Metody zbierania mleka dla myszy i jelenia Muntjac Reevesa
19 lipca 2014
Pobieranie mleka z modeli zwierzęcych ułatwia różne ścieżki badań: zrozumienie odporności biernej, identyfikację patogenów odpowiedzialnych za transgeniczne przenoszenie i, dzięki wykorzystaniu transgenicznych myszy, nawet komercyjną produkcję białek znajdujących się w ludzkim mleku matki. Tutaj ilustrujemy prostą metodę zbierania mleka u myszy i jeleni muntjac Reevesa.
Ogólnym celem niniejszej procedury jest zademonstrowanie sposobu pobierania mleka od myszy lub jelenia mutt jack (Reeve's muntjac) do wykorzystania w różnych eksperymentach naukowych. Jest to realizowane poprzez najpierw podanie zwierzęciu oksytocyny w celu stymulacji wydzielania mleka, a następnie znieczulenie zwierzęcia. Następnie pierwszy badacz ręcznie wyciska mleko, podczas gdy drugi badacz je zbiera.
Ostatnim krokiem jest zapewnienie bezpieczeństwa zwierzęciu podczas wybudzania z narkozy. Ostatecznie podczas jednej sesji można zebrać od około 5 do 30 mililitrów mleka mutt jack lub do 450 mikrolitrów mleka mysiego. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak te wymagające specjalistycznego sprzętu, jest fakt, że jest ona stosunkowo tania i łatwa do opanowania.
Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na kilka pytań naukowych, na przykład czy patogen może zostać przekazany z matki na potomstwo poprzez mleko. Osoby rozpoczynające pracę z tą metodą zazwyczaj szybko tracą zapał, ponieważ prawidłowe pozyskiwanie mleka wymaga praktyki. W przeprowadzeniu tej procedury w celu stymulacji wydzielania mleka u myszy laktującej pomoże mi Stephanie full away, technik z naszego laboratorium.
Bezpośrednio przed pobraniem mleka podaj oksytocynę w dawce dwóch jednostek międzynarodowych na kilogram masy ciała drogą dosytroniczną, znieczul mysz i nałóż niewielką ilość lubrykantu do oczu do każdego oka, aby zapobiec ich wysychaniu podczas oczekiwania na zadziałanie środka znieczulającego. Przygotuj sterylne gaziki nasączone alkoholem, pipetę P 200, sterylne końcówki do pipety oraz pojemnik na mleko, taki jak probówka typu Eppendorf o pojemności 1,5 ml lub krio probówka o pojemności 1,2 ml. Proces dojenia wymaga udziału dwóch badaczy.
Jedna osoba stabilizuje zwierzę i wydaja mleko, podczas gdy druga je zbiera. Osoba zbierająca mleko robi to ostrożnie, aby uniknąć zanieczyszczenia naczynia zbiorczego. Przed udojem osoba wydająca mleko delikatnie oczyszcza okolicę wymienia za pomocą sterylnego gazika nasączonego alkoholem.
W ciągu jednej lub dwóch minut od wstrzyknięcia oksytocyny w okolicy gruczołów mlekowych myszy widoczny staje się odruch wypływu mleka. Należy ręcznie odcisnąć mleko z sutka, używając kciuka i palca wskazującego do delikatnego masowania i ściskania tkanki gruczołu mlekowego ruchem ku górze, aż u podstawy sutka zacznie tworzyć się widoczna kropla mleka. Następnie osoba pobierająca mleko naciska tłok pipety P 200 do pierwszego stopnia, aby wypuścić powietrze z końcówki pipety i przygotować się do pobrania mleka.
Następnie osoba pobierająca mleko ustawia końcówkę pipety nad kroplą mleka. Uważając, aby nie zbliżyć końcówki zbyt mocno do sutka lub skóry, powoli zwalnia nacisk na tłok, aby zaciągnąć mleko do końcówki pipety, dociskając ją do ścianki probówki zbiorczej, aby nie dopuścić do utraty cieczy. Osoba pobierająca mleko kciukiem naciska tłok poza pierwszy stopień, aby wydalić mleko do pojemnika.
Kontynuuj ręczne wyciskanie mleka z każdego sutka, poruszając się w kierunku zgodnym lub przeciwnym do ruchu wskazówek zegara. Dopuszczalne jest powrót do poprzedniego sutka w celu wyciśnięcia większej ilości mleka, szczególnie jeśli produkuje on go więcej niż pozostałe. Po zakończeniu pobierania mleka poczekaj, aż mysz wybudzi się z narkozy.
Gdy samica zacznie swobodnie poruszać się w klatce, należy umieścić ją z powrotem w jej pierwotnej klatce wraz z miotem, aby pobudzić wydzielanie mleka. U laktujących osobników mutt jack deer należy podać domięśniowo 10 jednostek międzynarodowych na kilogram oksytocyny, a następnie niezwłocznie znieczulić zwierzę. Poziom znieczulenia uznaje się za odpowiedni, jeśli po dotknięciu uszu występują jedynie niewielkie odruchy, a osoba wyciskająca mleko może utrzymać mutt jack bez oporu ze strony zwierzęcia.
Następnie nanieś niewielką ilość lubrykantu do każdego oka, aby zapobiec ich wysychaniu u samicy. Wyposaż zarówno ekspresor do mleka, jak i kolektor mleka w gazę nasączoną etanolem oraz kilka 15 ml stożkowych probówek polipropylenowych do zbierania mleka. Gdy oksytocyna zacznie działać, w obszarze gruczołów mlekowych samicy pojawi się widoczne wydzielanie mleka.
Zarówno osoba wykonująca dojarkę, jak i osoba zbierająca mleko powinny nosić rękawice i zdezynfekować je gazą nasączoną etanolem. Należy również użyć gazy nasączonej etanolem do dezynfekcji całego wymienia oraz każdego pojedynczego sutka zwierzęcia, trzymając głowę munch jacka w wygodnej pozycji, aby umożliwić swobodne oddychanie i zapobiec cofaniu treści żwacza. Osoba zbierająca mleko umieszcza probówkę do zbierania blisko dojonego sutka, nie dotykając skóry.
Osoba pobierająca mleko używa kciuka i palca wskazującego, aby delikatnie uciskać tkankę gruczołową w ruchu w górę, aż sutek wypełni się mlekiem, a następnie delikatnie wyciska mleko z sutka do probówki trzymanej przez osobę zbierającą. Mleko wypływa w formie strumienia, dlatego ważne jest, aby probówka była ustawiona w taki sposób, by zminimalizować straty mleka. Wymiona Mt Jack jest podzielona na ćwiartki.
Ekspresor do mleka kontynuuje pozyskiwanie mleka z każdej ćwiartki do momentu, aż mleko przestanie swobodnie wypływać. Jeśli mleka nie można pozyskać z jednego sutka, należy go pobrać ze wszystkich pozostałych sutków przed powrotem do pierwszego. Po zakończeniu zbierania mleka należy podać aamaz podskórnie w celu szybkiego odwrócenia działania znieczulenia bam, a następnie monitorować samicę do czasu, aż będzie w stanie samodzielnie chodzić, jeść i pić. Rysunek ten wskazuje, że od laktującej myszy można uzyskać od 100 do 450 µL mleka.
Maksymalne objętości mleka pozyskiwano od ośmiu do 12 dni po porodzie, stosując dwie jednostki międzynarodowe na kilogram oksytocyny. Przedstawiono tutaj przybliżoną wydajność mleka laktującej myszy wykreśloną w zależności od wielkości miotu u myszy mut jack deer. Objętość mleka zebranego podczas jednej sesji wynosiła od pięciu do 30 mililitrów, w zależności od zastosowanego środka znieczulającego oraz czasu po porodzie; daty rozpoczęcia i zakończenia zbiorów mleka dla samic mut jack są przedstawione w tej tabeli.
Mleko zbierano średnio przez 80 dni, w przedziale od 18 do 150 dni. Po opanowaniu tej techniki można ją przeprowadzić w ciągu około jednej godziny, w zależności od liczby zwierząt, od których planuje się pobrać próbki w jednej sesji. Podczas wykonywania tej procedury należy zawsze pamiętać, że bezpieczeństwo zwierząt jest priorytetem. Po zakończeniu tej procedury może być konieczne przetworzenie mleka, a następnie przeprowadzenie testów in vitro lub bioassayów, co może pomóc w uzyskaniu odpowiedzi na dodatkowe pytania dotyczące składników zawartych w mleku.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejszy artykuł prezentuje metodę pobierania mleka od myszy oraz jeleni muntjaków, co ułatwia badania nad odpornością bierną oraz identyfikację patogenów. Technika ta jest kosztowo efektywna i łatwa do opanowania, dzięki czemu jest dostępna dla różnych eksperymentów naukowych.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauka
- Biologia
- Modele zwierzęce
Wprowadzenie
- Pobieranie mleka pomaga w zrozumieniu odporności biernej.
- Umożliwia ono identyfikację patogenów odpowiedzialnych za transmisję wertykalną.
- Myszy transgeniczne mogą być wykorzystywane do komercyjnej produkcji białek.
- Metoda ta ma zastosowanie zarówno w przypadku myszy, jak i muntjaka Reevesa.
Cel badania
- W celu zademonstrowania prostej techniki pobierania mleka.
- W celu ułatwienia badań w dziedzinie immunologii oraz studiów nad patogenami.
- W celu zapewnienia niedrogiej alternatywy dla istniejących metod.
Zastosowane metody
- Podawanie oksytocyny w celu stymulacji wypływu mleka.
- Znieczulenie zwierzęcia w celu bezpiecznego pobrania materiału.
- Ręczne wyciskanie mleka przez badaczy.
- Zapewnienie bezpieczeństwa zwierzęcia podczas wybudzania.
Główne wyniki
- Pozyskanie od 5 do 30 mililitrów mleka muntjaka podczas jednej sesji.
- Pozyskanie do 450 mikrolitrów mleka mysiego podczas jednej sesji.
- Technika ta jest stosunkowo niedroga w porównaniu z metodami specjalistycznymi.
- Łatwa do opanowania przez badaczy.
Wnioski
- Metoda ta zapewnia praktyczne podejście do pobierania mleka.
- Wspiera ona różnorodne eksperymenty naukowe z zakresu immunologii.
- Umożliwia lepsze zrozumienie roli mleka w odporności oraz w transmisji chorób.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Niezawodne pobieranie mleka z modeli małych zwierząt umożliwia prowadzenie badań mechanistycznych nad transmisją pionową, odpornością bierną oraz biologią gruczołów mlekowych w badaniach przedklinicznych. Ta przystępna metoda wspiera wczesne etapy odkryć i procesy translacyjne, zapewniając wystarczające objętości próbek do dalszych analiz immunologicznych i patogennych. Niski koszt oraz minimalne wymagania sprzętowe ułatwiają szersze zastosowanie tej metody w portfolio badawczo-rozwojowych analizujących mechanizmy chorób w relacji matka-potomstwo.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne etapy odkrywania i walidacja celu
- Umożliwia badanie transmisji patogenów z matki na potomstwo w kontrolowanych modelach zwierzęcych.
- Wspiera mechaniczną weryfikację hipotez dotyczących odporności biernej i biologii laktacji.
- Zapewnia walidację funkcjonalną celów zaangażowanych w procesy chorobowe przenoszone za pośrednictwem mleka.
Przesiewanie i opracowywanie testów
- Służy do pozyskiwania zwalidowanych próbek mleka do ilościowych analiz immunologicznych oraz testów wykrywania patogenów.
- Ułatwia standaryzację analiz poprzez zapewnienie powtarzalnego pobierania próbek w różnych grupach badawczych.
- Umożliwia skalowalne pozyskiwanie próbek w ramach procesów przesiewowych bez konieczności stosowania specjalistycznego sprzętu.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Umożliwia dopasowanie wyników z modeli zwierzęcych do istotnych dla choroby pytań dotyczących transmisji pionowej i odporności.
- Zapewnia ciągłość od wyników na etapie odkryć do przedklinicznej walidacji dróg rozwoju chorób w relacji matka-niemowlę.
- Dostarcza danych skorygowanych o ryzyko w celu rozwoju hipotez terapeutycznych dotyczących relacji matka-potomstwo.
Integracja potoku i procesu roboczego
Ta metoda pobierania mleka integruje się z wczesną fazą odkrywania i kontinuum przedklinicznym, wspierając procesy badawcze od testowania hipotez po badania translacyjne nad zdrowiem matki i niemowlęcia.
- Biologia odkrywcza: Wspomaga badania oparte na hipotezach w zakresie laktacji, odporności oraz przenoszenia patogenów.
- Przesiewanie: Zapewnia powtarzalne, ilościowe próbki mleka do dalszego opracowywania testów analitycznych.
- Analityka: Umożliwia pomiar biomarkerów immunologicznych i związanych z patogenami w pobranym mleku.
- Badania translacyjne: Łączy wyniki uzyskane na modelach zwierzęcych z badaniami przedklinicznymi nad pionową transmisją chorób.
- Zastosowania instytucjonalne: Oferuje zestandaryzowany, niskokosztowy protokół, który można dostosować do wielu programów badawczych.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorstwowy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną w modelach chorób matka-potomek oraz w walidacji celów terapeutycznych.
- Wartość operacyjna: Poprawia powtarzalność i skalowalność pobierania próbek mleka w różnych badaniach.
- Wartość strategiczna: Wspiera efektywne podejmowanie decyzji go/no-go w programach terapeutycznych dla matek i niemowląt.
- Wpływ na portfolio: Redukuje bariery techniczne, umożliwiając priorytetyzację badań nad transmisją pionową z uwzględnieniem ryzyka.
Uwagi dotyczące wdrożenia
- Wymagana jest podstawowa wiedza z zakresu obsługi zwierząt oraz znieczulania w celu bezpiecznego i efektywnego pobierania próbek.
- Wymagane jest minimalne oprzyrządowanie: standardowe pipety do myszy, probówki stożkowe dla jeleni oraz sterylne materiały.
- Standaryzacja między zespołami jest zapewniona przez jasne kroki procedury i powtarzalne wyniki.
- Metoda jest adaptowalna do różnych modeli małych zwierząt przy niewielkich korektach protokołu w zależności od potrzeb.
- Wydajność próbek może się różnić w zależności od gatunku, etapu laktacji i biegłości operatora.
