Name: Metody zbierania mleka dla myszy i jelenia Muntjac Reevesa (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Poznaj metodę zbierania mleka u myszy i jeleni Muntiacus reevesi przy użyciu oksytocyny i znieczulenia. Ta technika umożliwia badania nad odpornością bierną i identyfikacją patogenów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Te eksperymenty zostały sfinansowane przez #RAI093634A grantu NIH. Wyrażamy ogromną wdzięczność dr Jenny Powers za pomoc w doju muntjac.

1. Protokół dojenia myszy
Metody opisane w tym protokole zostały zatwierdzone przez IACUC.
1. Oddzielenie matki od potomstwa
<ol>
	<li>Wybierz matkę, która ma być dojona. Wybierz matkę z miotem 4 lub więcej młodych, która jest 8-12 dni po porodzie, aby zapewnić maksymalny odbiór mleka - chociaż odbiór jest możliwy w dowolnym momencie po porodzie do 21 dni.</li>
	<li>Oddzielić matkę od ściółki co najmniej 2 godziny przed udojem. 
	Uwaga: W przypadku chęci wydojenia więcej niż jednej matki w danym okresie czasu, dopuszczalne jest trzymanie oddzielonych matek w tej samej klatce z odpowiednim zaopatrzeniem w pokarm i wodę.</li>
</ol>
2. Podawanie oksytocyny, środka znieczulającego i lubrykantu do oczu
<ol>
	<li>Podawać dootrzewnowo (IP) 2 j.m./kg oksytocyny. Oksytocyna jest hormonem, który działa na gruczoły sutkowe samic w okresie laktacji, stymulując uwalnianie mleka. Oksytocynę można nabyć od weterynarza.</li>
	<li>Podawać mieszaninę znieczulającą zawierającą 80-100 mg/kg ketaminy w połączeniu z 5-10 mg/kg ksylazyny IP. Na przykład 10 ml podstawowej mieszaniny znieczulającej można przygotować z wyprzedzeniem dla myszy o wadze około 30 g i będzie ona zawierać 0,1 ml ksylazyny, 8,9 mlH2Oi 1,0 ml ketaminy. 0,25 ml całkowitego środka znieczulającego uspokoi mysz tej wielkości na około 20-30 minut, co powinno zapewnić odpowiedni czas na pobranie mleka. 
	Uwagi: Aby ustalić, czy zwierzę zostało pomyślnie znieczulone, delikatnie połóż je na brzuchu na twardej powierzchni; Nie powinna poruszać stopami ani próbować wstać, jeśli jest w pełni znieczulona. W przypadku, gdy mysz nie jest w pełni znieczulona pierwotną dawką, badacz może podać kolejne 1/4 lub 1/2 pierwotnej dawki mieszaniny znieczulającej, w zależności od wielkości myszy i/lub poziomu uspokojenia, który mysz już osiągnęła. Może to jednak zwiększyć ryzyko wystąpienia niepożądanej reakcji na znieczulenie, a także może spowodować, że mysz będzie głębiej znieczulona i/lub znieczulona przez dłuższy czas. 
	Uwaga: W przypadku dojenia więcej niż jednej matki konieczne jest rozłożone w czasie podawanie oksytocyny i zastrzyków znieczulających ze względu na krótki okres półtrwania oksytocyny i czas sedacji ketaminy i ksylazyny.</li>
	<li>Nałóż niewielką ilość lubrykantu do oczu w kącikach każdego oka i rozprowadź, aby zapobiec wysuszeniu oczu myszy podczas znieczulenia.</li>
</ol>
3. Odbiór mleka
Najłatwiej jest przeprowadzić zbiórkę mleka przez dwóch badaczy: jednego badacza, który trzyma znieczuloną mysz podczas ręcznego odciągania mleka (określanego jako R1), a drugiego badacza zbiera mleko ( R2). Ta metoda może być również wykonywana z jedną osobą, jeśli mysz jest zabezpieczona na płaskiej powierzchni, aby uniknąć obrażeń.
<ol>
	<li>R2 powinien być wyposażony w sterylne waciki nasączone alkoholem, pipetarkę P-200, czystą końcówkę pipety do każdej myszy oraz pojemnik do przechowywania mleka, taki jak probówka Eppendorfa o pojemności 1,5 ml lub kriowial o pojemności 1,2 ml (patrz tabela materiałów).</li>
	<li>Gdy oksytocyna zacznie działać, upływ mleka stanie się widoczny w okolicy sutka myszy (patrz ryc. 1A). R1: Rozpakuj sterylną wkładkę nasączoną alkoholem i delikatnie przetrzyj obszar sutkowy myszy, aby oczyścić obszar przed dojeniem. Ręcznie odciągaj pokarm ze smoczka, delikatnie masując i ściskając tkankę sutkową kciukiem i palcem wskazującym ruchem do góry, aż u podstawy smoczka zacznie tworzyć się widoczna kropla mleka.</li>
	<li>Dociśnij tłok pipetmana P-200 do pierwszego oporu, aby uwolnić powietrze z końcówki pipety i przygotować się do pobierania mleka.</li>
	<li>Umieść końcówkę pipety na górze kropli mleka i delikatnie wciągnij mleko do końcówki pipety, powoli zwalniając nacisk na tłok. Uważaj, aby nie umieszczać końcówki zbyt blisko smoczka lub skóry (patrz Rysunek 1B). Nie ma potrzeby całkowitego zwalniania tłoka, ponieważ spowoduje to pociągnięcie mleka do górnej części końcówki pipety i utrudni wylanie często lepkiego mleka do pojemnika do przechowywania.</li>
	<li>Wylać mleko do pojemnika, naciskając kciukiem tłok poza pierwszy ogranicznik (patrz Rysunek 1C). Aby ułatwić wydalanie małych objętości, należy docisnąć końcówkę pipety do boku probówki, tak aby nie doszło do utraty płynu.</li>
	<li>Kontynuuj ręczne odciąganie mleka z każdego smoczka, przesuwając się w kierunku zgodnym lub przeciwnym do ruchu wskazówek zegara, aby nie pominąć żadnego smoczka. Dopuszczalne i użyteczne jest zarówno powracanie do mleka z tego samego smoczka, jak i ciągłe odciąganie pokarmu, jeśli produkuje on więcej mleka niż inny.</li>
</ol>
4. Odwrócenie znieczulenia w zaporze
<ol>
	<li>W większości przypadków często zdarza się, że zapora zaczyna się budzić podczas procesu doju. Jeśli tak nie jest, umieść komatkę w klatce pośrednio pod źródłem ciepła, takim jak podgrzewany koc krążący, aż zacznie się budzić. 
	Uwaga: Gdy tama zacznie się budzić, uważnie obserwuj jej aktywność, dopóki nie będzie w stanie samodzielnie chodzić po klatce.</li>
	<li>Gdy tama będzie poruszać się po klatce bez walki, umieść ją z powrotem w oryginalnej klatce z miotem. Nie zaobserwowano żadnych negatywnych skutków w odniesieniu do zdolności szczeniąt do karmienia po pobraniu mleka.</li>
</ol>
2. Protokół doju Muntjac
Metody opisane w tym protokole zostały zatwierdzone przez IACUC.
1. Oddzielenie łani od potomstwa
<ol>
	<li>Wybierz łanię do dojenia. Jeleń muntjac Reevesa zazwyczaj rodzi jednego jelonka2. Wydoić łanię dzień po urodzeniu, aby umożliwić jelonkowi dostęp do niezbędnych składników odżywczych zawartych w siarze8, 
	Uwaga: Jelonek zwykle chowa się i nie pojawia się ponownie podczas zabiegu; Rozdzielenie pary matka-potomstwo nie jest konieczne.</li>
</ol>
2. Podawanie oksytocyny, środka znieczulającego i lubrykantu do oczu
<ol>
	<li>Podawać domięśniowo 10 j.m./kg oksytocyny (IM). Oksytocyna jest hormonem, który działa na gruczoły sutkowe samic karmiących piersią, stymulując wydzielanie mleka. Oksytocynę można nabyć od weterynarza.</li>
	<li>Podawać środek znieczulający BAM IM11 zawierający butorfanol 0,45 mg/kg, azaperon 0,25 mg/kg, medetomadyna 0,07 mg/kg. Jedna dawka mieszanki znieczulającej BAM uspokaja muntjaca na około 20-30 minut, co zapewnia wystarczająco dużo czasu na całkowite pobranie mleka. Inną opcją znieczulenia jest midazolam w dawce 1-2 mg/kg, który uspokaja muntjaca na około 10-15 minut. Chociaż zapewnia to odpowiedni czas na pobranie mleka, ten środek znieczulający jest metabolizowany szybciej niż BAM i zwierzę może próbować uciec pod koniec krótszego okresu. 
	Uwaga: Minimalna reakcja na ból, drobne odruchy po dotknięciu uszu, a następnie zdolność R1 do utrzymania MJ bez walki wskazują, że zwierzę zostało pomyślnie znieczulone. 
	Uwaga: W przypadku, gdy muntjac nie jest w pełni znieczulony pierwotną dawką, badacz może podać kolejne 1/4 lub 1/2 pierwotnej dawki mieszaniny znieczulającej, w zależności od wielkości zwierzęcia i/lub poziomu sedacji, który został już osiągnięty. Może to jednak zwiększyć ryzyko wystąpienia niepożądanej reakcji na znieczulenie, a także może spowodować, że muntjac będzie głębiej znieczulony i/lub znieczulony przez dłuższy czas.</li>
	<li>Nałóż niewielką ilość lubrykantu w kącikach każdego oka i rozprowadź, aby zapobiec wysuszeniu oczu muntjaca podczas znieczulenia.</li>
</ol>
3. Odbiór mleka
Najłatwiej jest przeprowadzić zbiórkę mleka przez dwóch badaczy; jeden badacz trzyma znieczulonego muntjaca na kolanach podczas ręcznego odciągania mleka (określa się jako R1), a drugi badacz utrzymuje głowę muntjaca w wygodnej i bezpiecznej pozycji i zbiera mleko (R2).
<ol>
	<li>W zależności od zastosowanego środka znieczulającego, dojenie powinno odbywać się 1) w kojcach, aby zapewnić bezpieczne miejsce w przypadku przebudzenia się podczas zabiegu (indukowane midazolamem) lub 2) w przedpokoju bez ściółki w celu utrzymania czystości (indukowane przez BAM).</li>
	<li>R1 i R2 powinny być wyposażone w gazę nasączoną etanolem i kilka stożkowych probówek polipropylenowych o pojemności 15 ml do przechowywania mleka.</li>
	<li>Gdy oksytocyna zacznie działać, upływ mleka stanie się widoczny w okolicy sutka muntjaca. R1: Zdezynfekuj dłonie i palce w rękawiczkach, a także całe wymię i każdy pojedynczy strzyk zwierzęcia za pomocą gazy nasączonej etanolem. R2: Trzymaj głowę muntjaca w bezpiecznej i wygodnej pozycji, aby ułatwić oddychanie i zapobiec niedomykalności żwacza. Trzymaj rurkę zbiorczą blisko dojonego strzyka, nie dotykając jej, aby zapobiec potencjalnemu zanieczyszczeniu.</li>
	<li>Odciągnij pokarm z jednego smoczka, delikatnie ściskając tkankę sutkową kciukiem i palcem wskazującym ruchem w górę, aż smoczek pokryje się mlekiem, a następnie delikatnie rozwałkuj mleko ze smoczka do rurki, którą trzyma R2 (patrz Rysunek 2).</li>
	<li>Uwaga: Mleko wypływa strumieniem, dlatego ważne jest, aby rurka zbiorcza R2 była umieszczona w taki sposób, aby zmarnować niewiele mleka lub nie marnować go wcale.</li>
	<li>Wymię muntjaca jest podzielone na ćwiartki. R1: Kontynuuj odciąganie pokarmu z każdej ćwiartki, aż mleko przestanie płynąć swobodnie. Jeżeli nie można odciągnąć pokarmu z jednego strzyka, należy odciągnąć mleko ze wszystkich pozostałych strzyków przed powrotem do pierwszego. Dopuszczalne i użyteczne jest zarówno powracanie do mleka z tego samego smoczka, jak i ciągłe odciąganie pokarmu, jeśli produkuje on więcej mleka niż inny.</li>
</ol>
4. Odwrócenie znieczulenia u łania
Często zdarza się, że indukowane midazolamem łanie zaczynają się budzić podczas procesu dojenia. W większości przypadków łania będzie próbowała uciec, zanim całe mleko zostanie odciągnięte. Niewielkie ograniczenie stosuje się w celu zwiększenia wydajności mlecznej; Jednak bezpieczeństwo i komfort zarówno badaczy, jak i DOE są równie ważne.
<ol>
	<li>Podawać atipamezol w dawce 2,5 mg/mg medetodyny podskórnie w celu szybkiego odwrócenia działania znieczulonej przez BAM łani. 
	Uwaga: W przypadku obu rodzajów znieczulenia konieczne jest ścisłe obserwowanie łani, dopóki nie będzie w stanie samodzielnie chodzić bez potykania się lub upadku, a także będzie w stanie jeść i pić bez obawy o zachłyśnięcie lub zadławienie. Nie zaobserwowano żadnych negatywnych skutków w odniesieniu do zdolności jelonka do karmienia piersią po pobraniu mleka.</li>
</ol>

<ol><li>Dueling, S. Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi">http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi</a> (2004).</li>
<li>Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breeding+cycle+of+the+Formosan+Reeves+muntjac+%28Muntiacus+reevesi+micrurus%29+in+northern+Taiwan%2C+Republic+of+China%5BTitle%5D)+AND+%22Mammalia%22%5BJournal%5D)">Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China.</a> Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).</li>
<li>Browning, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+prions+from+mule+deer+and+elk+with+chronic+wasting+disease+to+transgenic+mice+expressing+cervid+PrP%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP.</a> J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).</li>
<li>Van de perre, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+antibody+via+mother%27s+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Transfer of antibody via mother's milk.</a> Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).</li>
<li>Maden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+modified+mice+produce+human+milk+protein%5BTitle%5D)+AND+%22BioNews%22%5BJournal%5D)">Genetically modified mice produce human milk protein.</a> BioNews. , (2009).</li>
<li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim%22%5BJournal%5D)">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li>
<li>Depeters, E. J., Hovey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+collecting+milk+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mammary+Gland+Biol.+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Methods for collecting milk from mice.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).</li>
<li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+yield+and+composition+in+mice%3A+effects+of+litter+size+and+lactation%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation.</a> 84 (1), 127-133 (1986).</li>
<li>Hedrich, H. J., Bullock, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The laboratory mouse.</a> , 735-736 (2004).</li>
<li>Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+is+required+for+nursing+but+is+not+essential+for+parturition+or+reproductive+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).</li>
<li>Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butorphanol-azaperone-medetomidine+for+immobilization+of+captive+white-tailed+deer%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer.</a> 45 (2), 457-467 (2009).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Mysz
Istnieje kilka czynników, które należy wziąć pod uwagę podczas pobierania mleka od myszy, w tym: 1) ilość czasu przeznaczonego na pobranie, 2) podana dawka oksytocyny, 3) liczba młodych, które matka obecnie karmi i 4) czas, jaki minął od porodu w momencie pobrania. Opierając się na wcześniejszych badaniach jako wytycznych, postanowiliśmy zoptymalizować warunki dla wydajności mlecznej.
Wcześniejsze badania bezpośrednio korelowały wydajność mlecz...

Modele zwierzęce dostarczają wglądu w patologię choroby, którego nie można uzyskać za pomocą analizy in vitro. Aby zapewnić najbardziej skuteczne wyniki, ważne jest, aby użyć modelu zwierzęcego, który jest ściśle związany z chorobą i gatunkiem będącym przedmiotem zainteresowania. Na przykład muntjac Reevesa (Muntiacus reevesi), mały jeleń azjatycki1,2 i transgeniczne myszy wyrażające białko prionowe jeleniowatych (CerTgPrP)3 są użytecznymi modelami zwierzęcymi dla gatunków jeleniowatych. Oba gatunki są wielorujowe, co pozwala na rozmnażanie się przez cały rok, a zatem są stałym źródłem tkanek i płynów związanych z ciążą w celu badania określonych mechanizmów w biologii jeleniowatych. Badania nad mlekiem mają szeroki wachlarz zastosowań, które są prostsze (i nietańsze) realizowane w modelach zwierzęcych niż u ludzi. Naukowcy mogą badać mleko i siarę jako potencjalne źródło 1) przenoszenia chorób zakaźnych, 2) immunoglobulin przenoszonych z matki na potomstwo w procesie rozwoju odporności biernej4 i 3) laktoferyny, białka znajdującego się w mleku matki biorącego udział w odporności biernej, które naukowcy próbują obecnie wyprodukować komercyjnie5.
Zebranie znacznej ilości mleka od małych zwierząt może okazać się trudnym zadaniem. Rogers zaproponował metodę zbierania mleka od szczurów6, która została następnie zastosowana u myszy. DePeters i Hovey zaproponowali dwie metody zbierania mleka, jedną wykorzystującą ręcznie generowaną próżnię wytwarzaną przez gumową gruszkę pipety przymocowaną do pipety Pasteura, a drugą wymagającą budowy jednostki udojowej, która jest następnie podłączona do źródła podciśnienia (takiego jak kran) w celuzbierania mleka myszy7. Tutaj proponujemy prostą, tanią metodę zbierania mleka zarówno od myszy, jak i jelenia muntjac Reevesa, która wymaga jedynie łatwo dostępnego sprzętu laboratoryjnego i podstawowych umiejętności technicznych. Nasza metoda pozwala uzyskać wystarczającą ilość mleka do różnych zastosowań.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Materiały&#8212; Mysia</td></tr><tr><td>Ketamina (KetaVed 100 mg/ml) (dawka: 80-100 mg/kg)</td><td>MWI/Vedco</td><td>011075</td><td></td></tr><tr><td>Ksylazyna (TranquiVed 100 mg/ml) (dawka: 5-10 mg/kg)</td><td>MWI/Vedco</td><td>NADA 139236</td><td></td></tr><tr><td>Smar do oczu</td><td>MWI/Apexa</td><td>701013</td><td></td></tr><tr><td>Oksytocyna (2 IU/kg)</td><td>Vet One</td><td>501013</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Materials&#8212; Muntjac</td></tr><tr><td>Midazolam (1-2 mg/kg)</td><td>Amerisource Bergen Drug Corp</td><td>924326</td><td>Opcjonalnie: badacz może stosować Midazolam samodzielnie lub kombinację BAM jako środek znieczulający</td></tr><tr><td>Winian butorfanolu (Torbugesic) (0,45 mg / kg)</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>NADA 135-780</td><td></td></tr><tr><td>Winian azaperonu (0,25 mg / kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medetomadine HCl (0,07 mg / kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlorowodorek antypamezolu (Antisedan) (dawka: 0,25 mg/kg)</td><td>Orion Corporation</td><td>NADA 141-033</td><td></td></tr><tr><td>Oksytocyna (10 IU/kg)</td><td>Vet One</td><td>501013</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Sprzęt&#8212; Mysz</td></tr><tr><td>P-200 Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; l końcówki do pipet</td><td>Light Labs</td><td>B-2004-SH</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawki 1 ml</td><td>MWI</td><td>005427</td><td></td></tr><tr><td>igły 27 G</td><td>MWI</td><td>002031</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Sprzęt&#8212; Probówki stożkowe Muntjac</td></tr><tr><td>15 ml</td><td>VWR</td><td>21008-918</td><td></td></tr><tr><td>Igły 22 G</td><td>MWI</td><td>873</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawki Luer Lock 3 ml</td><td>MWI</td><td>001377</td><td></td></tr></tbody></table>

metody zbierania mleka dla myszy i jelenia muntjac reevesa

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Modele zwierzęce są powszechnie używane w laboratoriach badawczych do osiągnięcia tego, co normalnie byłoby uważane za niepraktyczne w rodzimym gospodarzu patogenu. Pobieranie mleka od zwierząt daje naukowcom możliwość zbadania wielu aspektów reprodukcji, w tym transmisji pionowej, odporności biernej, biologii gruczołu sutkowego i laktacji. Uzyskanie odpowiedniej ilości mleka do tych badań jest trudnym zadaniem, zwłaszcza w przypadku małych modeli zwierzęcych. Tutaj ilustrujemy niedrogą i łatwą metodę zbierania mleka u myszy i jeleni muntjac Reevesa, która nie wymaga specjalistycznego sprzętu ani intensywnego treningu. Ta szczególna metoda wymaga dwóch badaczy: jednego do odciągania mleka i ustabilizowania zwierzęcia, a drugiego do zebrania mleka do odpowiedniego pojemnika z modelu Muntjac lub myszy. Model mysi wymaga również użycia pipetmana P-200 i odpowiednich końcówek do pipet. Chociaż metoda ta jest tania i stosunkowo łatwa do wykonania, należy pamiętać, że znieczulenie zwierzęcia jest wymagane w celu optymalnego pobrania mleka.

Mysz
Z naszych eksperymentów wynika, że możliwe jest pobranie około 100-400 μl mleka od jednej myszy laboratoryjnej, w zależności od kilku zmiennych. Zmienne te obejmują 1) czas przeznaczony na pobieranie, 2) dawkę podanej oksytocyny, 3) liczbę piskląt, które samica aktualnie karmi, oraz 4) czas, jaki upłynął od porodu. Nasze badania wykazały, że najwyższą wydajność uzyskuje się, gdy samice są odseparowane od potomstwa przez co najmniej 2 hr, a na dojenie jednej myszy przeznac...

Pobieranie mleka z modeli zwierzęcych ułatwia różne ścieżki badań: zrozumienie odporności biernej, identyfikację patogenów odpowiedzialnych za transgeniczne przenoszenie i, dzięki wykorzystaniu transgenicznych myszy, nawet komercyjną produkcję białek znajdujących się w ludzkim mleku matki. Tutaj ilustrujemy prostą metodę zbierania mleka u myszy i jeleni muntjac Reevesa.

Metody zbierania mleka dla myszy i jelenia Muntjac Reevesa

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest zademonstrowanie sposobu pobierania mleka od myszy lub jelenia mutt jack (Reeve's muntjac) do wykorzystania w różnych eksperymentach naukowych. Jest to realizowane poprzez najpierw podanie zwierzęciu oksytocyny w celu stymulacji wydzielania mleka, a następnie znieczulenie zwierzęcia. Następnie pierwszy badacz ręcznie wyciska mleko, podczas gdy drugi badacz je zbiera.Ostatnim krokiem jest zapewnienie bezpieczeństwa zwierzęciu podczas wybudzania z narkozy. Ostatecznie podczas jednej sesji można zebrać od około 5 do 30 mililitrów mleka mutt jack lub do 450 mikrolitrów mleka mysiego. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak te wymagające specjalistycznego sprzętu, jest fakt, że jest ona stosunkowo tania i łatwa do opanowania.Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na kilka pytań naukowych, na przykład czy patogen może zostać przekazany z matki na potomstwo poprzez mleko. Osoby rozpoczynające pracę z tą metodą zazwyczaj szybko tracą zapał, ponieważ prawidłowe pozyskiwanie mleka wymaga praktyki. W przeprowadzeniu tej procedury w celu stymulacji wydzielania mleka u myszy laktującej pomoże mi Stephanie full away, technik

milk-collection-methods-for-mice-and-reeves-muntjac-deer

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Metody zbierania mleka dla myszy i muntjaków Reeves'a

Niniejszy protokół przedstawia metody ekstrakcji plemników z jąder samców oraz następującą po niej inseminację samic myszy. Procedura ta jest przydatna w badaniach rozwojowych wymagających precyzyjnego określenia czasu, a także w pracach nad organizmami transgenicznymi.

Pozyskiwanie nasienia i sztuczne zapłodnienie myszy

Ta metoda opisuje sposób preparowania oraz oceny rozwoju i funkcji gruczołów mlekowych u myszy. Wycięte gruczoły mlekowe oceniane są pod kątem stopnia rozwoju za pomocą metody całego preparatu (whole mount), natomiast wydzielanie mleka jest oceniane przy użyciu testu skurczu komórek mioepitelialnych indukowanego oksytocyną.

Ocena rozwoju i funkcji gruczołu mlekowego w modelach mysich

Przezbrzuszne ultrasonografie jest opisywane jako skuteczny, nieinwazyjny sposób oceny statusu reprodukcyjnego u jelenia muntjac Reevesa. Metody te można wykorzystać do wczesnej diagnozy ciąży i oceny żywotności płodu. Przyszłe zastosowania tej techniki obejmują szacowanie wieku ciążowego i wpływu chorób matki na rozwój płodu.

USG przezbrzuszne w diagnostyce ciąży u jelenia Muntjac Reevesa

Mleko jest podstawowym źródłem pożywienia dla noworodka. Analiza składników mleka może dostarczyć informacji na temat czynników matczynych, które wpływają na zdrowie potomstwa. Protokół ten opisuje ręczną metodę pobierania próbek mleka od szczura w okresie laktacji, które można następnie wykorzystać do dalszej analizy.

Pobieranie mleka u szczura za pomocą kapilar i oznaczanie zawartości tłuszczu w mleku za pomocą kremokrytu

Różnice fenotypowe między populacjami jeleniowatych mogą być związane z genetyką lub odżywianiem na poziomie populacji; rozpoznanie, które z nich jest trudne w naturze. Niniejszy protokół opisuje, w jaki sposób zaprojektowaliśmy kontrolowane badanie, w którym wyeliminowano różnice w odżywianiu. Odkryliśmy, że zmienność fenotypowa samców jelenia bielika była bardziej ograniczona przez odżywianie niż genetykę.

Protokół oceny względnego wpływu środowiska i genetyki na wzrost poroża i ciała długowiecznych jeleniowatych

To badanie informuje o próbkach krwi z żyły ogonowej u myszy przy użyciu systemu probówek do ekstrakcji próżniowej z lupą okularową. Nasza metoda jest łatwa do przećwiczenia i może być stosowana do powtórnego pobierania próbek krwi u myszy.

Zmodyfikowane pobieranie krwi z żył ogonowych myszy nieznieczulonych za pomocą próżniowego systemu pobierania krwi i lupy okularowej

Ten artykuł opisuje i demonstruje podawanie szczepionek donosowych oraz pobieranie mleka od królików w okresie laktacji (Oryctolagus cuniculus) jako sposób oceny odporności błony śluzowej w translacyjnie odpowiednim modelu immunizacji matki.

Immunizacja donosowa i pobieranie mleka w badaniach immunizacji matek u białych królików nowozelandzkich (Oryctolagus cuniculus)

Tutaj opisujemy podawanie leków za pomocą mikropipet (MDA) jako alternatywną metodę do doustnego podawania leków, która zachęca zwierzę badawcze do łatwego przyjmowania leków przy minimalnym stresie i dyskomforcie.

Stosowanie podawania leków pod kontrolą mikropipet jako metody alternatywnej dla doustnego podawania przez zgłębnik w modelach gryzoni

Ten artykuł opisuje, jak złożyć urządzenie, które może być używane do zbierania mleka od myszy laboratoryjnych. To urządzenie jest niedrogie, przenośne i umożliwia pobranie 0,1–0,5 ml mleka przez jedną przeszkoloną osobę. Dołączony jest również szczegółowy protokół doju.

Skuteczna jednoosobowa technika pobierania próbek mleka od myszy laboratoryjnych

Przedstawiamy protokół optymalizowanej techniki pobierania krwi u myszych osób poprzez nakłucie żył twarzy za pomocą lanceta. Stosujemy tę technikę wraz z oceną cytometryczną przepływową do charakteryzowania fenotypów komórkowych szczepów transgenicznych, kongenicznych i raportowych. Nadaje się także do analizy cytokiny w surowicy oraz badań nad cukrzycą.

Nakłucie żył twarzy do pobierania krwi myszy

Poznaj metodę zbierania mleka u myszy i jeleni Muntiacus reevesi przy użyciu oksytocyny i znieczulenia. Ta technika umożliwia badania nad odpornością bierną i identyfikacją patogenów.

Metody zbierania mleka dla myszy i jelenia Muntjac Reevesa

Przeglądaj więcej filmów