Ocena wytrzymałości wysiłkowej myszy bez użycia siatki uderzeniowej: alternatywa dla ćwiczeń wymuszonych

Pokazano metodę oceny wytrzymałości wysiłkowej u myszy laboratoryjnych bez użycia siatki uderzeniowej. Metoda ta jest humanitarnym udoskonaleniem, które może zmniejszyć zakłócający wpływ stresu na parametry eksperymentalne.

Ogólnym celem tej procedury jest określenie wytrzymałości dobrowolnego wysiłku fizycznego. U myszy laboratoryjnych osiąga się to, pozwalając myszy zaaklimatyzować się w sali zabiegowej w klatce domowej na jedną do dwóch godzin. Mysz może wtedy przyzwyczaić się do bieżni i dźwięku silnika.

Następnie prędkość bieżni jest stopniowo zwiększana, aż mysz będzie działać wygodnie z maksymalną stałą prędkością. Ostatnim krokiem jest określenie, kiedy mysz osiągnęła wyczerpanie. Ostatecznie, ilość czasu, w którym mysz biegła do wyczerpania, ujawnia miarę wytrzymałości ćwiczeń bez mylących skutków stresu wynikającego z użycia siatki uderzeniowej.

Główną zaletą tej techniki jest to, że jest ona udoskonaleniem istniejących metod określania wytrzymałości wysiłkowej i myszy, przede wszystkim dlatego, że nie wykorzystuje siatki strzałów, aby zachęcić myszy do biegania, zmniejszając w ten sposób zakłócające skutki stresu, zarówno dla zwierzęcia, jak i dla eksperymentu. Zdecyduj z wyprzedzeniem o grupach eksperymentalnych i procedurach poćwiczeniowych dla myszy. Umieść bieżnię na solidnym wózku lub stole w cichym pomieszczeniu przeznaczonym do tej procedury.

Podczas prób biegowych ustaw bieżnię na tory wielkości myszy i pod kątem odpowiednim do protokołu. Nachylenie dodatnie pięć stopni jest tutaj wykorzystywane, aby zapobiec uszkodzeniom mięśni spowodowanym ekscentrycznymi ćwiczeniami, które występują podczas biegania w dół. Umieść chłonną wkładkę pod dzwonkiem bieżni, aby złapać kał.

Pozwól myszy zaaklimatyzować się w sali zabiegowej w przetransportowanej klatce domowej z kolegami z klatki przez jedną do dwóch godzin. Wybierz pojedynczą mysz i zapisz jej numer tagu. Zważ również mysz i zapisz jej wagę.

Umieść mysz w bieżni bez włączonego silnika, aby zaaklimatyzować się przez około pięć minut. Włącz zasilanie bez uruchomionego pasa bieżni i pozwól myszy przyzwyczaić się do hałasu maszyny przez kolejne pięć minut. W tym momencie usuń myszy w grupach prowadzących siedzący tryb życia z bieżni i umieść je z powrotem w klatce lub przeprowadź procedury po ćwiczeniach zgodnie z projektem eksperymentalnym.

Po aklimatyzacji przekręć pasek na niską prędkość. Gdy zwierzę eksploruje pas, a nie znajduje się na platformie, delikatnie postukaj lub unieś tylną kończynę myszy za pomocą depresora języka od jednego do trzech razy, aby zachęcić niechętne zwierzęta do pozostania na bieżni i biegania. Uruchom minutnik laboratoryjny Gdy mysz zacznie działać z początkową prędkością 10 metrów na minutę, powoli zwiększaj prędkość.

Gdy mysz znajdzie się w górnej części paska z przyrostem jednego metra na minutę mniej więcej co dwie minuty, zmniejsz prędkość do poprzedniego ustawienia. Jeśli mysz wielokrotnie biegnie w krótkich seriach i nie w stałym tempie, większość myszy będzie biegać z łatwością, ale czasami zatrzymują się na krótkie okresy. Użyj depresora języka, aby delikatnie dotknąć lub podnieść tył zwierzęcia, aby zachęcić do wznowienia biegu.

Często samo zauważenie ręki z depresorem języka zbliżającej się do nich powoduje, że myszy biegają jeszcze trochę. Nie zatrzymuj timera w przypadku tymczasowych przerw w działaniu. Określ maksymalną stałą prędkość biegu każdej myszy, dostosowując prędkość i obserwując, jak mysz rejestruje tę prędkość.

Niektóre myszy całkowicie odmówią biegania. Takie myszy będą biegać w krótkich seriach. Następnie zatrzymaj się, aby oczyścić lub pedałować, czyli usiąść na platformie i użyj przednich nóg na pasie.

Klasyczna postawa odmawiającej myszy polega na tym, że wszystkie cztery stopy są poparte pod zwierzęciem, aby nie zostać wepchniętym z powrotem na bieżnię przez depresor języka. Czasami mysz staje się agresywna w stosunku do depresora języka, gdy nie chce biegać, gryzie język, depresor lub wspina się na niego jako sposób ucieczki. W ciągu pierwszych pięciu minut próby staje się jasne, czy mysz będzie działać, czy nie.

Usuń i zidentyfikuj myszy, które odmawiają ucieczki z analizy, ale nie licz ich jako myszy prowadzących siedzący tryb życia. W zależności od projektu eksperymentalnego, myszy, które odmawiają, mogą zostać ponownie przetestowane w innym dniu. Wyczerpanie definiuje się jako trzy następujące po sobie przystanki i odmowę wznowienia biegu pomimo delikatnej zachęty.

Do tego dochodzą fizyczne oznaki wyczerpania, takie jak ciężki oddech i rozchylona postawa. Zidentyfikuj wyczerpane myszy i zatrzymaj stoper. Zapisz całkowity czas spędzony na bieganiu ze wszystkimi prędkościami.

W zależności od projektu eksperymentalnego, albo należy umieścić mysz w klatce, albo przeprowadzić natychmiastowe procedury po wysiłku, takie jak pobranie krwi lub tkanek. Zgodnie z wytycznymi instytucjonalnymi, po przetestowaniu każdej myszy z osobna, wytrzyj pasek chusteczką bakteriobójczą, aby zapach poprzedniej myszy nie wpływał na zachowanie kolejnych testowanych myszy. Użyj nowego depresora języka dla każdej myszy.

Myszy, które przebywają w tej samej klatce, mogą być testowane sekwencyjnie tego samego dnia bez dodatkowej aklimatyzacji do sali zabiegowej. Wytrzymałość wysiłkowa dokładnie odzwierciedla profil molekularny i metaboliczny różnych szczepów C 57: sześć czarnych myszy, które różnią się ekspresją cytokiny pochodzącej z mięśni, myszy transgeniczne IL 15, które wykazują nadekspresję IL 15, wykazują znacznie wydłużony czas biegu do wyczerpania w porównaniu z kontrolami jedzonymi, podczas gdy myszy bez IL 15 wykazują znacznie skrócony czas biegu przed osiągnięciem wyczerpania, kontrole typu dzikiego. Zobacz 57 czarnych myszy z dwóch różnych źródeł, które nie wykazują znacząco różnych czasów działania.

Maksymalna trwała prędkość biegu różniła się tylko u myszy z nokautem IL 15. Nieuniknionym ograniczeniem tej techniki jest to, że niektóre myszy odmawiają dobrowolnego biegania. Odsetek młodych myszy kontrolnych typu dzikiego, które odmawiają biegania, wynosi około 10%W wieku czterech miesięcy odsetek odmów wzrasta do 20% w wieku ośmiu miesięcy i wzrasta do ponad 60% w wieku 16 miesięcy.

Jednak odsetek odmów w starszej grupie wiekowej jest znacznie niższy u myszy transgenicznych IL 15. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać o zachowaniu spokoju i relaksu oraz zwracać uwagę na zachowanie myszy. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak korzystać z bieżni do określania wytrzymałości ćwiczeń i myszy bez użycia czakry e.