Analiza inicjacji translacji w warunkach stresowych za pomocą profilowania polisomów

Ogólnym celem tej procedury jest zmierzenie wpływu warunków stresowych na translację, inicjację komórek i tkanek ssaków poprzez profilowanie polisomów. Osiąga się to poprzez najpierw leczenie komórek rakowych ssaków lekiem przeciwnowotworowym, a następnie przygotowanie ekstraktów komórkowych. Drugim krokiem jest zrobienie sacharozy, gradientów.

Następnie ekstrakty komórkowe są ładowane na sacharozę, gradienty i ultra odwirowywane w celu oddzielenia frakcji rybosomalnych. Ostatecznie przeprowadza się analizę western blot przy użyciu specyficznych przeciwciał w celu oceny związku badanych białek z polisomem. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącą metodą, taką jak znakowanie metaboliczne, jest to, że pozwala nam ocenić wpływ warunków stresu na etap inicjacji translacji.