Name: Ocena wydajności funkcjonalnej w modelu myszy Mdx (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-27T21:45:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Poznaj metody oceny funkcji mięśniowej w modelu myszy mdx przy użyciu testów siły chwytu, wiszenia i bieżni. Te nieinwazyjne procedury umożliwiają badanie wpływu terapii na mięśnie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować Margriet Hulsker za jej pomoc fotograficzną i pomoc w uzyskaniu zdjęć myszy, a recenzentom za ich bardzo konstruktywne komentarze. Prace te były wspierane przez ZonMw, TREAT-NMD (numer umowy LSHM-CT-2006-036825) oraz Duchenne Parent Project.

Opisane tutaj eksperymenty zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki Zwierząt (DEC) Centrum Medycznego Uniwersytetu w Lejdzie (LUMC). Myszy zostały wyhodowane przez ośrodek dla zwierząt LUMC i trzymane w indywidualnie wentylowanych klatkach z 12-godzinnymi cyklami światła i ciemności. Mieli oni ad libitum dostęp do wody i standardowej karmy.
Podczas wykonywania któregokolwiek z opisanych poniżej testów funkcjonalnych, warunki eksperymentalne muszą być ściśle kontrolowane, aby zmniejszyć zmienność. Najlepiej używać myszy dopasowanych do wieku i płci, ponieważ wydajność różni się w zależności od wieku i płci. Myszy należące do tego samego miotu powinny być losowo przydzielane do grup eksperymentalnych. Zwierzęta powinny być badane przez ten sam podmiot, który jest ślepy na grupy doświadczalne. Testy powinny być wykonywane o tej samej porze dnia i w ten sam dzień powszedni, w tym samym pomieszczeniu, aby wyrównać zapachy, hałasy itp.14 Duże różnice między poszczególnymi myszami i punktami czasowymi można zaobserwować dla wszystkich testów funkcjonalnych, dlatego należy użyć 6-8 myszy / grupę eksperymentalną. Wyniki testów funkcjonalnych mogą się również znacznie różnić między różnymi szczepami wsobnymi typu dzikiego. Dlatego eksperymentalne i kontrolne myszy typu dzikiego powinny zawsze mieć odpowiednie tła (w przypadku myszy mdx należy użyć szczepu C57BL/10ScSnJ typu dzikiego). Wszystkie opisane tutaj dane zostały uzyskane z użyciem szczepu C57BL/10ScSnJ typu dzikiego, który od tego momentu nazywamy typem dzikim. Opisane tutaj testy mogą być stosowane podłużnie od co najmniej 1-19 miesiąca życia u myszy mdx i dzikich typów. Testy nie powinny być powtarzane częściej niż raz w tygodniu, aby myszy nie straciły zainteresowania i chęci do wykonania zadania.
1. Test siły chwytu kończyn przednich
Użyj testu siły chwytu kończyn przednich, aby zmierzyć siłę kończyn przednich. Test opiera się na tendencji myszy do instynktownego chwytania siatki, gdy jest zawieszona na ogonie15 i jest zaadaptowany z <a href="http://www.treat-nmd.eu/downloads/file/sops/dmd/MDX/dmd_m.2.2_001.pdf" target="_blank">DMD_M2.2.001.pdf</a>.
<ol>
	<li>Konfiguracja aparatury: Przymocuj siatkę do przetwornika siły, który mierzy maksymalną siłę wywieraną przez mysz na siatkę podczas ciągnięcia. Upewnij się, że ustawienie jest włączone w trybie szczytowego napięcia (T-PK) do ciągnięcia. Jednostki siły można regulować w uncjach siły, gramach siły, funtach siły, kilogramach siły lub niutonach. 
	Uwaga: Preferujemy pracę z gramami jako jednostką wartości. Na rynku dostępnych jest wiele mierników, ale tylko przetworniki osiowe dają wiarygodne wyniki, ponieważ na przetworniki siły typu dźwigniowego negatywnie wpływają prawa fizyczne efektu dźwigni. W przypadku prętów o średnicy 1-2 mm można użyć nieelastycznej siatki lub trójkąta.</li>
	<li>Przed badaniem należy ocenić masę ciała myszy, aby umożliwić normalizację masy ciała.</li>
	<li>Użyj gramów jako jednostki wartości. Zresetuj miernik na początku każdego nagrania.</li>
	<li>Wyjmij mysz z klatki, chwytając ogon i przesuwając go poziomo w kierunku siatki.</li>
	<li>Sprawdź, czy mysz mocno chwyta siatkę obiema przednimi łapami.</li>
	<li>Odciągnij mysz od siatki, aby jej uchwyt został zerwany; największa siła przyłożona do siatki zostanie pokazana na wyświetlaczu przetwornika, który może być rejestrowany ręcznie lub automatycznie.</li>
	<li>Weź pod uwagę tylko pociągnięcia, w których mysz wykazuje opór wobec eksperymentatora. Odrzuć środki, w których użyto tylko jednej przedniej łapy lub tylnych kończyn i w których mysz obracała się podczas ciągnięcia.</li>
	<li>Pozwól myszy pociągnąć za siatkę trzy razy z rzędu, a następnie włóż ją z powrotem do klatki na okres odpoczynku trwający co najmniej jedną minutę. Uwaga: pomiędzy seriami pociągnięć konieczny jest okres odpoczynku, aby mysz mogła się zregenerować i uniknąć wytworzenia nawyków.</li>
	<li>Następnie pozwól myszy wykonać cztery serie pociągnięć, z których każde następuje krótki okres odpoczynku. W ten sposób mysz przeciągnęła w sumie 15x (3 pociągnięcia x 5 razy = 15 pociągnięć).</li>
	<li>Określ maksymalną siłę chwytu i znormalizuj masę ciała, biorąc średnią z trzech najwyższych wartości z 15 zebranych wartości.</li>
	<li>Opcjonalnie: Określ zmęczenie, obliczając spadek między średnią z pierwszych dwóch a dwiema ostatnimi seriami pociągnięć 1 + 2 + 3 = A, 4 + 5 + 6 = B, 10 + 11 + 12 = C i 13 + 14 + 15 = D. Wzór: (C+D)/(A+B) daje wartość 1 dla myszy, które nie są zmęczone. Można to wyrazić w procentach, tak że mysz bez zmęczenia ma wartość 0%, a mysz, której kończyny przednie są całkowicie zmęczone, ma wartość 100%.</li>
</ol>
2. Wiszące testy
Za pomocą testów wiszących można ocenić równowagę, koordynację i kondycję mięśni. Testy te opierają się na wiedzy, że myszy są chętne do pozostania wiszącymi na drucie lub siatce aż do wyczerpania16. Istnieją dwa charakterystyczne testy zwisu, w których na początku badania wykorzystuje się tylko dwie kończyny przednie lub wszystkie cztery kończyny, przy użyciu odpowiednio drutu lub siatki. Test wiszący z użyciem drutu i siatki to najdłuższa metoda czasu zawieszenia zaadaptowana odpowiednio z <a href="http://www.treat-nmd.eu/downloads/file/sops/dmd/MDX/DMD_M.2.1.004.pdf" target="_blank">DMD_M.2.1.004.pdf</a> i <a href="http://www.treat-nmd.eu/downloads/file/sops/dmd/MDX/DMD_M.2.1.005.pdf" target="_blank">DMD_M.2.1.005.pdf</a>. Stosowany jest stały limit zawieszenia wynoszący 600 sekund. Większość myszy typu dzikiego może wisieć przez 600 sekund, podczas gdy myszy dystroficzne nie. Aby skrócić czas poświęcany na wykonanie tego testu, ustalono maksymalny czas zawieszenia. Myszy, które wcześniej spadną z drutu lub siatki, otrzymują do dwóch dodatkowych prób. Ma to na celu upewnienie się, że myszy naprawdę nie są w stanie się zawiesić i nie upadają z powodu niezdarności.
<ol>
	<li>Próba zwisania z dwiema kończynami
	<ol>
		<li>Ustawienie aparatury: Mocno przymocuj wieszak z metalowej tkaniny o grubości 2 mm do półki za pomocą taśmy i trzymaj wieszak około 37 cm nad warstwą pościeli. Uwaga: alternatywnie można użyć metalowego drutu o szerokości 55 cm i grubości 2 mm, który jest szczelnie przymocowany między 2 pionowymi stojakami. Odległość 37 cm jest wystarczająca, aby zachęcić myszy do pozostania w zawieszeniu, ale także wystarczająco niska, aby zapobiec urazom myszy podczas upadku. Przewód nie powinien wibrować ani przemieszczać się podczas testu, ponieważ może to zakłócać działanie myszy.</li>
		<li>Trzymaj mysz za ogon i zbliż ją do drutu.</li>
		<li>Niech mysz chwyci drut tylko dwiema przednimi łapami i opuść tylne kończyny w taki sposób, aby mysz wisiała tylko z dwiema przednimi łapami na drucie (Rysunek 2B).</li>
		<li>Uruchom stoper bezpośrednio po zwolnieniu przycisku myszy. Po uwolnieniu silne myszy próbują złapać drut wszystkimi czterema kończynami i ogonem, co jest dozwolone (ryc. 2C).</li>
		<li>Gdy mysz zachowuje się niewłaściwie (np. balansuje na drucie lub celowo zeskakuje z drutu, jak pokazano na rysunkach 2D i 2E), zajmij się tym bezpośrednio, wymieniając mysz na przewodzie bez zatrzymywania timera.</li>
		<li>Gdy mysz spadnie z drutu, zatrzymaj minutnik i nagraj czas zawieszenia.</li>
		<li>Kiedy myszy będą w stanie wisieć przez 600 sekund, zdejmij je z drutu i włóż z powrotem do klatki. Myszy, które wypadną poniżej tego limitu, otrzymują maksymalnie dwie dodatkowe próby.</li>
		<li>Należy zapisać maksymalny czas zawieszenia (tj. najdłuższy czas próby) i wykorzystać go do dalszej analizy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Test wiszący z czterema kończynami
	<ol>
		<li>Konfiguracja aparatury: Do tego testu użyj ręcznie wykonanego kwadratu lub pokrywy dużej klatki dla szczura lub królika. Umieść siatkę 25 cm nad miękką ściółką, aby zapobiec zranieniu się myszy po upadku, ale także zniechęcić myszy do celowego zeskakiwania z siatki. Mocno zabezpiecz siatkę, aby eksperymentator nie musiał ręcznie przytrzymywać siatki podczas eksperymentu, ponieważ te ruchy mogą zakłócać działanie myszy.</li>
		<li>Umieść mysz na siatce tak, aby chwyciła ją czterema łapami.</li>
		<li>Odwróć siatkę tak, aby mysz wisiała i bezpośrednio uruchom stoper.</li>
		<li>Sesja testowa kończy się dla myszy, które są w stanie zawiesić się na czas 600 sekund. Daj myszom, które wcześniej wypadną z siatki, maksymalnie dwie dodatkowe próby.</li>
		<li>Do dalszej analizy należy wykorzystać maksymalny czas zawieszenia (tj. najdłuższy czas trwania próby).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Bieganie Rotarod
Za pomocą testu rotarod można określić siłę mięśni, koordynację, równowagę i kondycję17.
<ol>
	<li>Konfiguracja aparatury: W tym teście myszy muszą biegać na obracającej się rurce. Upewnij się, że stała prędkość jest ustawiona na 5 obrotów na minutę (obr./min) i że prędkość wzrasta od 5 do 45 obr./min w ciągu pierwszych 15 sekund po uruchomieniu. Po tym musi utrzymać swoją prędkość.</li>
	<li>Umieść myszy na rurze rotarodu, gdy obraca się on z wolną, stałą prędkością 5 obr./min. Jednocześnie można testować pięć myszy.</li>
	<li>Rozpocznij bieg, gdy wszystkie myszy zostaną ustawione. W ciągu pierwszych 15 sekund prędkość rury przyspiesza od 5 do 45 obr./min, po czym utrzymuje tę prędkość.</li>
	<li>Monitoruj przebieg. Czas pracy jest w sposób ciągły rejestrowany przez oprogramowanie. Czas pracy zatrzymuje się automatycznie, gdy mysz spadnie z rury, ponieważ aktywuje to pasek czasu umieszczony pod rurką. Zmień położenie myszy, które obracają się w przeciwnym kierunku na rurze podczas biegu, bez zatrzymywania rurki w celu obrócenia się.</li>
	<li>Zakończ sesję testową dla myszy, które są w stanie biegać przez czas 500 sekund. Daj myszom maksymalnie dwie dodatkowe próby, co pozwoli im poprawić czas biegu, gdy upadną wcześniej. </li>
	<li>Do dalszej analizy należy wykorzystać maksymalny czas trwania (tj. najdłuższy czas trwania próby). </li>
</ol>
4. Ćwiczenie na bieżni
Bieżnia może być używana na trzy sposoby jako narzędzie w badaniach przedklinicznych. Po pierwsze, wymuszone bieganie na bieżni może być wykorzystane do zaostrzenia patologii choroby, jak opisano w tym protokole (zobacz również: <a href="http://www.treat-nmd.eu/downloads/file/sops/dmd/MDX/DMD_M.2.1.001.pdf" target="_blank">DMD_M2.1.001.pdf</a>). Po drugie, można ocenić maksymalną zdolność do biegania myszy i wpływ leczenia na to (zobacz metodę pozwalającą myszom biegać aż do wyczerpania <a href="http://www.treat-nmd.eu/downloads/file/sops/dmd/MDX/DMD_M.2.1.003.pdf">DMD_M.2.1.003.pdf</a>). Wreszcie, bieganie na bieżni może być używane przed kolejnym testem funkcjonalnym, aby wyczerpać mysz, aby działała gorzej w drugim teście13. Odbywa się to poprzez ćwiczenie myszy dwa lub trzy razy w tygodniu, jak opisano poniżej, po czym bezpośrednio następuje jeden z testów funkcjonalnych opisanych w protokole 1-3.
<ol>
	<li>Konfiguracja aparatury: Na rynku dostępnych jest kilka bieżni, na których kilka myszy może biegać jednocześnie i dla których można regulować wysokość, czas trwania i prędkość. Niektóre bieżnie są wyposażone w siatkę, która dostarcza wstrząsy o niskiej intensywności, aby zachęcić myszy do biegania. Jednak myszy mdx są wrażliwe na stres i można je łatwo zmotywować w bardziej przyjazny sposób poprzez delikatne pchnięcie ręką w kierunku biegu. Dlatego zdecydowanie zaleca się, aby NIE używać siatki przeciwwstrząsowej. Ogólnie rzecz biorąc, stymulacja ręką jest potrzebna tylko podczas pierwszej sesji biegowej.</li>
	<li>Umieść myszy na bieżni poziomej.</li>
	<li>Uruchom bieżnię z prędkością biegu 12 m/min. Niższe prędkości (8 m/min) muszą być używane u starych myszy (>15 miesięcy), gdzie wyższe prędkości łatwo prowadzą do wyczerpania.</li>
	<li>Podczas pierwszej sesji zachęcaj myszy do biegania, delikatnie popychając je, gdy są blisko końca pasa.</li>
	<li>Gdy myszy będą biegać przez 30 minut, umieść je z powrotem w klatce.</li>
	<li>Powtarzaj to dwa razy w tygodniu przez np. 12 tygodni.</li>
	<li>W razie potrzeby zapewnij sobie okresy odpoczynku. Na przykład niektóre myszy mdx muszą przestać działać i powinny mieć możliwość odpoczynku przez kilka minut. Jeśli tak się stanie, wyłącz pasek, daj wszystkim myszom okres odpoczynku trwający dwie minuty, włącz pasek na dwie minuty z prędkością 4 m/min. Następnie zwiększ prędkość do 12 m/min i pozwól myszom dokończyć protokół. Ważne jest, aby wszystkie myszy ukończyły cały protokół biegowy. Uwaga: W przypadku, gdy myszy mdx potrzebują okresów odpoczynku, rozważ rozgrzewkę przed protokołem 30-minutowych ćwiczeń. Ta sesja rozgrzewkowa składa się z: 2-minutowego okresu aklimatyzacji z prędkością 4 m/min, po którym następuje 8-minutowa rozgrzewka z prędkością 8 m/min. W naszych rękach 4-16-tygodniowe samice myszy mdx są w stanie ukończyć 30-minutowy protokół ćwiczeń bez odpoczynku. Inni donieśli, że w dopasowanym wieku samcach myszy mdx, 45% myszy potrzebuje okresów odpoczynku, aby zakończyć ćwiczenie. Protokół rozgrzewki zmniejsza liczbę przystanków12.</li>
</ol>

<ol><li>Blake, D. J., Weir, A., Newey, S. E., Davies, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+and+genetics+of+dystrophin+and+dystrophin-related+proteins+in+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Function and genetics of dystrophin and dystrophin-related proteins in muscle.</a> Physiol. Rev. 82, 291-329 (2002).</li>
<li>Hoffman, E. P., Brown, R. H., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin%3A+the+protein+product+of+the+Duchenne+muscular+dystrophy+locus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus.</a> Cell. 51, 919-928 (1987).</li>
<li>Bushby, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+Duchenne+muscular+dystrophy%2C+part+1%3A+diagnosis%2C+and+pharmacological+and+psychosocial+management%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of Duchenne muscular dystrophy, part 1: diagnosis, and pharmacological and psychosocial management.</a> Lancet Neurol. 9, 77-93 Forthcoming.</li>
<li>Bulfield, G., Siller, W. G., Wight, P. A., Moore, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X+chromosome-linked+muscular+dystrophy+%28mdx%29+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">X chromosome-linked muscular dystrophy (mdx) in the mouse.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 81, 1189-1192 (1984).</li>
<li>Bowles, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+1+gene+therapy+for+Duchenne+muscular+dystrophy+using+a+translational+optimized+AAV+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Phase 1 gene therapy for Duchenne muscular dystrophy using a translational optimized AAV vector.</a> Mol. Ther. 20, 443-455 (2012).</li>
<li>Cirak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exon+skipping+and+dystrophin+restoration+in+patients+with+Duchenne+muscular+dystrophy+after+systemic+phosphorodiamidate+morpholino+oligomer+treatment%3A+an+open-label%2C+phase+2%2C+dose-escalation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Exon skipping and dystrophin restoration in patients with Duchenne muscular dystrophy after systemic phosphorodiamidate morpholino oligomer treatment: an open-label, phase 2, dose-escalation study.</a> Lancet. 378, 595-605 Forthcoming.</li>
<li>Goemans, N. M., et al. Systemic administration of PRO051 in Duchenne's muscular dystrophy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGoemans%2C+NM+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. 364, 1513-1522 (2011).</li>
<li>Malik, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gentamicin-induced+readthrough+of+stop+codons+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Gentamicin-induced readthrough of stop codons in Duchenne muscular dystrophy.</a> Ann. Neurol. 67, 771-780 (2010).</li>
<li>Skuk, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+test+of+a+%26%2334%3Bhigh-density+injection%26%2334%3B+protocol+for+myogenic+cell+transplantation+throughout+large+volumes+of+muscles+in+a+Duchenne+muscular+dystrophy+patient%3A+eighteen+months+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul.+Disord%22%5BJournal%5D)">First test of a &#34;high-density injection&#34; protocol for myogenic cell transplantation throughout large volumes of muscles in a Duchenne muscular dystrophy patient: eighteen months follow-up.</a> Neuromuscul. Disord. 17, 38-46 (2007).</li>
<li>van Putten, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3+months+mild+functional+test+regime+does+not+affect+disease+parameters+in+young+mdx+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul.+Disord%22%5BJournal%5D)">A 3 months mild functional test regime does not affect disease parameters in young mdx mice.</a> Neuromuscul. Disord. 20, 273-280 (2010).</li>
<li>De Luca, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gentamicin+treatment+in+exercised+mdx+mice%3A+Identification+of+dystrophin-sensitive+pathways+and+evaluation+of+efficacy+in+work-loaded+dystrophic+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Gentamicin treatment in exercised mdx mice: Identification of dystrophin-sensitive pathways and evaluation of efficacy in work-loaded dystrophic muscle.</a> Neurobiol. Dis. 32, 243-253 (2008).</li>
<li>Radley-Crabb, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+30min+treadmill+exercise+session+is+suitable+for+%27proof-of+concept+studies%27+in+adult+mdx+mice%3A+A+comparison+of+the+early+consequences+of+two+different+treadmill+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul.+Disord%22%5BJournal%5D)">A single 30min treadmill exercise session is suitable for 'proof-of concept studies' in adult mdx mice: A comparison of the early consequences of two different treadmill protocols.</a> Neuromuscul. Disord. , (2011).</li>
<li>van Putten, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+low+levels+of+dystrophin+on+mouse+muscle+function+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.One%22%5BJournal%5D)">The effects of low levels of dystrophin on mouse muscle function and pathology.</a> PLoS.One. , (2012).</li>
<li>Willmann, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+translation%3A+Guidelines+for+standard+pre-clinical+experiments+in+mdx+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul.+Disord%22%5BJournal%5D)">Enhancing translation: Guidelines for standard pre-clinical experiments in mdx mice.</a> Neuromuscul. Disord. 1, 43-49 (2011).</li>
<li>Connolly, A. M., Keeling, R. M., Mehta, S., Pestronk, A., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+mouse+models+of+muscular+dystrophy%3A+the+natural+history+of+strength+and+fatigue+in+dystrophin-%2C+dystrophin%2Futrophin-%2C+and+laminin+alpha2-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul.+Disord%22%5BJournal%5D)">Three mouse models of muscular dystrophy: the natural history of strength and fatigue in dystrophin-, dystrophin/utrophin-, and laminin alpha2-deficient mice.</a> Neuromuscul. Disord. 11, 703-712 (2001).</li>
<li>Rafael, J. A., Nitta, Y., Peters, J., Davies, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+of+SHIRPA%2C+a+mouse+phenotypic+assessment+protocol+on+Dmd%28mdx%29+and+Dmd%28mdx3cv%29+dystrophin-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm.+Genome%22%5BJournal%5D)">Testing of SHIRPA, a mouse phenotypic assessment protocol on Dmd(mdx) and Dmd(mdx3cv) dystrophin-deficient mice.</a> Mamm. Genome. 11, 725-728 (2000).</li>
<li>Chapillon, P., Lalonde, R., Jones, N., Caston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+development+of+synchronized+walking+on+the+rotorod+in+rats.+Effects+of+training+and+handling%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Early development of synchronized walking on the rotorod in rats. Effects of training and handling.</a> Behav. Brain Res. 93, 77-81 (1998).</li>
<li>Massett, M. P., Berk, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-dependent+differences+in+responses+to+exercise+training+in+inbred+and+hybrid+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Strain-dependent differences in responses to exercise training in inbred and hybrid mice.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 288, 1006-1013 (2005).</li>
<li>Lerman, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variability+in+forced+and+voluntary+endurance+exercise+performance+in+seven+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Genetic variability in forced and voluntary endurance exercise performance in seven inbred mouse strains.</a> J. Appl. Physiol. 92, 2245-2255 (2002).</li>
<li>Sharp, P. S., Jee, H., Wells, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+characterization+of+muscle+strength+with+variable+levels+of+dystrophin+restoration+in+mdx+mice+following+local+antisense+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Physiological characterization of muscle strength with variable levels of dystrophin restoration in mdx mice following local antisense therapy.</a> Mol. Ther. 19, 165-171 (2011).</li>
<li>Klein, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+in+vivo+assessment+of+muscle+impairment+in+the+mdx+mouse+model--a+comparison+of+two+common+wire+hanging+methods+with+two+different+results%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Noninvasive in vivo assessment of muscle impairment in the mdx mouse model--a comparison of two common wire hanging methods with two different results.</a> J. Neurosci. Methods. 203, 292-297 (2012).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Przedstawione tutaj testy funkcjonalne są powtarzalne, łatwe do wykonania i mają zastosowanie do myszy typu dzikiego i dystroficznego niezależnie od ich wieku. Testy dostarczają użytecznych narzędzi do przedklinicznej oceny funkcji, siły, kondycji i koordynacji mięśni. Badając wpływ związku na naturalny przebieg choroby, opisane tutaj testy nieinwazyjne (siła chwytu kończyn przednich, zarówno testy wiszące, jak i test rotarod) można ładnie połączyć w reżim testów funkcjonalnych, w którym testy te są wykonywane w kolejnyc...

Dystrofia mięśniowa Duchenne'a (DMD) jest najczęstszym zaburzeniem nerwowo-mięśniowym dotykającym 1:5 000 nowonarodzonych chłopców. Ta ciężka i postępująca choroba zaniku mięśni jest spowodowana mutacjami w genie DMD, które zakłócają otwartą ramę odczytu i uniemożliwiają syntezę funkcjonalnego białka dystrofiny. Włókna mięśniowe pozbawione dystrofiny są podatne na uszkodzenia wywołane wysiłkiem fizycznym. Po wyczerpaniu zdolności regeneracyjnych mięśni i z powodu przewlekłego zapalenia uszkodzonego mięśnia, włókna są zastępowane tkanką łączną i tłuszczem, co w konsekwencji prowadzi do utraty funkcji. Ogólnie rzecz biorąc, pacjenci z DMD tracą zdolność poruszania się kończyn dolnych na początku drugiej dekady. Później dotknięte są również mięśnie ramion i obręczy barkowej, a pacjenci często rozwijają skoliozę piersiowo-lędźwiową z powodu asymetrycznego osłabienia mięśni podtrzymujących rdzeń kręgowy. Wentylacja wspomagana jest zwykle wymagana pod koniec lat nastoletnich lub na początku lat dwudziestych. Niewydolność oddechowa i niewydolność serca prowadzą do śmierci w trzeciej lub czwartej dekadzie1.
Chociaż gen sprawczy został odkryty ponad 25 lat temu2, nie ma dostępnego lekarstwa na DMD. Jednak poprawa opieki zdrowotnej i stosowanie kortykosteroidów wydłużyły oczekiwaną długość życia w świecie zachodnim3. Dzięki wykorzystaniu modeli zwierzęcych, takich jak mysz mdx, poczyniono duże kroki naprzód w kierunku odkrycia potencjalnych strategii terapeutycznych. Mysz mdx jest najczęściej używanym modelem myszy DMD. Ma mutację punktową w eksonie 23 mysiego genu Dmd i w związku z tym brakuje mu dystrofiny4. W ciągu ostatnich kilku lat wiele zaproponowanych strategii przekształciło się w badania kliniczne5-9. W tych badaniach poprawa funkcji mięśni jest pierwszorzędowym punktem końcowym, co podkreśla znaczenie testowania korzyści związków na funkcjonowanie mięśni u myszy na etapie przedklinicznym testów.
Podobnie jak pacjenci z DMD, również włókna mięśniowe ujemne dystrofinami myszy mdx są podatne na uszkodzenia wywołane wysiłkiem fizycznym, a ich funkcja mięśni jest upośledzona w porównaniu do myszy dzikiego typu C57BL/10ScSnJ. Upośledzenie to można ocenić za pomocą różnych testów funkcjonalnych. Niektóre z tych badań są nieinwazyjne i nie ingerują w patologię mięśni (np. siła chwytu kończyn przednich, testy zwisania i bieganie rotarod). Dlatego mogą być wykorzystywane do monitorowania naturalnej historii choroby lub określania wpływu związków na postęp choroby. Aby uzyskać dogłębny obraz wpływu związków na funkcję mięśni u myszy mdx, można zastosować reżim testów funkcjonalnych, który nie zakłóca postępu choroby, składający się ze wszystkich tych testów10.
Alternatywnie, wymuszone bieganie na bieżni może być użyte do celowego zaostrzenia postępu choroby i przetestowania zdolności ochronnych związków11. Bieżnia może być również używana jako miara wyniku, w której mierzy się czas biegu do wyczerpania12, lub jako narzędzie do zmęczenia myszy mdx, aby osiągały gorsze wyniki w kolejnym teście funkcjonalnym, zapewniając większe różnice w wydajności między grupami leczenia13. Wybierając testy funkcjonalne, należy mieć na uwadze ich wpływ na postęp choroby, zwłaszcza podczas testowania myszy dystroficznych, takich jak mysz mdx 14.
Tutaj szczegółowo opisujemy, jak przeprowadzić najczęściej używane testy funkcjonalne w niezawodny i powtarzalny sposób w oparciu o dostępne standardowe procedury operacyjne z sieci TREAT-NMD. <a href="http://www.treat-nmd.eu/resources/research-resources/dmd-sops/" target="_blank">Kliknij tutaj, aby odwiedzić stronę TREAT-NMD</a>.

<table><tbody><tr><td>Miernik siły chwytu myszy</td><td>Chatillon DFE (odsprzedawany przez Columbus Instruments)</td><td># 80529</td><td></td></tr><tr><td>Wiszące urządzenie z drutu na 2 kończyny</td><td>Wieszak na tkaninę lub urządzenie</td><td></td><td></td>wykonane na zamówienie</tr><tr><td>Wiszący drut 4-ramienny urządzenie</td><td>Pokrywa klatki dla szczurów lub urządzenie</td><td></td><td></td>wykonane na zamówienie</tr><tr><td>Rotarod</td><td>Ugo Basil</td><td># 47600</td><td></td></tr><tr><td>Bieżnia dla myszy Exer 3/6</td><td>Columbus Instruments</td><td># 1055SRM</td><td></td></tr></tbody></table>

ocena wydajności funkcjonalnej w modelu myszy mdx

Assessing Functional Performance in the Mdx Mouse Model

Dystrofia mięśniowa Duchenne'a (DMD) jest ciężkim i postępującym zaburzeniem zaniku mięśni, na które nie ma lekarstwa. Niemniej jednak kilka potencjalnych związków farmaceutycznych i podejść do terapii genowej przeszło do badań klinicznych. Ponieważ poprawa funkcji mięśni jest najważniejszym punktem końcowym w tych badaniach, duży nacisk położono na ustanowienie wiarygodnych, powtarzalnych i łatwych do wykonania testów funkcjonalnych w celu przedklinicznej oceny funkcji, siły, kondycji i koordynacji mięśni w mysim modelu mdx dla DMD. Dostępne są zarówno testy inwazyjne, jak i nieinwazyjne. Testy, które nie zaostrzają choroby, mogą być wykorzystane do określenia naturalnego przebiegu choroby i skutków interwencji terapeutycznych (np. test siły chwytu kończyn przednich, dwa różne testy zwisania z użyciem drutu lub siatki i bieg rotarod). Alternatywnie, wymuszone bieganie na bieżni może być stosowane w celu przyspieszenia postępu choroby i/lub oceny ochronnego wpływu interwencji terapeutycznych na patologię choroby. Poniżej opisujemy, jak wykonać te najczęściej stosowane testy funkcjonalne w sposób rzetelny i powtarzalny. Korzystanie z tych protokołów w oparciu o standardowe procedury operacyjne umożliwia porównywanie danych między różnymi laboratoriami.

Siła chwytu przednich kończyn myszy typu dzikiego oraz myszy mdx wzrasta między 4. a 12. tygodniem życia, a następnie ponownie spada u starszych osobników. Zaburzenia siły można zaobserwować już u młodych myszy mdx . Reprezentatywne dane dla 9-tygodniowych samic przedstawiono na Ryc. 1A i 1B. Chociaż w tym wieku zmęczenie nie różni się jeszcze pomiędzy szczepami, myszy mdx są słabsze od myszy typu dzikiego. Nie dysponujemy jeszcze danymi na temat podatności n...

Podstawową miarą wyników w badaniach klinicznych dotyczących zaburzeń nerwowo-mięśniowych jest ogólna poprawa funkcji mięśni. Dlatego ocena wpływu potencjalnych związków terapeutycznych na wydajność mięśni przed klinicznym badaniem w modelach mysich ma ogromne znaczenie. Poniżej opisujemy kilka testów funkcjonalnych, aby rozwiązać ten problem.

Ocena wydajności funkcjonalnej w modelu myszy Mdx

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe and progressive muscle wasting disorder for which no cure is available. Nevertheless, several potential ...

Ogólnym celem tych procedur jest określenie funkcjonalności mięśni za pomocą kilku niedestrukcyjnych testów funkcjonalnych. Siłę czterech kończyn można ocenić za pomocą testu siły uścisku, koordynacji równowagi, a stan mięśni można ocenić w testach zawieszenia na dwóch i czterech kończynach. Do oceny równowagi, koordynacji i kondycji wykorzystuje się również rotor rod.Wymuszony bieg na bieżni może być wykorzystany zarówno do przyspieszenia postępu choroby, jak i przed testem funkcjonalnym w celu zmęczenia myszy. Testy funkcjonalne te mogą być stosowane do wiarygodnej oceny roli genetyki oraz wpływu potencjalnych związków terapeutycznych na wydolność mięśniową. Pierwszym prezentowanym testem jest test siły chwytu czterema kończynami.Upewnij się, że przetwornik siły jest ustawiony w trybie szczytowego naprężenia (peak tension) dla pomiaru przyciągania i używaj gramów jako jednostki; zeruj miernik na początku każdego pomiaru. Pozwól każdej myszy na wykonanie trzech kolejnych prób przyciągania. Chwyć mysz za ogon i przesuń ją poziomo w stronę kratki.Należy sprawdzić, czy mysz mocno chwyciła kratkę wszystkimi czterema łapami, a następnie pociągnąć ją, aby przerwać chwyt. Maksymalna siła przyłożona do kratki zostanie wyświetlona na ekranie przetworników i może być zapisana ręcznie lub automatycznie. Należy odrzucić wszystkie próby, w których mysz użyła tylko jednej łapy, samych kończyn tylnych, obróciła się podczas pociągania lub wyraźnie nie stawiała oporu.Po trzech pociągnięciach przez mysz, należy umieścić ją z powrotem w klatce na okres odpoczynku trwający co najmniej jedną minutę. Następnie należy pozwolić myszy wykonać cztery serie pociągnięć, z których każda powinna być poprzedzona krótkim okresem odpoczynku. W ten sposób mysz wykona łącznie 15 pociągnięć.Aparatura do testu zawieszenia dwóch kończyn składa się z metalowego wieszaka na ubrania o grubości dwóch milimetrów, mocno przymocowanego do półki za pomocą taśmy. Wieszak należy umieścić 37 centymetrów nad warstwą ściółki, trzymając mysz za ogon. Następnie należy ją zbliżyć do drutu.Pozwól myszy chwycić drut jedynie przednimi łapami i opuść kończyny tylne w taki sposób, aby mysz zwisała na drucie tylko na przednich łapach. W momencie puszczenia myszy uruchom stoper. Po puszczeniu silna mysz będzie próbowała chwycić drut wszystkimi czterema kończynami oraz ogonem, co jest dopuszczalne.Jeśli mysz wykazuje niewłaściwe zachowanie, takie jak balansowanie na drucie lub celowe zeskakiwanie z niego, należy ją natychmiast ponownie umieścić na drucie bez zatrzymywania stopera. W przypadku gdy myszy są w stanie utrzymać się przez 600 s, należy zdjąć je z drutu i przenieść z powrotem do klatki. Gdy myszy spadną z drutu, należy zatrzymać stoper i bezpośrednio zapisać czas utrzymania się.Ponownie przebadaj te myszy maksymalnie dwa razy. W przypadku testu zawieszenia na czterech kończynach umieść pokrywę klatki dla szczurów 25 centymetrów nad miękką ściółką, aby zapobiec obrażeniom myszy podczas upadku, a jednocześnie zniechęcić je do celowego zeskakiwania z kratki. Następnie umieść mysz na kratce w taki sposób, aby chwyciła ją czterema łapami.Następnie odwróć kratkę tak, aby mysz zwisała, i natychmiast uruchom stoper. Jeśli mysz jest w stanie zwisać przez 600 s, należy ją niezwłocznie zwrócić do klatki. Myszy, które spadną z kratki przed upływem 600 s, należy poddać ponownemu badaniu na rotor-rodzie maksymalnie dwa kolejne razy.W ramach testu ustaw prędkość początkową na 5 RPM. Następnie umieść do pięciu myszy w probówce podczas jej powolnego obrotu. Po ustawieniu wszystkich myszy zwiększ prędkość obrotową probówki z 5 do 45 RPM w ciągu 15 sekund.Następnie pozostaw urządzenie przy 45 RPM do końca przebiegu. Kontynuuj monitorowanie przebiegu przez cały czas trwania testu. Czas przebiegu jest rejestrowany w sposób ciągły przez oprogramowanie i zostaje zatrzymany automatycznie, gdy mysz spadnie z rurki.Działanie to aktywuje pasek czasu znajdujący się pod tubą. Myszy, które odwrócą się podczas biegu, należy ponownie ustawić w odpowiedniej pozycji, nie zatrzymując obrotu tuby. Sesję testową kończy się w przypadku myszy, które są w stanie biec przez 500 sekund; zwierzęta te należy następnie przenieść z powrotem do klatki.Myszą, które spadną wcześniej, zapewnij maksymalnie dwie dodatkowe próby, aby umożliwić im poprawę czasu biegu. Do testu wysiłkowego na bieżni należy umieścić myszy na poziomej bieżni.Uruchom bieżnię z prędkością 12 metrów na minutę. Podczas pierwszej sesji zachęcaj myszy do biegu, delikatnie je popychając, gdy znajdą się blisko końca taśmy. Po 30 minutach biegu myszy należy niezwłocznie poddać dwulimbowemu testowi zawieszenia (two limb hanging test) lub umieścić je z powrotem w klatce.Siła chwytu czterema kończynami u dziewięciotygodniowych samic myszy MDX była upośledzona w porównaniu z myszami typu dzikiego, co pokazano tutaj. Jednakże średnie zmęczenie w teście zawieszenia na dwóch kończynach, wykonywanym raz w tygodniu, wynosiło mniej niż 10% i nie różniło się pomiędzy szczepami. Zarówno samce myszy MDX, jak i typu dzikiego, wykazały krzywą uczenia się w ciągu pierwszych kilku tygodni testów.Jednakże wyniki myszy MDX były gorsze we wszystkich punktach czasowych w porównaniu z myszami typu dzikiego. Maksymalny dopuszczalny czas wiszenia wynoszący 600 s jest zaznaczony linią przerywaną. Cztery. Zdolność do wiszenia kończyn była oceniana raz w tygodniu u samców myszy MDX i myszy typu dzikiego.Z czasem myszy MDX utrzymywały się w zawieszeniu przez krótszy czas niż myszy typu dzikiego. Czas biegu na rotarodzie nie różnił się pomiędzy młodymi samcami myszy MDX a myszami typu dzikiego bezpośrednio po 30 minutach biegu na bieżni. Samice myszy poddano testowi zawieszenia obu kończyn, podczas gdy wszystkie myszy typu dzikiego pozostawały w zawieszeniu aż do maksymalnego dozwolonego czasu.Wszystkie myszy MDX wcześniej spadły z bieżni. Obecność uszkodzeń błony komórkowej określono poprzez ocenę poziomu kinazy kreatynowej w surowicy, która wycieka z włókien mięśniowych przez przerwy w błonie. Poziomy kinazy kreatynowej były podwyższone u myszy MDX w porównaniu z myszami typu dzikiego przed wysiłkiem, a ćwiczenia na bieżni zwiększyły poziomy u myszy MDX, podczas gdy u myszy typu dzikiego pozostały one niskie.Mięśnie myszy MDX są bardzo podatne na ćwiczenia na bieżni. Patologia choroby ulega znacznemu pogorszeniu po kilku tygodniach biegania. Te barwienia H&amp;E mięśnia czworogłowego u 16-tygodniowych myszy MDX, z których jedna grupa nie ćwiczyła, a druga ćwiczyła na bieżni, wykazują rozwój rozległej włóknicy i martwicy. Mięśnie myszy typu dzikiego, poddane temu samemu protokołowi biegania, nie zostały dotknięte tymi zmianami.Różnice w tle genetycznym wpływają na sprawność funkcjonalną; wyniki testu wiszenia na dwóch kończynach znacząco różniły się pomiędzy dwiema liniami myszy MDX. Wyniki testu wiszenia na czterech kończynach były nieco wyższe u myszy MDX o mieszanym tle genetycznym.Czasy przebiegu na rotarodzie również nieco różniły się pomiędzy szczepami. Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać, aby zawsze wykorzystywać grupy myszy o odpowiedniej liczebności, dobrane pod względem wieku i płci oraz posiadające odpowiadające tło genetyczne. Należy również dążyć do maksymalnej standaryzacji warunków eksperymentalnych.Na przykład należy stosować tę samą porę dnia i dzień tygodnia, to samo pomieszczenie oraz tego samego eksperymentatora.

assessing-functional-performance-in-the-mdx-mouse-model

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Ocena wydajności funkcjonalnej w modelu mysiego Mdx

Ten film pokazuje proces oceny dysfunkcji motorycznej w modelu mysim poprzez podanie toksyny krztuścowej i inokulum zawierającego peptydy naśladujące mielinę i adiuwanty, a następnie testy na bieżni w celu oceny funkcji motorycznych i oceny wynikłego uszkodzenia nerwów w wyniku aktywacji immunologicznej i demielinizacji.

Ocena funkcji motorycznych w eksperymentalnym mysim modelu autoimmunologicznego zapalenia nerwu

W chorobie Parkinsona i ogólnie w zaburzeniach ruchowych, czułe i wiarygodne testy behawioralne są niezbędne do testowania nowych potencjalnych terapii. W tym miejscu opisujemy łatwą do opanowania baterię testów sensomotorycznych dla myszy, które są wrażliwe na różne stopnie uszkodzenia układu nigrostriatal i przydatne w badaniach przedklinicznych.

Ocena funkcji sensomotorycznych w mysich modelach choroby Parkinsona

Poziomy aktywności w otwartym polu są używane do oceny poziomu aktywności lokomotywy i zachowania. Protokół ten zapewnia dobrze zaprojektowany, ustandaryzowany protokół do stosowania w badaniach przedklinicznych dotyczących zaburzeń nerwowo-mięśniowych.

Pomiary behawioralne i ruchowe z wykorzystaniem otwartego systemu monitorowania aktywności w chorobach mięśni szkieletowych

Zoptymalizowany protokół testowy jest przedstawiony w tym artykule dla testu wydajności Rotarod, używanego do pomiaru postępującej niepełnosprawności neurologicznej u myszy zakażonych TMEV.

Pomiar postępującej niepełnosprawności neurologicznej w mysim modelu stwardnienia rozsianego

Analiza chodu kinematycznego w płaszczyźnie strzałkowej dostarcza bardzo precyzyjnych informacji o tym, jak wykonywany jest ruch. Opisujemy zastosowanie tych technik do identyfikacji deficytów chodu u myszy poddanych demielinizacji o podłożu autoimmunologicznym. Metody te mogą być również wykorzystane do scharakteryzowania deficytów chodu dla innych modeli myszy z upośledzoną lokomocją.

Analiza kinematyczna chodu w płaszczyźnie strzałkowej u myszy C57BL/6 poddanych eksperymentalnemu autoimmunologicznemu zapaleniu mózgu i rdzenia wywołanemu MOG35-55

Ten protokół opisuje elastyczny, tani system do pomiaru ruchu myszy w teście aktywności w otwartym polu. Pokazujemy, że 6-minutowy test ambulacyjny oparty na tym systemie wykrywa spadek dobrowolnego ruchu u myszy mdx i dokładnie rozróżnia poprawę w ratowaniu tych zwierząt specyficznym dla mięśni.

Prosty i tani test do pomiaru ambulacji w mysich modelach dystrofii mięśniowej

Pomiar przewodnictwa nerwowego jest użytecznym narzędziem do oceny mysich modeli neurodegeneracji, ale często jest stosowany tylko do stymulacji nerwu kulszowego w kończynach tylnych. W tym miejscu opisujemy technikę pomiaru złożonego potencjału czynnościowego mięśni (CMAP) in vivo w mięśniach kończyn przednich myszy unerwionych przez splot ramienny.

In vivo (in vivo) Elektrofizjologiczny pomiar złożonego potencjału czynnościowego mięśni z kończyn przednich w mysich modelach zwyrodnienia neuronów ruchowych

Tutaj prezentujemy protokoły do badania upośledzenia jednostki nerwowo-naczyniowej podczas eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia in vivo. W szczególności zajmujemy się tym, jak określić przepuszczalność bariery krew-mózg i aktywność żelatynazy zaangażowaną w migrację leukocytów przez limity gleju.

Wizualizacja upośledzenia barier śródbłonkowych i glejowych jednostki nerwowo-naczyniowej podczas eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia mięśniowego in vivo

Niniejszy protokół opisuje indukcję eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia w modelu mysim przy użyciu glikoproteiny oligodendrocytów mieliny i monitorowanie procesu chorobowego za pomocą systemu punktacji klinicznej. Eksperymentalne objawy związane z autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego są analizowane za pomocą analizy mikrotomografii komputerowej kości udowej myszy i testu terenowego w celu kompleksowej oceny procesu chorobowego.

Indukcja i zróżnicowane wskaźniki oceny eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego

Ten manuskrypt przedstawia zestaw wysoce powtarzalnych testów behawioralnych do walidacji mysiego modelu zespołu Angelmana.

Charakterystyka behawioralna mysiego modelu zespołu Angelmana

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia jest jednym z najczęściej stosowanych mysich modeli stwardnienia rozsianego. W obecnym protokole myszy C57BL/6J obu płci są immunizowane peptydem glikoproteinowym oligodendrocytów mielinowych, co skutkuje głównie wznoszącym się niedowładem ogona i kończyn. W tym miejscu omówiono protokół indukcji i oceny EAE.

Modelowanie stwardnienia rozsianego u obu płci: eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia wywołane MOG35-55

Poznaj metody oceny funkcji mięśniowej w modelu myszy mdx przy użyciu testów siły chwytu, wiszenia i bieżni. Te nieinwazyjne procedury umożliwiają badanie wpływu terapii na mięśnie.

Ocena wydajności funkcjonalnej w modelu myszy Mdx

Przeglądaj więcej filmów