Isolation of Small Noncoding RNAs from Human Serum

Samantha Khoury; Pamela Ajuyah; Nham Tran

doi:10.3791/51443

Izolacja małych niekodujących RNA z ludzkiej surowicy

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Isolation of Small Noncoding RNAs from Human Serum

Izolacja małych niekodujących RNA z ludzkiej surowicy

Full Text

18,587 Views

06:44 min

June 19, 2014

DOI: 10.3791/51443-v

Samantha Khoury¹, Pamela Ajuyah¹, Nham Tran^2,3

¹School of Medical and Molecular Biosciences, Faculty of Science,University of Technology, Sydney, ²Centre for Health Technologies, Faculty of Engineering and Information Technology,University of Technology, Sydney, ³The Sydney Head and Neck Cancer Institute, Sydney Cancer Centre,Royal Prince Alfred Hospital

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Ten protokół opisuje metodę ekstrakcji małych RNA z ludzkiej surowicy. Zastosowaliśmy tę metodę do wyizolowania mikroRNA z surowicy nowotworowej do zastosowania w macierzach DNA, a także w ilościowym PCR singleplex. W protokole wykorzystuje się odczynniki tiocyjanianu fenolu i guanidyny z modyfikacjami w celu uzyskania wysokiej jakości RNA.

Ogólnym celem tej procedury jest wyizolowanie wysokiej jakości RNA z próbek surowicy. Korzystając z naszej zoptymalizowanej wersji popularnego protokołu MRC odczynnika RTLS. Osiąga się to poprzez uprzednie rozcieńczenie surowicy w stosunku od jednego do pięciu wodą wolną od nukleaz w celu zmniejszenia zanieczyszczenia białkami.

Drugim krokiem jest wprowadzenie dwóch mililitrowych probówek z blokadą fazową do pierwszego etapu wirowania. W ten sposób większość zanieczyszczeń, takich jak fenol i białka, zostaje uwięziona w fazie organicznej. Kolejnym trzecim i ostatnim krokiem optymalizacji jest wirowanie błyskawiczne przy 12 000 serów, które usuwa wszelkie pozostałości zanieczyszczeń z osadu RNA przed płukaniem etanolem.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos