Testy węchowe dla mysich modeli choroby neurodegeneracyjnej

Ogólnym celem tej procedury jest ocena funkcji węchowej u myszy. Osiąga się to poprzez umieszczenie myszy w miejscu ograniczenia żywieniowego lub indywidualnego trzymania. Drugim krokiem jest przygotowanie bodźców węchowych, ustawienie sali testowej i przyzwyczajenie myszy do obszaru testowego, aby można było przeprowadzić testy.

Następnie przeprowadź procedury testowe na myszach i przeanalizuj dane, które zostały zarejestrowane na wideo. Ostatecznie testy te mogą być wykorzystane do pomiaru zdolności węchowych w genetycznych mysich modelach chorób neurodegeneracyjnych oraz w klinicznych badaniach leków w celu przetestowania potencjalnych terapii. Chociaż deficyty węchowe są dobrze udokumentowane w chorobach neurodegeneracyjnych, węch nie jest rutynowo mierzony w wielu modelach chorób.

Dlatego naszym celem jest zebranie zestawu testów do pomiaru wielu aspektów węchu i myszy, które można łatwo wdrożyć do eksperymentu. Testy te mogą pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania związane z relacjami między chorobami neurodegeneracyjnymi, patologią i węchem, a także pomóc w identyfikacji potencjału terapeutycznego nowych związków. Aby rozpocząć tę procedurę, podawaj myszy od jednej do dwóch kulek do użycia podczas testu dziennie.

Następnie, co najmniej dwa dni przed badaniem, zapisz wagę myszy, a następnie jedzenie ograniczone do 90% jej masy ciała we wszystkich dniach testowych. Przyzwyczaj mysz na godzinę przed testem, umieszczając klatkę domową w pomieszczeniu testowym z tylko górną pokrywą filtra. Podczas zamieszkiwania wypełnij czystą klatkę czystą ściółką do wysokości trzech centymetrów i upewnij się, że ściółka jest równomiernie rozłożona w całej klatce.

Zakop jedną słodzoną granulkę zboża 0,5 centymetra poniżej ściółki w klatce testowej, aby nie była widoczna. Następnie przenieś mysz z klatki domowej do klatki testowej i umieść górną pokrywę filtra na klatce. Zacznij odliczać pięć minut za pomocą timera.

Zatrzymaj stoper, gdy mysz odkryje kulkę i zacznie ją jeść. Jeśli mysz nie znajdzie kulki w ciągu pięciu minut, zakończ próbę i zapisz wynik 300 sekund dla tej myszy. Przesuń granulkę na wierzch ściółki, aby mysz mogła ją zjeść.

Po zakończeniu próby przywróć mysz do jej domowej klatki. Teraz opróżnij ściółkę z klatki testowej i wyczyść klatkę roztworem czyszczącym. Powtórz procedurę dla każdej myszy i zmieniaj rękawiczki przed i po każdej myszy.

Następnie podaj myszy tylko tyle jedzenia, aby utrzymać 90% masy ciała. Wykonaj test w drugim do piątym dniu w taki sam sposób, jak w pierwszym dniu testu, ale zakop granulkę w innym miejscu w klatce dla każdej próby testowej. Szóstego dnia, zamiast nosić granulat pod ściółką, umieść go na wierzchu ściółki.

Zapisz czas, w którym mysz znajduje i zaczyna jeść granulkę na tym etapie. Umieść pięć klocków oznaczonych od A do E w czystej klatce domowej myszy na 24 godziny. Następnego dnia i na godzinę przed badaniem wyjmij butelkę z wodą i pojemnik na karmnik i przenieś wszystkie pięć bloków z klatki wraz z garścią ściółki do plastikowej torby z oznaczeniem identyfikacyjnym zwierzęcia.

Następnie przyzwyczaj zwierzę do jego domowej klatki bez pojemnika na butelki z wodą i blokuje się na godzinę przed badaniem. Teraz ustaw wszystkie klatki myszy na stole z co najmniej 10 centymetrami między klatkami. Następnie oznacz kartę ważnymi szczegółami eksperymentu i nagrywaj etykietę na wideo przez dwie do trzech sekund.

Wyjmij klocki od A do D z plastikowej torby z identyfikatorem myszy i umieść je na środku klatki, tak aby były wyraźnie widoczne na kamerze wideo. Upewnij się, że między blokami jest około jednego centymetra odstępu. Teraz umieść górną część filtra z powrotem na klatce.

Uruchom minutnik i nagrywaj wideo na 30 sekund. Po 30 sekundach zatrzymaj nagrywanie. Wyjmij klocki z klatki i umieść je na zewnątrz klatki między próbami.

Zmień rękawiczki, a następnie przejdź do następnej myszy. Zrób to, aby uzyskać w sumie sześć prób dla każdej myszy, upewniając się, że interwał między próbami wynosi około pięciu minut. W siódmej próbie usuń blok D z jego własnej klatki i dodaj blok E z klatki innej myszy.

Tak więc, jeśli mysz jest wystawiona na działanie bloku A, B i C z własnej klatki domowej i bloku E z klatki innej myszy, zapis w książce laboratoryjnej, na którego blok E każda mysz jest narażona, oraz naprzemienne umieszczenie bloku E.In klatce każdej myszy, nagrywaj na wideo przez 30 sekund. Po siedmiu próbach przywróć zwierzę do nowego czystego miernika z oryginalnymi kolegami z klatki. Wyczyść bloki użyte w teście łagodnym detergentem i wodą i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu do użycia W późniejszych testach wykonaj test przyzwyczajenia w podobny sposób, jak test blokowy.

Ale zamiast używać klocków, które mają zapach myszy, użyj wkładów z bibułkami higienicznymi zawierającymi bawełnę pachnącą różnymi parami ekstraktów. Następnie przyzwyczaj mysz w pokoju testowym. Przygotuj pachnące wkłady chusteczki w oddzielnym pomieszczeniu.

Umieść mały wacik w czystym kartuszu, a następnie dodaj pięć mikrolitrów ekstraktu do bawełny. Zatrzaśnij górną część wkładu na bawełnie i umieść w dedykowanym pudełku lub torbie oznaczonej tym zapachem. Zmieniaj rękawiczki między obchodzeniem się z zapachami.

Następnie postępuj zgodnie z procedurami w teście blokowym, używając 1 centa, wkładu tkankowego w pierwszych sześciu próbach i drugiego centa wkładu tkankowego w siódmym badaniu. Ten rysunek pokazuje opóźnienie w znalezieniu granulatu w typie dzikim i dwóch myszy z nokautem A TP 13 A w teście zakopanych granulek. Ten rysunek pokazuje czas wąchania nowego bloku blokowego E w teście blokowym między typem dzikim a dwoma myszami z nokautem ATP 13 A.

A to jest w międzyczasie: wąchanie zatwierdzonego wkładu u myszy typu dzikiego w sześciu próbach i wprowadzenie wkładu o nowym zapachu w siódmej próbie w teście przyzwyczajenia. Wykonując tę baterię testów, ważne jest, aby pamiętać o podjęciu wszelkich środków w celu zmniejszenia wszelkich zewnętrznych sygnałów węchowych. Zawsze zmieniaj rękawiczki tak często, jak to możliwe i unikaj używania perfum lub wody kolońskiej.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak oceniać funkcję węchową i mysie modele choroby neurodegeneracyjnej za pomocą tej baterii prostych testów.