Name: Procedury biopsji mięśni szkieletowych człowieka z wykorzystaniem zmodyfikowanej techniki Bergströma (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 20 s
Description: Poznaj zmodyfikowaną technikę Bergströma do pobierania biopsji mięśnia szkieletowego u ludzi. Metoda umożliwia zbieranie próbek z mięśnia obszernego bocznego do analiz histologicznych i biochemicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Brak funduszy do zadeklarowania.

Opisana procedura dotycząca mięśni szkieletowych została przeprowadzona zgodnie z wytycznymi Instytucjonalnej Komisji Recenzenckiej Uniwersytetu Appalachian State.
UWAGA: Zespół składa się z operatora (doktora nauk lub lekarza przeszkolonego w technice biopsji) oraz co najmniej jednego, a najlepiej trzech lub więcej techników. Operator jest odpowiedzialny za przeprowadzenie i nadzór nad wszystkimi aspektami procedury biopsji mięśnia szkieletowego. Jeden technik (technik nr 1) jest bezpośrednio odpowiedzialny za pomaganie operatorowi we wszystkich etapach pobierania mięśnia. Obejmuje to pełnienie roli „niejałowych rąk” oraz odsysanie za pomocą jałowej strzykawki. Drugi technik (technik nr 2) rozmawia z badanym i masuje jego przeciwległą nogę podczas procedury, aby zminimalizować lęk badanego. Trzeci technik (technik nr 3) jest odpowiedzialny za obsługę i przetwarzanie próbki mięśnia szkieletowego. Liczba dodatkowych techników wymaganych do przetwarzania/przygotowania próbki mięśnia szkieletowego zależy od planowanych dalszych pomiarów analitycznych.
1. Przygotowanie obiektu
<ol>
	<li>Zgromadzić, przygotować i uporządkować materiały określone dla procedury biopsji mięśni (Tabela 1). Odkazić i wysterylizować igłę Bergströma (kaniulę zewnętrzną i trokar wewnętrzny) oraz tłok zgodnie ze standardową praktyką16.</li>
	<li>Omówić formularz świadomej zgody z badanym. Część dotycząca biopsji mięśni szkieletowych formularza Zgody na Udział stosowanego na Appalachian State University znajduje się w suplemencie online 1.
	<ol>
		<li>Porozmawiać z badanym o ogólnych aspektach procedury biopsji mięśni, skupiając się na możliwych ryzykach związanych z zabiegiem, przygotowaniu skóry, podaniu znieczulenia oraz typowych odczuciach. Polecić badanemu uważne przeczytanie formularza Zgody na Udział i podpisanie go w celu potwierdzenia zrozumienia projektu badania i procedur.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Potwierdzić, że badany nie jest uczulony na leki typu „___kaina” (np. lidokainę).</li>
	<li>Polecić badanemu położyć się na plecach na wyściełanym stole z odsłoniętym udem. Umieścić dwa jednorazowe podkłady chłonne z plastikowym spodem pod nogą badanego. Ułożyć nogę w rozluźnionym ustawieniu z małym zwiniętym ręcznikiem pod piętą, tak aby kolano było w pełnym wyproście (uniesione o ~1 cm), co ustawi mięsień obszerny boczny w pozycji skróconej.</li>
	<li>Operator powinien polecić badanemu chwilowe napięcie odsłoniętego mięśnia uda, aby umożliwić wizualizację miejsca biopsji. Uwaga: miejsce biopsji mięśnia obszerny boczny znajduje się bezpośrednio przed powięzią szeroką (pasmem biodrowo-piszczelowym), w przybliżeniu w jednej trzeciej odległości między górną krawędzią rzepki a krętarzem większym7.</li>
	<li>Operator powinien zaznaczyć miejsce tuż poniżej (~0,5 cm) miejsca nacięcia cienkopisowym markerem permanentnym.</li>
	<li>Operator powinien określić przybliżoną grubość fałdu skórnego poprzez jego uciśnięcie.</li>
	<li>Operator oraz technicy powinni umyć ręce mydłem i ciepłą wodą, a następnie założyć jednorazowe rękawiczki.</li>
	<li>Operator powinien usunąć owłosienie z obszaru o wymiarach ~15 cm x 15 cm wokół miejsca biopsji (za pomocą trymera). Uwaga: usunięcie owłosienia z miejsca biopsji zapobiega przedostawaniu się włosów do nacięcia podczas zabiegu i zamykania rany, a także zapewnia lepszą przylegalność taśm zamykających do skóry (patrz 3.4).</li>
	<li>Operator powinien wysterylizować obszar za pomocą tamponów nasączonych antyseptykiem miejscowym (takim jak powidono-jod lub glukonian chlorheksydyny dla osób uczulonych na jod/owoce morza). Należy zacząć od środka i przecierać koncentrycznymi okręgami w kierunku zewnętrznej krawędzi przystrzyżonego obszaru. Należy to powtórzyć co najmniej dwukrotnie, za każdym razem używając nowego nasączonego tamponu.</li>
</ol>
2. Procedura biopsji
<ol>
	<li>Operator powinien zdjąć jednorazowe rękawiczki, umyć ręce mydłem i ciepłą wodą, a następnie założyć sterylne rękawiczki chirurgiczne, stosując technikę aseptyczną.</li>
	<li>Technik nr 1 powinien podać operatorowi sterylną draperię okienkową. Operator, stosując technikę aseptyczną, powinien założyć draperię nad miejsce biopsji, aby zachować pole sterylne.</li>
	<li>Technik nr 1 powinien podać operatorowi strzykawkę 5 ml z igłą 21 G, zachowując technikę aseptyczną. Należy oczyścić górną część fiolki z lidokainą za pomocą gazika nasączonego alkoholem.
	<ol>
		<li>Operator powinien niezwłocznie pobrać 5 ml lidokainy. Należy wyjąć igłę 21 G ze strzykawki i wyrzucić ją do pojemnika na odpady ostre.</li>
		<li>Technik nr 1 powinien podać operatorowi igłę 25 G o długości 1-½ cala, zachowując technikę aseptyczną. Operator powinien założyć igłę 1-½ cala na strzykawkę i usunąć pęcherzyki powietrza ze strzykawki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Technik nr 1 powinien spryskać miejsce nacięcia chlorkiem etylu (~0,5 cm powyżej znaku z niezmywalnego tuszu na skórze), aż skóra stanie się blada.
	<ol>
		<li>Operator powinien wprowadzić igłę do skóry właściwej mniej więcej poziomo do powierzchni skóry, wykonać aspirację, a następnie wprowadzić ~100 µl lidokainy, aby wytworzyć pęcherz o średnicy 2-4 mm.
		<ol>
			<li>Operator powinien wykonać aspirację (lekko odciągnąć tłok strzykawki), aby potwierdzić, że igła nie została wprowadzona do naczynia krwionośnego. Jeśli w strzykawce pojawi się krew, należy wyciągnąć igłę, wyrzucić ją do pojemnika na odpady ostre i rozpocząć procedurę ponownie od punktu 2.3.</li>
			<li>Operator powinien przesunąć igłę do tkanki podskórnej, wykonać aspirację, a następnie wprowadzić do tkanki ~1 ml lidokainy w celu utworzenia pęcherza. Po ustąpieniu pęcherza należy wprowadzić igłę 1-½ cala na strzykawce z lidokainą pionowo w miejsce nacięcia, zatrzymując się powierzchownie względem powięzi. Uwaga: badany może odczuwać lekkie, chwilowe kłucie podczas początkowego wstrzyknięcia lidokainy (podobne do użądlenia pszczoły).</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Należy dopilnować, aby operator nie wstrzykiwał lidokainy do mięśnia, ponieważ jest ona miotoksyczna17-19.</li>
		<li>Operator powinien wykonać aspirację, a następnie powoli wstrzyknąć pozostałe 4 ml lidokainy, wycofując igłę z uda. Należy przyłożyć sterylną gazę do miejsca wstrzyknięcia i pozwolić badanemu odpocząć do momentu zadziałania znieczulenia miejscowego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Po 2-3 min technik nr 1 powinien podać operatorowi skalpel, zachowując technikę aseptyczną.
	<ol>
		<li>Operator powinien lekko zbadać miejsce biopsji końcówką skalpela, aby potwierdzić znieczulenie obszaru. W razie potrzeby należy wstrzyknąć kolejne 3-4 ml lidokainy w miejsce nacięcia, zgodnie z punktem 2.4.1.2.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Operator powinien wykonać proste nacięcie o długości 1 cm przez skórę i tkanki podskórne (~2-3 mm powyżej znaku z tuszu), równolegle do kości udowej.
	<ol>
		<li>Operator powinien wprowadzić skalpel głębiej, aby wykonać nacięcie przez powięź do mięśnia. Należy to zrobić raz w każdym kierunku. Uwaga: badany może odczuć ukłucie lub ucisk przy głębszym cięciu, jeśli ostrze skalpela przetnie mięsień.</li>
		<li>Technik nr 2 powinien zaangażować badanego w rozmowę i masować przeciwległą nogę.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Operator powinien przyłożyć dużą ilość sterylnej gazy na nacięcie i miejsce biopsji oraz wywrzeć bezpośredni ucisk na nacięcie, aby zmniejszyć krwawienie.
	<ol>
		<li>Technik nr 1 powinien podłączyć metalowy kranik trójdrożny do jednorazowej strzykawki 60 ml oraz do 30-centymetrowego przewodu przedłużającego (Rysunek 1).</li>
		<li>Technik nr 1 powinien podłączyć jeden koniec stożkowego łącznika plastikowego do wolnego końca przewodu przedłużającego, a drugi koniec stożkowego łącznika plastikowego mocno wsunąć w szeroki koniec końcówki do pipety 200 µl, z której odcięto ok. 15-18 mm.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Schemat systemu wstrzykiwania chemikaliów; obejmuje strzykawki, przewody, złączki; zestaw do podawania płynów." fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51812/51812fig1highres.jpg" width="500" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Igła Bergströma. (A) Igła Bergströma (5 mm) składa się z (a) kaniuli zewnętrznej i (b) trokara wewnętrznego; powiązane elementy obejmują (c) tłok, (d) końcówkę pipety 200 µl z odciętym odcinkiem ~15-18 mm, (e) stożkowy łącznik plastikowy, (f) metalowy kranik trójdrożny, (g) 30 cm przedłużenia przewodu oraz (h) jednorazową strzykawkę 60 ml. (B) Zmontowana igła Bergströma (5 mm) wraz z powiązanymi elementami. (C) Wycofanie trokara wewnętrznego igły Bergströma (5 mm) o około 1 cm otwiera okno kaniuli zewnętrznej.
<ol start="9">
	<li>Po ustąpieniu krwawienia technik nr 1 otwiera sterylną torebkę z autoklawu i podaje operatorowi 5 mm igłę do biopsji oraz trokar wewnętrzny (Rysunek 1), zachowując technikę aseptyczną.
	<ol>
		<li>Operator składa igłę (kaniulę zewnętrzną i trokar wewnętrzny), sprawdzając jej osiowość i płynność przesuwania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Operator mocno trzyma zespół igły (kaniulę zewnętrzną i trokar wewnętrzny) obiema rękami, aby zapobiec obrotowi trokara wewnętrznego. Technik nr 1 pewnie wkłada odcięty końcówkę pipety do górnej części trokara wewnętrznego igły do biopsji, wykonując lekki ruch obrotowy w dół. Należy upewnić się, że technik nr 1 nie dotyka operatora ani igły do biopsji, a jedynie końcówki pipety.</li>
	<li>Operator wprowadza igłę do biopsji do tkanki przez nacięcie. Za pomocą końcówki igły do biopsji lokalizuje nacięcie w powięzi (wymaga to wyczucia). Igłę posuwa się tuż za powięź, a następnie kieruje ją w dół, w stronę podłogi, podczas wprowadzania w mięsień. Uwaga: badani mogą odczuwać lekki dyskomfort (np. „ucisk głęboki” lub lekkie uczucie skurczu) podczas lokalizowania nacięcia w powięzi końcówką igły do biopsji i wprowadzania igły w mięsień.
	<ol>
		<li>Technik nr 2 instruuje badanego, aby pozostał „rozluźniony” i nie napinał mięśni uda podczas wprowadzania igły w mięsień przez operatora.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Po ustawieniu igły do biopsji w odpowiedniej pozycji operator daje znak technikowi nr 1, aby ten otworzył jednorazową strzykawkę 60 ml.
	<ol>
		<li>Technik nr 1 szybko odciąga tłok jednorazowej strzykawki 60 ml do oznaczenia 40-50 cc, aby wytworzyć podciśnienie wewnątrz igły do biopsji.</li>
		<li>Operator wycofuje trokar wewnętrzny o około 1 cm, aby otworzyć okno kaniuli zewnętrznej, utrzymując jednocześnie pozycję kaniuli zewnętrznej w mięśniu. Operator szybko przesuwa trokar wewnętrzny, aby odciąć (wyciąć) i pobrać próbkę mięśnia. Następnie operator daje znak technikowi nr 1, aby zwolnił podciśnienie.</li>
		<li>Technik nr 1 otwiera kurek do atmosfery, aby zwolnić podciśnienie.</li>
		<li>Operator obraca igłę do biopsji o 90° i powtarza proces. W razie potrzeby operator powtarza procedurę obrotu do 3 razy (łącznie 4 wycinki).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Operator wywiera bezpośredni ucisk przeciwstawny na miejsce nacięcia za pomocą sterylnej gazy podczas wyciągania igły do biopsji z uda, uważając, aby nie zahaczyć o powięź lub skórę. Jeśli wyczuwalny jest znaczny opór, należy ponownie przeciąć tkankę, wykonując ruch obrotowy trokarem wewnętrznym.</li>
	<li>Po wyjęciu igły do biopsji z uda operator wycofuje trokar wewnętrzny o 1 cm, aby wizualnie ocenić światło kaniuli zewnętrznej i oszacować, czy pobrano odpowiednią ilość tkanki.
	<ol>
		<li>Operator przekazuje igłę do biopsji technikowi nr 1. Aby zachować technikę aseptyczną, należy upewnić się, że technik nr 1 dotyka tylko igły, a nie operatora. Technik nr 1 przekazuje igłę do biopsji technikowi nr 3.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Technik nr 3 usuwa tkankę z igły do biopsji.
	<ol>
		<li>Technik nr 3 używa tłoka (Rysunek 1) i pęsety z cienką końcówką, aby upewnić się, że cała tkanka mięśniowa została usunięta z trokara wewnętrznego i kaniuli zewnętrznej.</li>
		<li>Technik nr 3 szybko waży próbkę, aby potwierdzić pobranie odpowiedniej ilości tkanki mięśniowej, a następnie umieszcza próbki na lodowym bloku sekcyjnym.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Technik nr 3 ostrożnie oddziela widoczną tkankę łączną i tłuszcz od próbek mięśni. Technik nr 3 przygotowuje próbki mięśni do przechowywania zgodnie z planowanymi analizami. Na przykład: natychmiast umieszcza próbki w krio-probówce i gwałtownie zamraża w ciekłym azocie, montuje i zamraża do badań histologicznych lub umieszcza w krio-probówce z inhibitorem RNazy itd.</li>
	<li>W razie potrzeby należy powtórzyć procedurę z użyciem drugiej sterylnej igły do biopsji, zachowując technikę aseptyczną.</li>
</ol>
3. Zamknięcie
<ol>
	<li>Poprosić operatora o wywarcie bezpośredniego nacisku na miejsce biopsji za pomocą sterylnej gazy i okładu z lodu przez 10-15 min.</li>
	<li>Po uzyskaniu hemostazy poprosić operatora o użycie alkoholowych gazików do usunięcia zaschniętej krwi z obszaru wokół nacięcia.</li>
	<li>Technik nr 1 powinien podać operatorowi tubkę z miejscowym klejem chirurgicznym oraz aplikator. Operator powinien zmontować tubkę z klejem chirurgicznym i aplikatorem, nie dotykając końcówki aplikatora ani góry tubki.</li>
	<li>Poprosić operatora o ściągnięcie brzegów nacięcia jedną ręką, jednocześnie nakładając jedną warstwę kleju chirurgicznego na suchą ranę drugą ręką. Po utwardzeniu kleju (~ 90 sec) należy założyć plastry zamykające prostopadle do nacięcia. Alternatywnie można zamknąć nacięcie za pomocą dwóch sterylnych szwów 4-0.</li>
	<li>Poprosić operatora o wywarcie bezpośredniego nacisku poprzez umieszczenie 3-4 niesterylnych gazików o wymiarach 2” x 2” na miejscu nacięcia i zabezpieczenie ich samoprzylepnym bandażem elastycznym.</li>
	<li>Poprosić operatora o przekazanie badanemu ustnych i pisemnych instrukcji dotyczących prawidłowej pielęgnacji rany, normalnych i nieprawidłowych reakcji oraz wytycznych dotyczących aktywności w ciągu następnych 1 do 4 dni (patrz: suplement online 2).</li>
</ol>

<ol><li>Duchene, G. B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recherches+sur+la+paralysie+musculaire+pseudohypertrophique+ou+paralysie+myo-sclerosique%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Gen+Med%22%5BJournal%5D)">Recherches sur la paralysie musculaire pseudohypertrophique ou paralysie myo-sclerosique.</a> Arch Gen Med. 11 (30), (1868).</li>
<li>Bergstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+electrolytes+in+man.+Determined+by+neutron+activation+analysis+on+needle+biopsy+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Clin+Lab+Invest+%28England%29%22%5BJournal%5D)">Muscle electrolytes in man. Determined by neutron activation analysis on needle biopsy specimens.</a> Scand J Clin Lab Invest (England). 14, (1962).</li>
<li>Bergstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+needle+biopsy+of+skeletal+muscle+in+physiological+and+clinical+research%29%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Clin+Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Percutaneous needle biopsy of skeletal muscle in physiological and clinical research).</a> Scand J Clin Lab Invest. 35, 609-616 (1975).</li>
<li>Bergstrom, J., Hultman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+the+glycogen+metabolism+during+exercise+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Clin+Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">A study of the glycogen metabolism during exercise in man.</a> Scand J Clin Lab Invest. 19, 218-228 (1967).</li>
<li>Evans, W. J., Phinney, S. D., Young, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suction+applied+to+a+muscle+biopsy+maximizes+sample+size%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Suction applied to a muscle biopsy maximizes sample size.</a> Med Sci Sports Exerc. 14, 101-102 (1982).</li>
<li>Hennessey, J. V., Chromiak, J. A., Della Ventura, S., Guertin, J., MacLean, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+percutaneous+muscle+biopsy+yield+with+a+suction-enhancement+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Phys%22%5BJournal%5D)">Increase in percutaneous muscle biopsy yield with a suction-enhancement technique.</a> J Appl Phys. 82, 1739-1742 (1997).</li>
<li>Tarnopolsky, M. A., Pearce, E., Smith, K., Lach, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suction-modified+Bergstrom+muscle+biopsy+technique%3A+experience+with+13%2C500+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22Muscl.%2C+%26+Nerve%22%5BJournal%5D)">Suction-modified Bergstrom muscle biopsy technique: experience with 13,500 procedures.</a> Muscl., & Nerve. 43, 717-725 (2011).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbohydrate+ingestion+influences+skeletal+muscle+cytokine+mRNA+and+plasma+cytokine+levels+after+a+3-h+run%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Carbohydrate ingestion influences skeletal muscle cytokine mRNA and plasma cytokine levels after a 3-h run.</a> J Appl Physiol. 94, 1917-1925 (2003).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+carbohydrate+ingestion+on+immune+changes+after+2+h+of+intensive+resistance+training%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Influence of carbohydrate ingestion on immune changes after 2 h of intensive resistance training.</a> J Appl Physiol. 96, 1292-1298 (2004).</li>
<li>Utter, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbohydrate+supplementation+and+perceived+exertion+during+prolonged+running%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Carbohydrate supplementation and perceived exertion during prolonged running.</a> Med Sci Sports Exerc. 36, 1036-1041 (2004).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+cytokine+mRNA+changes+after+2.5+h+of+cycling%3A+influence+of+carbohydrate%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Muscle cytokine mRNA changes after 2.5 h of cycling: influence of carbohydrate.</a> Med Sci Sports Exerc. 37, 1283-1290 (2005).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+quercetin+and+EGCG+on+mitochondrial+biogenesis+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Effects of quercetin and EGCG on mitochondrial biogenesis and immunity.</a> Med Sci Sports Exerc. 41, 1467-1475 (2009).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin%27s+Influence+on+Exercise+Performance+and+Muscle+Mitochondrial+Biogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Quercetin's Influence on Exercise Performance and Muscle Mitochondrial Biogenesis.</a> Med Sci Sports Exerc. 42, 338-345 (2010).</li>
<li>Dumke, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin%27s+effect+on+cycling+efficiency+and+substrate+utilization%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Physiol+Nut+Metab%22%5BJournal%5D)">Quercetin's effect on cycling efficiency and substrate utilization.</a> Appl Physiol Nut Metab. 34, 993-1000 (2009).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin%27s+influence+on+exercise-induced+changes+in+plasma+cytokines+and+muscle+and+leukocyte+cytokine+mRNA%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quercetin's influence on exercise-induced changes in plasma cytokines and muscle and leukocyte cytokine mRNA.</a> J Appl Physiol. 103, 1728-1735 (2007).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guideline+for+Disinfection+and+Sterilization+in+Healthcare+Facilities%5BTitle%5D)+AND+%22http%3A%2F%2Fwww.cdc.gov%2Fhicpac%2FDisinfection_Sterilization%2Ftoc.html%22%5BJournal%5D)">Guideline for Disinfection and Sterilization in Healthcare Facilities.</a> http://www.cdc.gov/hicpac/Disinfection_Sterilization/toc.html. , Centers for Disease Control and Prevention. (2008).</li>
<li>Faria, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+onset+and+duration+of+mobilization+affect+the+regeneration+in+the+rat+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Histol+Histopath%22%5BJournal%5D)">The onset and duration of mobilization affect the regeneration in the rat muscle.</a> Histol Histopath. 23, 565-571 (2008).</li>
<li>Carlson, B. M., Shepard, B., Komorowski, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histological+study+of+local+anesthetic-induced+muscle+degeneration+and+regeneration+in+the+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ortho+Res%22%5BJournal%5D)">A histological study of local anesthetic-induced muscle degeneration and regeneration in the monkey.</a> J Ortho Res. 8, 485-494 (1990).</li>
<li>Yagiela, J. A., Benoit, P. W., Buoncristiani, R. D., Peters, M. P., Fort, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+myotoxic+effects+of+lidocaine+with+epinephrine+in+rats+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Comparison of myotoxic effects of lidocaine with epinephrine in rats and humans.</a> Anesth Analg. 60, 471-480 (1981).</li>
<li>Coyle, E. F., Coggan, A. R., Hemmert, M. K., Ivy, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+glycogen+utilization+during+prolonged+strenuous+exercise+when+fed+carbohydrate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Muscle glycogen utilization during prolonged strenuous exercise when fed carbohydrate.</a> J Appl Physiol. 61, 165-172 (1986).</li>
<li>Gibala, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+intense+interval+exercise+activates+AMPK+and+p38+MAPK+signaling+and+increases+the+expression+of+PGC-1alpha+in+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Brief intense interval exercise activates AMPK and p38 MAPK signaling and increases the expression of PGC-1alpha in human skeletal muscle.</a> J Appl Physiol. 106, 929-934 (1985).</li>
<li>Phillips, S. M., Tipton, K. D., Ferrando, A. A., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+training+reduces+the+acute+exercise-induced+increase+in+muscle+protein+turnover%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Resistance training reduces the acute exercise-induced increase in muscle protein turnover.</a> Am J Physiol. 276, 118-124 (1999).</li>
<li>Davis, J. M., Murphy, E. A., Carmichael, M. D., Davis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+increases+brain+and+muscle+mitochondrial+biogenesis+and+exercise+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quercetin increases brain and muscle mitochondrial biogenesis and exercise tolerance.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 296, 1071-1077 (2009).</li>
<li>Vissing, K., Andersen, J. L., Schjerling, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+exercise-induced+genes+induced+by+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Are exercise-induced genes induced by exercise.</a> FASEB J. 19, 94-96 (2005).</li>
<li>Lundby, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+in+human+skeletal+muscle%3A+alternative+normalization+method+and+effect+of+repeated+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gene expression in human skeletal muscle: alternative normalization method and effect of repeated biopsies.</a> Eur J Appl Physiol. 95, 351-360 (2005).</li>
<li>Coyle, E. F., Coggan, A. R., Hemmert, M. K., Ivy, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+glycogen+utilization+during+prolonged+strenuous+exercise+when+fed+carbohydrate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Muscle glycogen utilization during prolonged strenuous exercise when fed carbohydrate.</a> J Appl Physiol. 61, 165-172 (1985).</li>
</ol>

Autorzy nie pozostają w konflikcie interesów.

Ten film zawiera podsumowanie krok po kroku procedury biopsji mięśni szkieletowych stosowanej w Laboratorium Wydajności Człowieka ASU. Ta procedura, z niewielkimi modyfikacjami, została wykorzystana do pobrania około 1600 biopsji mięśni w ciągu ostatnich 13 lat. Próbki z biopsji mięśni dostarczyły ważnych danych w badaniach opartych na żywieniu sportowym, prowadząc do ważnych odkryć badawczych.
Istnieje wiele kluczowych technik, o których należy pamiętać podczas wykonywania zmodyfikowanej tech...

Technika przezskórnej lub 'półotwartej' biopsji jest stosowana do pobierania próbek tkanki mięśni szkieletowych od pacjentów i uczestników badań. Duchenne (1806-1875) jest uznawany za pierwszego, który skonstruował igłę z trokarem w celu uzyskania mięśni szkieletowych od żywych osób za pomocą przezskórnej biopsji1. W latach sześćdziesiątych Bergström wprowadził igłę do biopsji przezskórnej, podobną do tej opisanej przez Duchenne'a2-4. Dwadzieścia lat później Evans i wsp.5 zmodyfikował technikę, stosując odsysanie przez trokar tnący igły Bergströma. Modyfikacja ta może zwiększyć wydajność tkanki od 3 do 5 razy6,7 i jest stosowana w badaniach klinicznych i biomedycznych. Technika ta przyczyniła się i będzie nadal wspierać diagnostykę miopatii oraz nasze zrozumienie struktury i funkcji mięśni szkieletowych.
Technika przezskórnej biopsji mięśni jest prosta. Przy prawidłowym wykonaniu, przy ścisłym przestrzeganiu techniki aseptycznej, związane z tym ryzyko jest minimalne. Procedura biopsji mięśni jest uważana za narzędzie badawcze dla projektów badawczych. Niektóre instytucje akademickie pozwalają wyszkolonym badaczom wydziałowym z doktoratem, pod bezpośrednim nadzorem lekarza, na uzyskanie biopsji mięśni, a inne wymagają certyfikowanego lekarza do wykonania tej techniki. Zespół biopsji ASU z powodzeniem przeprowadził ponad 1600 biopsji mięśni w ciągu ostatnich 13 lat(8-15). Celem tego filmu jest opisanie zmodyfikowanej techniki przezskórnej biopsji mięśni metodą igłowąBergströma 5 w celu uzyskania próbek tkanki mięśni szkieletowych z mięśnia obszernego bocznego u ludzi.

<table><tbody><tr><td>Bergstr&ouml; m Igła do biopsji, 5 x 100 mm</td><td>Stille Surgical Inc.</td><td>119-29187-50</td><td>1 szt</td></tr>. <tr><td>Niebieska podkładka Durasorb</td><td>Fisher</td><td>22-031-340</td><td>opakowanie 300</td></tr><tr><td>jednorazowych maszynek do golenia</td><td>Moore Medical</td><td>89760</td><td>1</td></tr><tr>szt.<td>Krem do golenia</td><td>Moore Medical</td><td>92869</td><td>1 puszka</td></tr><tr><td>Wacik nasączony alkoholem</td><td>Moore Medical</td><td>98721</td><td>pudełko/200</td></tr><tr><td>patyczków jodowo-powidonowych (3 sztuki)</td><td>Moore Medical</td><td>90691</td><td>opakowanie 50</td></tr><tr><td>szt. Maski na twarz</td><td>Fisher</td><td>19-039-690</td><td>Opakowanie 50</td></tr><tr><td>szt. Sterylne rękawiczki; sz 6.5</td><td>Moore Medical</td><td>68128</td><td>pudełko zawierające 50 par</td></tr><tr><td>Sterylne rękawice; sz 7.0</td><td>Moore Medical</td><td>68129</td><td>pudełko zawierające 50 par</td></tr><tr><td>Sterylne rękawice; sz 8.5</td><td>Moore Medical</td><td>68132</td><td>pudełko 50 par Zasłona</td></tr><tr><td>na ręcznik z okienkiem</td><td>Moore Medical</td><td>92712</td><td>Opakowanie 50</td></tr><tr><td>lidokainy (1% HCl, bez Epi)</td><td>Dealmed</td><td>427902</td><td>fiolkę 30 cc</td></tr><tr><td>chlorek etylu w sprayu</td><td>Dealmed</td><td>386020</td><td>3,5 fl. Butelka</td></tr><tr><td>5 ml strzykawka z igłą 21 G</td><td>Fisher</td><td>14-827-48</td><td>skrzynka 100</td></tr><tr><td>igły 25 G 5/8"</td><td>Fisher</td><td>14-826AA</td><td>skrzynka 100</td></tr><tr><td>igły 25 G 1 1/2"</td><td>Fisher</td><td>14-826-49</td><td>skrzynka 100</td></tr><tr><td>jednorazowych skalpeli z ostrzem #11</td><td>Fisher</td><td>0-8927-5B</td><td>pudełko zawierające 20</td></tr><tr><td>strzykawek 60 ml</td><td>Fisher</td><td>13-689-8</td><td>etui z</td></tr> <tr><td>rurką przedłużającą 40 ~ 30 cali</td><td>Fisher</td><td>14-169-7A rolka</td><td>50 stóp</td></tr><tr><td>Metalowy kran</td><td>Fisher</td><td>01-290-38</td><td>każdy</td></tr><tr><td>Łącznik rurki polipropylenowej ze stożkowymi końcami, 3,2 do 5,5 mm</td><td>Fisher</td><td>15-315-28A</td><td>pudełko 100</td></tr><tr><td>Żółte końcówki do pipet (1-200 i mikro; l)</td> <td>Fisher</td><td>02-681-2</td><td>odciąć ~ 15-18 mm końcówki</td></tr><tr><td>Miejscowy klej chirurgiczny</td><td>Medline</td><td>MSC091076</td><td>przypadku 36 tubek</td></tr><tr><td>Miejscowy klej chirurgiczny</td><td>Medline</td><td>MSC091076Z</td><td>pudełko z 6 tubkami</td></tr><tr><td>Szwy motylkowe (paski samoprzylepne) 1/2 "x 4" (6 w opakowaniu)</td> <td>Moore Medical</td><td>93050</td><td>pudełko / 300</td></tr><tr><td>Bandadge, pasek, 3/4 x 3 cale.</td><td>Fisher</td><td>19-027-202</td><td>opakowanie 100</td></tr><tr><td>szt. Bandaż samoprzylepny (rolki 5 m)</td><td>Fisher</td><td>19-027-768</td><td>etui 36</td></tr><tr><td>1-calowa taśma chirurgiczna</td> papierowa <td>Fisher</td><td>19-027-761</td><td>skrzynka 12</td></tr><tr><td>szwów (4-0 odwrotne cięcie, FS2)</td><td>Moore Medical</td><td>82926</td><td>pudełko 36</td></tr><tr><td>4 x 4 Sterylne gaziki</td><td>Moore Medical</td><td>66949</td><td>opakowanie/50</td></tr><tr><td>2 x 2 Niesterylne gaziki</td><td>Moore Medical</td><td>37336</td><td>opakowanie/200</td></tr><tr><td>3 x 4 Nieprzywierające podkładki</td><td>Moore Medical</td><td>74389</td><td>bx/100</td></tr><tr><td>Worki autoklawowe 3,5 x 9</td><td>Moore Medical</td><td>40390</td><td>pudełko 200</td></tr><tr><td>worków autoklawowych 5,25 x 10</td><td>Moore Medical</td><td>40391</td><td>pudełko 200</td></tr> taśm <tr><td>wskaźnikowych do autoklawu</td><td>Moore Medical</td><td>31608</td><td>pudełko 250</td></tr><tr><td>Lab Płaszcze&mdash; mały</td><td>Fisher</td><td>23-900-520A&nbsp;</td><td>10/pk</td></tr><tr><td>Fartuchy laboratoryjne&mdash; średni</td><td>Fisher</td><td>23-900-520B&nbsp;</td><td>10/pk</td></tr><tr><td>Fartuchy laboratoryjne&mdash; duży</td><td>Fisher</td><td>23-900-520C&nbsp;</td><td>10/pk</td></tr><tr><td>Bakteriobójcze jednorazowe chusteczki szmatką</td><td>Moore Medical</td><td>62879</td><td>Can/160</td></tr></tbody></table>

procedury biopsji mięśni szkieletowych człowieka z wykorzystaniem zmodyfikowanej techniki bergströma

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

Technika przezskórnej biopsji umożliwia badaczom i klinicystom pobieranie próbek tkanki mięśni szkieletowych. Technika jest bezpieczna i wysoce skuteczna. Ten film opisuje technikę biopsji przezskórnej z użyciem zmodyfikowanej igły Bergströma w celu uzyskania próbek tkanki mięśni szkieletowych z mięśnia obszernego bocznego u ludzi. Igła Bergströma składa się z zewnętrznej kaniuli z małym otworem ("okienkiem") z boku końcówki i wewnętrznego trokaru z ostrzem tnącym na dystalnym końcu. W znieczuleniu miejscowym i w warunkach aseptycznych igła jest wprowadzana do mięśnia szkieletowego przez nacięcie w skórze, tkance podskórnej i powięzi. Następnie ssanie jest przykładane do wewnętrznego trokaru, zewnętrzny trokar jest odciągany do tyłu, tkanka mięśni szkieletowych jest wciągana do okna zewnętrznej kaniuli przez ssanie, a wewnętrzny trokar jest szybko zamykany, przecinając w ten sposób lub przycinając próbkę tkanki mięśni szkieletowych. Igła jest obracana o 90° i wykonywane jest kolejne cięcie. Proces ten można powtórzyć jeszcze trzy razy. Ta technika wielokrotnego cięcia zazwyczaj wytwarza próbkę 100-200 mg lub więcej u zdrowych osób i może być wykonana bezpośrednio przed, w trakcie i po treningu lub innej interwencji. Po opatrunku pobiopsyjnym w miejscu nacięcia, pacjenci zazwyczaj od razu wznawiają swoje codzienne czynności i mogą w pełni uczestniczyć w energicznej aktywności fizycznej w ciągu 48-72 godzin. Pacjenci powinni unikać ciężkich ćwiczeń oporowych przez 48 godzin, aby zmniejszyć ryzyko przepukliny mięśnia przez nacięcie w powięzi.

Opisana powyżej procedura biopsji mięśnia pozwala badaczowi na szybkie i powtarzalne pobieranie próbek tkanki mięśnia szkieletowego. Typowa wydajność u zdrowych, wysportowanych osób wynosi 200 mg lub więcej przy jednorazowym pobraniu z wykorzystaniem 3-4 kleszczyków. Procedura trwa od 15 do 20 min, z czego większość czasu zajmuje przygotowanie do nacięcia. W badaniach opartych na wysiłku fizycznym próbki mięśni często pobiera się przed i po wysiłku, a jedną lub dwie próbki podczas regeneracji. Przy takim schemacie włosy ...

Celem tego filmu jest przedstawienie zmodyfikowanej techniki biopsji mięśni szkieletowych Bergströma na ludziach.

Procedury biopsji mięśni szkieletowych człowieka z wykorzystaniem zmodyfikowanej techniki Bergströma

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

Ogólnym celem tej procedury jest wykorzystanie zmodyfikowanej techniki Bergstroma do wykonania próbki biopsji mięśni szkieletowych z obszernych bocznych części ciała ochotnika. Osiąga się to poprzez uprzednie znieczulenie skóry i tkanki podskórnej w miejscu biopsji. W drugim etapie wykonuje się nacięcie przez skórę, tkankę podskórną i powięź pokrywającą mięśnie szkieletowe.Następnie igła do biopsji jest wprowadzana przez nacięcia do mięśnia szkieletowego, a w ostatnim etapie pobierana jest próbka biopsji. Igła do biopsji jest ostrożnie usuwana, a nacięcie zamykane jest klejem chirurgicznym. Ostatecznie próbki biopsji mięśni szkieletowych można przygotować do analiz histologicznych i przeanalizować pod kątem zmian biochemicznych i ekspresji określonych białek i genów w różnych warunkach wysiłku.Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie fizjologii mięśni szkieletowych, takie jak jakie są biochemiczne, molekularne i komórkowe reakcje na forsowne ćwiczenia. Procedurę zademonstrują dr Gerald Ferris, lekarz z naszego lokalnego szpitala oraz Maschi Tanaka, technik z naszego laboratorium. Po uzyskaniu świadomej zgody, poinstruuj pacjenta, aby położył się na wznak na wyściełanym stole z odsłoniętym udem, ułóż nogę w zrelaksowany sposób z małym ręcznikiem zwiniętym pod piętą, tak aby kolano było całkowicie wyprostowane i uniesione na około jeden centymetr.Następnie poinstruuj pacjenta, aby chwilowo skurczył odsłonięty mięsień uda, tak aby można było uwidocznić rozległe miejsce biopsji bocznej tuż przed powięzią. Lata około jednej trzeciej odległości między wierzchołkiem rzepki a większym trokanterem. Następnie użyj maszynki do strzyżenia, aby usunąć włosy z obszaru o wymiarach około 15 na 15 centymetrów wokół miejsca biopsji i wysterylizuj obszar wacikami nasączonymi miejscowym środkiem antyseptycznym, aby pobrać biopsję przy użyciu odpowiednich środków ochrony osobistej i techniki septycznej.Najpierw rozpyl chlorek etylu w miejsce nacięcia, aż skóra zacznie blednąć. Następnie włóż igłę o rozmiarze 25 poziomo do skóry właściwej, odessać igłę i dozować około 100 mikrolitrów lidokainy, aby wytworzyć pęcherzyk o średnicy od dwóch do czterech milimetrów pod powierzchnią skóry. Następnie wsuń igłę w tkankę podskórną, ponownie zaaspiruj i dozuj około jednego mililitra lidokainy, aby utworzyć kolejny pęcherzyk.Gdy drugi pęcherzyk ustąpi, włóż igłę w miejsce nacięcia, zatrzymując się powierzchownie do powięzi, odessaj igłę po raz ostatni, a następnie powoli wstrzyknij pozostałe cztery mililitry lidokainy, jednocześnie wyjmując igłę z uda. Po dwóch do trzech minutach delikatnie zbadaj miejsce biopsji końcówką sterylnego skalpela, aby potwierdzić znieczulenie. Gdy miejsce jest gotowe, wykonaj proste, jednocentymetrowe nacięcie przez skórę i tkanki podskórne pod kątem 45 stopni w stosunku do kości udowej.Następnie raz w każdym kierunku włóż skalpel wystarczająco głęboko, aby wykonać nacięcie przez powięź do mięśnia. Ogólnie rzecz biorąc, osoby nowe w tej metodzie muszą uzbroić się w cierpliwość, ponieważ uczą się wyczuwać zmianę oporu między tkanką podskórną a powięzią podczas podawania znieczulenia miejscowego oraz podczas przecinania skóry, tkanki podskórnej i powięzi. Teraz wprowadź igłę do biopsji do tkanki pod tym samym kątem, pod jakim wykonano nacięcie, aż końcówka wejdzie do powięzi.Przesuń igłę tuż obok powięzi pod kątem w dół, gdy jest wprowadzana do mięśnia. Poinstruuj pacjenta, aby pozostał zrelaksowany i nie napinał mięśnia uda podczas przesuwania igły. Następnie, gdy igła do biopsji znajdzie się na swoim miejscu, otwórz jednorazową strzykawkę o pojemności 60 mililitrów do znaku 40 do 50 mililitrów, aby wytworzyć ssanie w igle do biopsji.Wyciągnij wewnętrzny trokar na około jeden centymetr, aby otworzyć okienko zewnętrznej kaniuli, utrzymując jednocześnie pozycję zewnętrznej kaniuli w mięśniu. Następnie szybko zamknij wewnętrzny trokar, aby przeciąć i pobrać próbkę mięśni. Następnie otwórz kurek odcinający, aby zwolnić ssanie i obróć igłę do biopsji o 90 stopni, powtarzając proces do trzech razy, co daje w sumie cztery klipsy.Następnie po wyjęciu igły z biopsji należy usunąć igłę z uda. Odciągnij wewnętrzny trokar o jeden centymetr do tyłu i sprawdź wzrokowo światło zewnętrznej kaniuli, aby ocenić, czy pobrano odpowiednią ilość tkanki. Wywieraj bezpośredni nacisk na miejsce biopsji za pomocą sterylnej gazy i okładu z lodu przez 10 do 15 minut.W tym czasie usuń tkankę z igły do biopsji Po oblodzeniu jedną ręką zamknij nacięcie, a drugą nakładając pojedynczą warstwę kleju chirurgicznego na wierzch suchego nacięcia. Po utwardzeniu kleju przez około 90 sekund nałóż taśmę zamykającą prostopadle do nacięcia, a następnie umieść trzy do czterech niesterylnych gazików o wymiarach dwa na dwa cale w miejscu nacięcia i zabezpiecz je samoprzylepną folią samoprzylepną, aby wywrzeć bezpośredni nacisk na tkankę. Na koniec udziel pacjentowi ustnych i pisemnych instrukcji dotyczących prawidłowej pielęgnacji ran, normalnych i nieprawidłowych reakcji oraz wskazówek dotyczących aktywności przez następny okres od jednego do czterech dni.W randomizowanym, kontrolowanym placebo badaniu krzyżowym, sportowcy wytrzymałościowi płci męskiej biegali na bieżni przez trzy godziny z maksymalną zawartością 70% VO O2 i spożywali napój 6% węglowodanowy lub placebo w tempie jednego litra na godzinę. Biopsje tkanki mięśni szkieletowych wykonano przed i po wysiłku fizycznym i zaobserwowano zwiększoną ekspresję genów różnych cytokin w tkance mięśni szkieletowych uzyskanej od doświadczonych sportowców wytrzymałościowych po trzech godzinach biegu, co ciekawe, pomimo braku wpływu na mięśnie szkieletowe, wyczerpanie glikogenu, zaobserwowano, że spożycie węglowodanów osłabia poziomy mRNA IL sześć i IL osiem po jego opracowaniu. Technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się fizjologią mięśni do zbadania takich zasad, jak między innymi wykorzystanie substratu paliwowego podczas ćwiczeń o różnej intensywności, uszkodzenie mięśni wywołane wysiłkiem fizycznym i sygnalizacja międzykomórkowa.

human-skeletal-muscle-biopsy-procedures-using-modified-bergstrm

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Aby ocenić efekty in vivo interwencji terapeutycznych w chorobach mięśni, konieczne są metody ilościowego pomiaru generowanej siły oraz podatności na zmęczenie w leczonych mięśniach. Szczegółowo opisujemy podejście do oceny właściwości miomechanicznych w wyizolowanym mięśniu kończyny tylnej myszy. Analiza ta stanowi solidną metodę ilościowego określania wpływu modyfikacji genetycznej na funkcję mięśni, a także porównywania terapii w modelach mysich chorób mięśni.

Analiza miomechaniczna wyizolowanego mięśnia szkieletowego

Głównymi typami komórek przylegających pochodzących z ludzkich mięśni są komórki miogenne i fibroblasty. W tym przypadku populacje komórek są wzbogacane za pomocą sortowania komórek aktywowanego magnetycznie na podstawie antygenu CD56. Późniejsze znakowanie immunologiczne za pomocą specyficznych przeciwciał i zastosowanie technik analizy obrazu pozwala na ilościowe określenie cech cytoplazmatycznych i jądrowych w poszczególnych komórkach.

Izolacja i ilościowa charakterystyka immunocytochemiczna pierwotnych komórek miogennych i fibroblastów z ludzkich mięśni szkieletowych

Opisano metody biopsji mięśnia obszernego bocznego, przygotowania oczyszczonych mitochondriów i profilowania respirometrycznego. Wykorzystanie małej objętości mięśniowej sprawia, że technika ta nadaje się do zastosowań w badaniach klinicznych.

Przygotowanie i ocena respirometryczna mitochondriów wyizolowanych z tkanki mięśni szkieletowych uzyskana metodą przezskórnej biopsji igłowej

Ten film demonstruje technikę przezskórnej biopsji mięśnia obszernego bocznego człowieka przy użyciu konchotomu Weila-Blakesleya.

Biopsja mięśni szkieletowych mięśnia obszernego bocznego człowieka przy użyciu konchotomu Weila-Blakesleya

Przedstawiamy szczegółowe protokoły przeprowadzania eksperymentów dyfrakcji rentgenowskiej pod małym kątem przy użyciu nienaruszonych mięśni szkieletowych myszy. Dzięki szerokiej dostępności transgenicznych modeli myszy w chorobach ludzkich, ta eksperymentalna platforma może stanowić użyteczne stanowisko testowe do wyjaśnienia strukturalnych podstaw genetycznych chorób...

Dyfrakcja rentgenowska nienaruszonych mięśni szkieletowych myszy jako narzędzie do badania strukturalnych podstaw choroby mięśni

Prezentujemy techniki izolacji, hodowli, charakterystyki i różnicowania ludzkich pierwotnych komórek progenitorowych mięśni (hMPC) uzyskanych z tkanki biopsji mięśni szkieletowych.  hMPC uzyskane i scharakteryzowane za pomocą tych metod mogą być wykorzystane do późniejszego rozwiązywania problemów badawczych związanych z ludzką miogenezą i regeneracją mięśni szkieletowych.

Izolacja, hodowla, charakterystyka i różnicowanie ludzkich komórek progenitorowych mięśni na podstawie procedury biopsji mięśni szkieletowych

Opisany tutaj jest protokół bezpośredniego znakowania immunologicznego martwiczych włókien mięśniowych w kriosekcjach mięśni. Komórki martwicze są przepuszczalne dla białek surowicy, w tym immunoglobuliny G (IgG). Ujawnienie wychwytu IgG przez włókna mięśniowe umożliwia identyfikację i ilościowe określenie włókien mięśniowych, które ulegają martwicy niezależnie od stanu mięśni.

Znakowanie immunologiczne zwyrodnienia włókien mięśniowych w biopsjach mięśni

Skomplikowane choroby ludzkie mogą być trudne do modelowania w tradycyjnych systemach modeli laboratoryjnych. W tym miejscu opisujemy chirurgiczne podejście do modelowania choroby mięśni ludzkich poprzez przeszczepienie biopsji ludzkich mięśni szkieletowych myszom z niedoborem odporności.

Wykonywanie ksenoprzeszczepów mięśni szkieletowych u myszy z niedoborem odporności

Ten raport techniczny opisuje odmianę zmodyfikowanej techniki Bergströma do biopsji mięśnia piszczelowego przedniego, która ogranicza uszkodzenia włókien.

Pobieranie biopsji mięśni szkieletowych z górnego przedziału mięśnia piszczelowego ludzkiego mięśnia piszczelowego przedniego w celu oceny mechanicznej

Zmodyfikowana procedura po utrwaleniu zwiększa kontrast cząsteczek glikogenu w tkance. W tym artykule przedstawiono protokół krok po kroku opisujący, jak obchodzić się z tkanką, przeprowadzać obrazowanie i stosować metody stereologiczne w celu uzyskania bezstronnych i ilościowych danych na temat specyficznej dla typu włókien subkomórkowej dystrybucji glikogenu w mięśniach szkieletowych.

Kwantyfikacja subkomórkowego rozkładu glikogenu we włóknach mięśni szkieletowych za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej

Ten protokół demonstruje izolację pojedynczego włókna z liofilizowanych ludzkich mięśni szkieletowych i klasyfikację typów włókien według izoformy ciężkiego łańcucha miozyny (MHC) przy użyciu techniki kropkowania. Zidentyfikowane próbki włókien MHC I i II mogą być następnie dalej analizowane pod kątem specyficznych dla rodzaju błonnika różnic w ekspresji białek przy użyciu western blotting.

Identyfikacja rodzaju włókien ludzkich mięśni szkieletowych

Poznaj zmodyfikowaną technikę Bergströma do pobierania biopsji mięśnia szkieletowego u ludzi. Metoda umożliwia zbieranie próbek z mięśnia obszernego bocznego do analiz histologicznych i biochemicznych.

Procedury biopsji mięśni szkieletowych człowieka z wykorzystaniem zmodyfikowanej techniki Bergströma

Przeglądaj więcej filmów