Modelowanie spontanicznego przerzutowego raka nerkowokomórkowego (mRCC) u myszy po nefrektomii

Ogólnym celem tej procedury jest wygenerowanie spontanicznego raka nerkowokomórkowego z przerzutami, który jest istotny klinicznie. Osiąga się to poprzez uprzednie przygotowanie komórek reka Luke do implantacji. Drugim krokiem jest wykonanie ortotopowej implantacji komórek nowotworowych nerki.

Następnie, po wyrośnięciu guza, guz pierwotny jest usuwany poprzez wykonanie nefrektomii. Ostatnim krokiem jest monitorowanie progresji spontanicznych przerzutów po nefrektomii i ocena rozmieszczenia choroby w różnych lokalizacjach. Ostatecznie protokół ten umożliwia monitorowanie spontanicznego przerzutowego raka nerkowokomórkowego i stanowi wytyczne do standaryzacji oceny skuteczności eksperymentalnych środków terapeutycznych.

Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak ektopowe, często powierzchowne lub podskórne metody implantacji komórek nowotworowych, jest to, że rekapituluje ona raka nerkowokomórkowego lub RCC, tak jak występuje u pacjentów, co obejmuje zdolność komórek nowotworowych do rozprzestrzeniania się na resztę ciała. Implikacje tej techniki rozciągają się na leczenie raka nerkowokomórkowego, ponieważ to właśnie systematyczna choroba z przerzutami jest tak naprawdę główną przyczyną śmiertelności pacjentów. Modele mysie zazwyczaj nie leczą spontanicznej choroby przerzutowej, która czasami może nastąpić po nefrektomii.

Chociaż ta metoda może zapewnić wgląd w spontaniczną przerzutową chorobę RCC. Może być również stosowany w innych typach nowotworów, w których typowe jest usunięcie guza pierwotnego, a główną przyczyną śmiertelności jest nawrót choroby przerzutowej po operacji portowej. Obejmuje to między innymi modele piersi i czerniaka.

Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają korzystać z tej metody, będą zmagać się z trudnościami w znalezieniu nerki i zapewnieniu, że komórki nowotworowe pozostaną zlokalizowane po implantacji i nie przeciekają. Po drugie, skuteczność ne jest wykonywana sprawnie i pozwala na rekonwalescencję pooperacyjną. Przed implantacją ortotopową hoduje mysie lucyferazy oznaczone komórkami reca lub komórkami reka Luke jako monowarstwa do 75% płynności co po trypsyny, izacji i zawiesinie resus w wirówce 5% FBS zawierającej pożywkę, komórki powtarzają trzy razy z przemyciem w PBS, a następnie ponownie zawieszają komórki w pożywce wolnej od surowicy do stężenia pięć razy 10 do czwartego renco Luke'a na pięć mikrolitrów pożywki wolnej od surowicy.

Po znieczuleniu myszy morskiej jelitowej za pomocą dwóch do 3% izofluoru, uszczypnij stopę, aby sprawdzić, czy po nałożeniu maści weterynaryjnej na oczy, aby zapobiec wysuszeniu, umieść mysz w prawej bocznej pozycji leżącej i ogol lewą stronę między czterema a tylnymi kończynami. Następnie nałóż alkohol i jod wzdłuż grzbietowej części lędźwiowej. Użyj nożyczek chirurgicznych, aby wykonać jednocentymetrowe nacięcie skóry w kierunku wzdłużnym między ostatnim żebrem a stawem biodrowym.

Następnie użyj nożyczek preparacyjnych, aby poluzować tkankę łączną pod skórą. Następnie za pomocą nożyczek chirurgicznych wykonaj 0,5-centymetrowe nacięcie w kierunku wzdłużnym w ścianie brzucha. Teraz użyj zakrzywionych kleszczy, aby delikatnie docisnąć otwartą ranę.

To uzewnętrznia nerki i pozwala na delikatne unieruchomienie narządu przed wstrzyknięciem. Załadować strzykawkę Hamilton pięcioma mikrolitrami przygotowanej mieszaniny komórek w celu powierzchownej implantacji podtorebkowej. Trzymać igłę równolegle do nerki zorientowanej wzdłużnie ze ściętą krawędzią do góry i wprowadzić igłę pod torebkę nerkową, ale powyżej miąższu.

Gdy igła znajdzie się na miejscu, wstrzyknij wszystkie komórki, aż utworzy się mały biały bąbelek. Powoli wyjąć igłę z kapsułki i natychmiast użyć sterylnego aplikatora z bawełnianą końcówką, aby zablokować miejsce wstrzyknięcia w celu wewnętrznej implantacji podtorebkowej. Zaczynając od strony nerki przeciwnej do pożądanego miejsca implantacji.

Trzymać igłę ściętą krawędzią do góry i do wewnątrz. Wprowadzić go przez wnętrze nerki, aż igła będzie widoczna, ale nie przebijając przestrzeni podtorebkowej po drugiej stronie. Wstrzykiwać komórki, aż utworzy się biały pęcherzyk i pobrać wymaz z miejsca wstrzyknięcia, aby zapobiec wyciekowi.

Delikatnie przywróć nerkę do jamy ciała. Zamknij ścianę brzucha za pomocą wchłanialnego szwu 5.0 Vicryl. Po zakończeniu przytrzymaj warstwę skóry razem i umieść dwa lub trzy klipsy na rany przed rekonwalescencją.

Podawać podskórnie 500 mikrolitrów 0,9% chlorku sodu i 100 mikrolitrów buprenorfiny. 26 do 30 dni po implantacji znieczulić zwierzę i odsłonić nerkę jak wcześniej. Następnie za pomocą kleszczy delikatnie usuń łączącą tkankę tłuszczową z rozpieszczonego końca nerki i usuń nadnercza z końca czaszki.

Za pomocą kleszczy delikatnie chwycić nerkę, a następnie wsunąć wchłanialny szew 5.0 Vicryl wokół moczowodu, tętnicy nerkowej i żyły nerkowej. Następnie powoli zawiąż podwójny węzeł po zaciśnięciu nici hemostatykami. Użyj nożyczek, aby przeciąć powyżej węzła i usunąć nerkę.

Po usunięciu nerki dokładnie sprawdź, czy nie ma krwawienia z przypływu, tętnicy i kauteryzacji, jeśli to konieczne. Po zszyciu ściany ciała brzucha za pomocą 5.0 Vicryl, użyj klipsów do ran, aby zamknąć skórę. Codziennie monitoruj zwierzę pod kątem oznak niepokoju, krwawienia lub ograniczonej mobilności.

Po eutanazji zwierzęcia użyj nożyczek chirurgicznych, aby wykonać nacięcie rozpoczynające się powyżej cewki moczowej i kontynuowane w górę klatki piersiowej do dolnej żuchwy. Użyj nożyczek, aby oddzielić skórę od mięśnia ściany brzucha. Następnie odetnij skórę wzdłuż rąk i nóg i powoli oderwij skórę.

Dokładnie zbadaj powięź skóry i ścianę brzucha pod kątem guzków. Następnie zbadaj powierzchowne węzły chłonne. Wykonaj nacięcie w ścianie brzucha i przetnij wzdłuż lewej i prawej bocznej strony aż do przepony.

Z jednym poziomym cięciem. Usuń przednią część ściany brzucha, aby odsłonić wnętrzności. Zbadaj niezakłócony wygląd wnętrzności pod kątem rażąco zauważalnych guzów.

Zwróć również uwagę na zawartość żołądka i jelit pod kątem śladów jedzenia lub krwotoku. Wizualnie oceń każdy narząd pod kątem obecności lub braku guza, pracując na liście kontrolnej 22 miejsc, wyniki są zestawiane w tabelach dla zwierząt w określonej grupie w celu porównania rozkładu choroby. Teraz ostrożnie wyjmij wątrobę i umyj ją PBS.

Następnie zbadaj go pod kątem poważnych guzów lub nieprawidłowości i oceń go jak poprzednio. Następnie przystąp do usuwania i nacinania śledziony, nerki i trzustki. Następnie sprawdź węzły chłonne jamy brzusznej, w tym węzły chłonne lędźwiowo-krzyżowe, nerkowe i krezkowe.

Po ocenie przepony pod kątem oznak przerzutów, usuń przeponę i wykonaj dwa boczne nacięcia w klatce piersiowej, usuwając część czołową, aby odsłonić płuca i serce, delikatnie unieś przełyk i przetnij tchawicę nad sercem. Po usunięciu płuc i serca oceń tkanki pod kątem guzków. Następnie użyj kleszczy, aby ścisnąć serce.

Brak sprężystej konsystencji może wskazywać na obecność guza. Na koniec użyj nożyczek chirurgicznych, aby przeciąć liniowo czaszkę. Delikatnie usuń małe kawałki czaszki, aż cały mózg zostanie odsłonięty.

Wizualny system punktacji wykorzystano do oceny choroby, rozmieszczenia i ciężkości choroby w pięciu różnych grupach zwierząt. Grupy te wykazywały różny zakres i nasilenie choroby. Dodatkowy pomiar polegający na obrazowaniu bioluminescencyjnym bezpośrednio po uśmierceniu wykorzystano do ilościowej oceny zmian mikro i makro przerzutowych.

Po opanowaniu zarówno implantacji, nefrektomii, jak i sekcji zwłok można wykonać w ciągu pięciu do 10 minut na zwierzę, jeśli zostanie wykonane prawidłowo. Zbadanie, czy odpowiedzi na leczenie będą się różnić w zależności od typu przerzutowych komórek nowotworowych. Komórki z przerzutowego raka nerkowokomórkowego.

Pacjenci są obecnie wykorzystywani do wszczepiania bezpośrednio zwierzętom w celu oceny wzrostu choroby miejscowej i przerzutowej po jej rozwojeniu. Technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się rakiem nerkowokomórkowym do zbadania klinicznie istotnej progresji choroby i odpowiedzi na terapię. W szczególności, czy odpowiedzi te różnią się w zależności od pierwotnej choroby zlokalizowanej lub spontanicznego wzrostu przerzutów.

Nie zapominaj, że praca z małymi zwierzętami, które przechodzą wiele operacji, wymaga ścisłego przestrzegania wytycznych dotyczących protokołów dla zwierząt i sterylnych warunków. Komfort zwierząt i rekonwalescencja są kluczowymi zmiennymi, które należy wykonać prawidłowo podczas tej procedury.