchami, zanieczyszczenia zapachem, temperatury testu, jakości danych i analizy statystycznej.

Oprogramowanie do analizy danych i układ, którego przykład można zobaczyć na rysunku 1, są używane do oceny wydajności każdej muchy podczas jej 10-minutowej próby zgodnie z zestawem kryteriów analizy. Poniższe kryteria służą do określenia, czy dane z każdej muchy zostaną wykorzystane do analizy danych i mają na celu wyeliminowanie tych much, które nie są w stanie wykonać zadania wyszukiwania pożywienia z powodu urazu, choroby, stresu lub braku motywacji.
Muchy, które są nieakt...

W tym artykule wideo opisujemy zautomatyzowany test do pomiaru wpływu głodu lub sytości na zależne od węchu zachowanie związane z poszukiwaniem pokarmu u dorosłej muszki owocowej Drosophila melanogaster.

Test pojedynczej muchy na zachowania żerowe u Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Ogólnym celem tej procedury jest ilościowe określenie zmian behawioralnych wywołanych brakiem pożywienia u dorosłej muchy Salala Melanogaster. Osiąga się to poprzez pierwsze głodujące muchy przez 18 do 24 godzin. Drugim krokiem jest załadowanie pojedynczych much do komór behawioralnych, z których każda zawiera w swoim środku atrakcyjne źródło zapachu.Następnie system komputerowy z kamerą cyfrową śledzi pozycję każdej muchy w czasie i rejestruje. Jego współrzędne do późniejszej analizy danych. Ostatnim krokiem jest określenie opóźnienia każdej muchy, aby dotrzeć do źródła zapachu za pomocą niestandardowego oprogramowania.Ostatecznie ten wysokoprzepustowy test zachowań związanych z wyszukiwaniem żywności może być wykorzystany do badania związku między funkcją obwodów nerwowych a reakcjami behawioralnymi. Główną przewagą tego testu nad istniejącą metodą, podobnie jak w przypadku kolegów z zespołu, jest to, że określa ona ilościowo zachowanie chemotaktyczne u pojedynczych much. Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na pytania w neurobiologii, takie jak to, które obwody nerwowe są ważne dla zachowania chemotaktycznego i w jaki sposób te obwody nerwowe są moderowane przez wewnętrzny stan fiz

a-single-fly-assay-for-foraging-behavior-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Testy behawioralne służące do pomiaru funkcji lokomocyjnych, zdolności uczenia się i pamięci u Drosophila.

Ocena deficytów motorycznych, uczenia się i pamięci w modelach neurodegeneracji u Drosophila

Drosophila melanogaster to genetycznie i behawioralnie podatny system modelowy, który od ponad wieku jest wykorzystywany do zrozumienia molekularnych i komórkowych podstaw wielu ważnych procesów biologicznych 1. Drosophila została szeroko wykorzystana w celu uzyskania wglądu w genetyczne podstawy zachowania much.

Metody oceny zachowania Drosophila

Ten film opisuje prostą metodę ilościowego oznaczania lokomocji muchy i pokazuje przeprowadzony test wspinaczki. Test wspinaczki muchowej jest ogólnym testem funkcji motorycznych, który opiera się na negatywnej odpowiedzi geotaksji.

Test wspinaczki muchowej: metoda testowania ogólnej lokomocji u Drosophila melanogaster

Samice Drosophila wybierają między substratami i wybierają miejsca, które są atrakcyjne do składania jaj. Ten film opisuje test behawioralny, który testuje ich podejmowanie decyzji, zwany testem preferencji składania jaj. Prezentowany klip demonstruje procedurę z niestandardową konfiguracją, która umożliwia naukowcom nie tylko testowanie zachowania wielu samic w tym samym czasie, ale jest również kompatybilna z nagrywaniem wideo i konfiguracjami optogenetycznymi.

Drosophila Test preferencji składania jaj: metoda testowania podejmowania decyzji u much

Tutaj prezentujemy protokół do ilościowego określenia unikania osób zestresowanych. Ten paradygmat jest potężny, ale przyjazny dla użytkownika i może być wykorzystany do oceny wpływu genów i środowiska na jeden rodzaj interakcji społecznych u Drosophila melanogaster.

Prosty test do ilościowego oznaczania unikania społecznego u Drosophila melanogaster

Automatyczny system śledzenia Flywalk jest używany do wysokorozdzielczego oznaczania ilościowego zachowania kierowanego zapachem u Drosophila melanogaster.

Kwantyfikacja zachowania kierowanego zapachem w wysokiej rozdzielczości u Drosophila melanogaster przy użyciu paradygmatu Flywalk

Dostarczamy szczegółowy protokół do badania długości ścieżki żerowania Drosophila melanogaster. Omawiamy przygotowanie i postępowanie ze zwierzętami doświadczalnymi, sposób wykonywania testu i analizy danych.

Protokół długości ścieżki żerowania dla larw Drosophila melanogaster

Opisujemy tutaj konfigurację behawioralną i metodę analizy danych do oceny reakcji węchowych do 100 muszek octowych (Drosophila melanogaster). System ten może być stosowany z pojedynczymi lub wieloma bodźcami węchowymi i może być przystosowany do optogenetycznej aktywacji lub wyciszania podzbiorów neuronów.

Zachowania węchowe oceniane za pomocą komputerowego śledzenia Drosophila w czterokwadrantowym olfaktometrze

Przedstawiamy protokół dla testu żywieniowego dla much z dwoma opcjami. Ten test żywieniowy jest szybki i łatwy do przeprowadzenia i nadaje się nie tylko do badań laboratoryjnych na małą skalę, ale także do wysokowydajnych badań behawioralnych u much.

Szybki test preferencji żywieniowych u Drosophila

Obecny protokół ocenia aktywność lokomotoryczną Drosophila poprzez śledzenie i analizowanie ruchu much na ręcznie wykonanej arenie za pomocą oprogramowania typu open source Fiji, kompatybilnego z wtyczkami do segmentacji pikseli każdej klatki na podstawie nagrania wideo w wysokiej rozdzielczości w celu obliczenia parametrów prędkości, odległości itp.

Prosta technika oznaczania aktywności lokomotorycznej u Drosophila

Zaburzenie ze spektrum autyzmu (ASD) wiąże się z zaburzeniami zachowań społecznych i komunikacyjnych oraz pojawieniem się powtarzających się zachowań. W celu zbadania wzajemnych relacji między genami ASD a deficytami behawioralnymi w modelu Drosophila, w tym artykule opisano pięć paradygmatów behawioralnych do oceny odstępów społecznych, agresji, zalotów, pielęgnacji i zachowań habituacyjnych.

Paradygmaty oceny behawioralnej w modelu zaburzenia ze spektrum autyzmu Drosophila

Poznaj automatyczny test zachowań żerowych u Drosophila melanogaster w neurobiologii. Ta metoda pozwala mierzyć zmiany behawioralne wywołane głodem i badanie obwodów nerwowych.

Test pojedynczej muchy na zachowania żerowe u Drosophila

Przeglądaj więcej filmów