Synteza i oczyszczanie jodoazyrydyn polegające na ilościowym doborze optymalnej fazy stacjonarnej do chromatografii

Ogólnym celem tej procedury jest przygotowanie i oczyszczenie jodu końcowego. Osiąga się to poprzez pierwsze wytworzenie litu metylowego przez deprotonację metanu w niskiej temperaturze i reakcję z układem odpornościowym. Drugim krokiem jest szybkie podgrzanie mieszaniny reakcyjnej w celu pobudzenia cyklizacji produktu pośredniego jodku di do pożądanego produktu z rybydyny.

Następnie ocenia się stabilność produktu I oto urydyny w różnych fazach stacjonarnych stosowanych w chromatografii w celu określenia najbardziej odpowiedniego do oczyszczania. Ostatnim krokiem jest oczyszczenie jodu i wykonanie analizy NMR protonów. Ostatecznie, ten ekran stacjonarnych faz do chromatografii jest używany do pokazania, że podstawowa Illumina zmodyfikowana do aktywności czwartej jest najbardziej odpowiednia do oczyszczania ody IDO.

Po raz pierwszy wpadliśmy na pomysł tej metody, gdy odkryliśmy, że nowe produkty jodowe IDO są niestabilne w chromatografii z żelem krzemionkowym i potrzebowaliśmy alternatywnego oczyszczania. Na tej podstawie opracowaliśmy procedurę oceny stabilności odiny IO w celu uporządkowania faz stacjonarnych do chromatografii, które można również zastosować do innych potencjalnie wrażliwych związków. Tę procedurę zademonstruje fakt, że Tom i Dom są doktorantami w mojej grupie badawczej.

Najpierw suszyć płomieniem, 100-mililitrową kolbę okrągłodenną zawierającą mieszadło i wyposażoną w przegrodę pod strumieniem argonu. Po pozostawieniu kolby do ochłodzenia temperatury pokojowej, dodać 5,7 mililitra bezwodnego czworościanu i 2,7 mililitra bezwodnego eteru etylowego za pomocą strzykawki oraz 315 mikrolitrów świeżo destylowanego heksaethylodilanu za pomocą mikrostrzykawki. Umieść kolbę w pomieszczeniu o odpowiedniej wielkości, które pozwoli na jej dobre zanurzenie.

Po rozpoczęciu mieszania dodaj do wykonawcy suchy lód i aceton, aby schłodzić roztwór do minus 78 stopni Celsjusza. Następnie przykryj wykonawcę folią aluminiową, aby zminimalizować odsłonięcie naczynia reakcyjnego. Do światła, po czym dodaj 0,6 mililitra 2,5 molowego i butylowego litu w heksanach kroplami przez strzykawkę przez dwie do trzech minut.

Po pozostawieniu mieszaniny do mieszania w temperaturze minus 78 stopni Celsjusza przez 30 minut. Aby utworzyć roztwór heksa etylodilanu litu, dodaj jeden mililitr bezwodnego terah hydro ferranu do wysuszonej płomieniowo 10-mililitrowej kolby okrągłodennej za pomocą strzykawki. Następnie dodać 135 mikrolitrów metanu di ITOM za pomocą mikrostrzykawki i delikatnie zamieszać kolbę, aby upewnić się, że roztwór jest dobrze wymieszany.

Następnie dodawać roztwór metanu di ITOM kroplami przez dwie minuty do roztworu sześciolitu etylodilanu w temperaturze minus 78 stopni Celsjusza, pozostawiając roztwór do mieszania przez 20 minut. Odważyć 135 miligramów aminy do innej, wysuszonej płomieniowo kolby okrągłodennej o pojemności 10 mililitrów i rozpuścić ją w dwóch mililitrach bezwodnego tetrahydrożelazranu. Po 20 minutach deprotonacji dodaj roztwór immunologiczny kroplami do roztworu litu metylowego dii ito Przez pięć minut w temperaturze minus 78 stopni Celsjusza.

Natychmiast po zakończeniu edycji kroplowej wyjąć naczynie reakcyjne z łaźni suchego lodu. Odzyskać kolbę z folią aluminiową i przenieść ją do lodowatej łaźni wodnej o temperaturze zero stopni Celsjusza. Mieszaj roztwór przez 15 minut w temperaturze zero stopni Celsjusza.

Następnie wygasić reakcję, dodając 30 mililitrów nasyconego wodnego roztworu wodorowęglanu sodu. Przenieść mieszaninę do rozdzielacza i dodać 30 mililitrów di chlorometanu. Wstrząśnij mieszaniną, odpowietrz lejek i usuń dolną warstwę organiczną.

Po dwukrotnym powtórzeniu ekstrakcji dodaj siarczan sodu do połączonych warstw organicznych, aby usunąć wodę obecną w roztworze. Następnie odfiltrować siarczan sodu pod filtracją próżniową za pomocą szklanego lejka z bawełnianą zatyczką, zbierając filtrat w kolbie okrągłodennej o pojemności 250 mililitrów, usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem na wyparce obrotowej. Aby pozwolić sobie na nieczystą próbkę pożądanego produktu urydyny ITO.

Dodać 1 3 5 TRIMETH oksybenzen jako wzorzec wewnętrzny do surowego din i rozpuścić surową próbkę dine w di chlorometanie. Upewnienie się, że jest on całkowicie rozpuszczony. Pobrać podwielokrotność z tej mieszaniny, a następnie usunąć rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem.

Po zakończeniu przeanalizuj próbkę za pomocą spektroskopii protonowej NMR. Po analizie NMR otwórz zarejestrowane widmo NMR protonów za pomocą standardowego oprogramowania do przetwarzania NMR, takiego jak mast nova. Kliknij spektrum prawym przyciskiem myszy i wybierz integrację.

Następnie wybierz opcję ręczną, aby udostępnić narzędzie do integracji. Kliknij i przeciągnij, aby pokryć szerokość pików na poziomie 6,08 PP m i 4,87 PP M, aby zintegrować odpowiednio sygnały wzorca wewnętrznego i sygnału aine CHI. Kliknij prawym przyciskiem myszy całkę dla piku na 6,08 PP m, wybierz edytuj całkę i zmień znormalizowaną wartość na 3,0.

Następnie użyj zaktualizowanej wartości całkowej dla sygnału CHI jodu, aby określić wydajność jodu I OTO. Po zakończeniu analizy NMR wymieszać 25 gramów następujących faz stacjonarnych z 50 mililitrami heksanu 5% octanu etylu w sześciu oddzielnych stożkowych kolbach o pojemności 250 mililitrów zawierających mieszadła w kolbie stożkowej. Przygotuj 50 mililitrowy roztwór, 5% octan etylu hean, który ma być użyty jako kontrola.

Następnie wymieszaj zawiesiny na magnetycznej płytce mieszającej. Dodać dwie mililitrowe porcje roztworu wzorca wewnętrznego I OTO Azarin do każdej z kolb stożkowych o ustawionej temperaturze pokojowej. Następnie mieszaj mieszaniny gnojowicy przez 30 minut.

Po 30 minutach przefiltrować każdą z mieszanin gnojowicy pod próżnią za pomocą wyśrodkowanego lejka, zbierając każdy filtrat w kolbie okrągłodennej o pojemności 250 mililitrów. Umyć pozostałość w wyśrodkowanym lejku dwukrotnie 30 mililitrami di chlorometanu. Usunąć rozpuszczalnik z otrzymanych próbek za pomocą wyparki obrotowej.

Następnie przeanalizuj próbki za pomocą spektroskopii protonowej NMR, aby obliczyć ilość odzyskanego odyny joty w każdym przypadku. Jak opisano wcześniej, należy zapisać plony w notatniku laboratoryjnym. Porównaj wydajność I OTO Aine uzyskaną z każdej badanej fazy stacjonarnej z uzyskaną poprzednio, aby określić próbkę dającą najwyższą wydajność.

Następnie powtórz wcześniej opisaną syntezę, aby wygenerować surową mieszaninę jodu IO w celu wygenerowania podstawowej aktywności Illumina. Po czwarte, dodaj 100 gramów podstawowej aktywności Illumina, jeden do 500-mililitrowej kolby okrągłodennej, a następnie dodaj 10 mililitrów wody do kolby. Po wyposażeniu kolby w szklany korek, potrząsaj nią energicznie, aż nie będą widoczne żadne grudki, co wskazuje na równomierne rozprowadzenie wody po całym Illumina.

Gdy Illumina ostygnie do temperatury pokojowej, oczyść surowy jod IO za pomocą chromatografii kolumnowej, używając podstawowej aktywności Illumina czterech. W fazie stacjonarnej eluować za pomocą heksanu o gradacji do 5% taksanu octanu YL. Połączyć produkt zawierający frakcje w kolbie okrągłodennej i usunąć rozpuszczalnik za pomocą wyparki obrotowej w celu uzyskania czystego jodu oto.

Przed oczyszczeniem za pomocą protonowego NMR obliczono 59% wydajność jodu I oto. Jednak ten jod był trudny do oczyszczenia i uległ znacznemu rozkładowi podczas oczyszczania krzemionki na podstawowej Illuminie. Działanie czwarte zapewniło produkt w 48% wydajności.

Analiza protonowego NMR dała szereg plonów dla faz stacjonarnych w odniesieniu do wewnętrznego standardu podstawowej aktywności Illumina cztery zapewniły najwyższą wydajność 53%, która jest najbliższa wydajności NMR. W związku z tym na koniec wybrano podstawowe ćwiczenie Illumina numer cztery. Toal iota została odkupiona przez IR oczyszczona.

Szeroki wybór ainów ITO jest dostępny z wysoką wydajnością. Zarówno alkohol al, jak i aminy aromatyczne i toalowe są zgodne z reakcją, w tym histerycznie wymagającymi turtem i orto. Na przykład proponuje się, aby reakcja zachodziła przez deprotonację, a następnie edycję nukleofilową.

Aby nadać aminokwasowi gem di jodek pośredni, późniejsze ocieplenie indukuje selektywną cyklizację stereo o wysokiej DIA faworyzującą jod cis. Ze względu na subtelne oddziaływania steryczne w stanie przejścia cyklizacji podczas optymalizacji reakcji, kontrola temperatury i czas miały zasadnicze znaczenie dla wyniku reakcji. Wygaszenie reakcji bez ogrzewania dało końcowy jod IO i amge di jodek.

Produkty ulegają jednak degradacji w warunkach reakcji, czego można uniknąć poprzez podgrzanie reakcji i skrócenie czasu reakcji. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak zsyntetyzować produkt irydowy IO i ocenić jego stabilność w szerokim zakresie faz stacjonarnych do oczyszczania za pomocą chromatografii. Nie zapominaj, że praca z litem mbu może być niezwykle niebezpieczna i środki ostrożności, takie jak praca w atmosferze orzechów i bezpieczny dostęp do hartowania.

Podczas wykonywania tej procedury należy zawsze przyjmować odczynnik.