Procedura obserwacji wywołanego kontekstem odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa u szczurów

Procedura ta bada zdolność kontekstu związanego z alkoholem do wywoływania odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu przez Pawłowa. Osiąga się to poprzez pierwsze przyzwyczajenie szczurów doświadczonych z etanolem do komór kondycjonujących, które zostały skonfigurowane w dwóch unikalnych kontekstach. Drugim krokiem procedury jest przeprowadzenie sesji treningowych z dyskryminacji Pawłowa w jednym kontekście, w którym dwie różne sygnały słuchowe sygnalizują dostępność alkoholu lub jego brak.

Trzecim krokiem jest przeprowadzenie treningu wymierania. W drugim kontekście, w którym obie sygnały słuchowe są prezentowane bez alkoholu, ostatnim krokiem jest powrót szczurów do pierwotnego kontekstu treningowego i przedstawienie obu sygnałów słuchowych bez alkoholu. Ta manipulacja powoduje odnowienie zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu, wywołanych przez sygnał słuchowy, który wcześniej był kojarzony z alkoholem.

Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi procedurami, takimi jak warunkowanie instrumentalne, jest to, że zapewnia ona zwierzęcy model zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu, wywoływany przez sygnały Pawłowa, które przewidują alkohol. Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie uzależnień, takie jak czy kontekst związany z alkoholem prowokuje nawroty Przed treningiem przyzwyczaj szczury do sali testowej i dwóch kontekstów środowiskowych, których doświadczą. Zawsze transportuj szczury z placówki opieki nad zwierzętami do pomieszczenia testowego w spójny sposób.

W pierwszej sesji pozostaw szczury w pomieszczeniu testowym na 20 minut z zapalonymi światłami w pomieszczeniu i włączonymi wentylatorami w kabinach tłumiących dźwięk po 24 godzinach. Przeprowadź drugą sesję habituacyjną, taką jak pierwszą, ale teraz zważ i zajmij się każdym szczurem. Trzecią sesję przeprowadź 24 godziny później.

W tym celu należy wyposażyć każdą komorę kondycyjną w jedną z dwóch charakterystycznych kombinacji bodźców wizualnych, węchowych i dotykowych. Aby zapewnić spójny kontekst, bodziec węchowy powinien być ostatnim bodźcem kontekstowym dodanym do każdej komory. Aby zminimalizować mieszanie się różnych bodźców węchowych, zamknij drzwi komór i kabinę tłumiącą dźwięk, w której znajduje się każda komora.

Natychmiast po zastosowaniu bodźca węchowego podczas trzeciej sesji zważ każdego szczura i umieść go w komorze kondycjonującej na 20 minut. Połowa szczurów powinna doświadczyć kontekstu pierwszego, a druga połowa powinna doświadczyć kontekstu. Po drugie, aby pomóc w utrzymaniu niezbędnej potrzeby spójności między szczurami a ich komorami, przydatne jest oznaczenie szczurów numerem identyfikującym konkretną komorę.

Minutę po tym, jak wszystkie szczury zostaną umieszczone w swoich komorach, zapal światło w domu w komorach W ciągu 20 minut zapisz wszystkie wejścia do portu płynów dokonane przez szczury. Następnie wyłącz światła, rozładuj szczury i odwróć je do placówki opiekuńczej. Później tego samego dnia przeprowadź czwartą sesję habituacyjną prawie identyczną z trzecią, w której kontekst komór kondycjonujących jest odwrócony.

Na koniec, po każdej sesji, zawsze myj tace na odpady i panele podłogowe komór kondycjonujących oraz szalki Petriego, do których zastosowano węchowy bodziec kontekstowy. Raz w tygodniu używaj tylko bezzapachowych roztworów czyszczących. Wyczyść komory w całości na potrzeby tego treningu.

Podziel szczury na dwie grupy o takim samym średnim spożyciu etanolu w ciągu ostatnich dwóch sesji dostępu do etanolu. Jedna grupa jest szkolona w kontekście, a druga szkolona w kontekście. Dwa. Kontekst używany do treningu dyskryminacji Pawłowa jest określany jako kontekst A. Podczas tych sesji szczury uczą się rozróżniać dwie różne sygnały słuchowe, jedną sparowaną z etanolem, a drugą nie.

Pierwszym krokiem jest więc przygotowanie 20-mililitrowych strzykawek z etanolem. W przypadku portów płynu podłącz rurkę z tyłu portu płynu do załadowanej strzykawki. Za pomocą igły załaduj każdą strzykawkę do osobnej pompy na zewnątrz kabiny tłumiącej dźwięk

Następnie zalej rurkę, ręcznie przesuwając pompę i zetrzyj nadmiar etanolu z portu płynu. Teraz przynieś szczury do pomieszczenia do badań laboratoryjnych. Podobnie jak podczas habituacji, zważ każdego szczura przed umieszczeniem go w przypisanej mu komorze kondycjonalnej.

Upewnij się, że dokładnie sprawdziłeś konfigurację kontekstu w każdej komorze i upewnij się, że załadowałeś właściwego szczura do właściwej komory. Szczur, który został wystawiony na działanie niewłaściwego kontekstu lub niewłaściwego CS plus, może być zmuszony do usunięcia z badania. Gdy wszystkie szczury zostaną zważone i załadowane, uruchom program komputerowy, który kontroluje wydarzenia sesji treningowej.

Po pięciu minutach programu światło w każdej komorze jest podświetlane w każdej sesji, prezentowanych jest 16, 10-sekundowych wybuchów białego szumu i 16-10-sekundowych wybuchów klikania. Dla każdego szczura wyznacz jeden z tych bodźców słuchowych dla etanolu i zrównoważ te oznaczenia w dwóch kontekstach kondycjonowania w ciągu ostatnich sześciu sekund Cs, a ponadto pompa dostarcza 0,2 mililitra etanolu do portu płynu. Ustaw bodźce w zmiennym harmonogramie czasowym 67 sekund, aby wykonać godzinną sesję.

Zapisz wszystkie wpisy portu płynu rozpoczynające się 10 sekund przed Cs, podczas Cs i 10 sekund po cs. Zapisz również łączną liczbę wejść do portu płynów dla całej sesji treningowej Pawłowa z dyskryminacją. Po zakończeniu sesji wyłącz światła w domu i odeślij szczury do placówki opieki nad zwierzętami w komorach kondycjonujących.

Sprawdź porty płynów, aby upewnić się, że szczury spożyły 3,2 mililitra etanolu dostarczonego podczas sesji. Pamiętaj, aby sprawdzić porty płynów po wyjęciu szczurów z komór, aby upewnić się, że spożywają etanol, szczury, które nie spożywają etanolu, a także wykazują niski poziom wejść do portów podczas CS, a także mogą być usunięte z badania. Wyczyść komory kondycjonujące jak zwykle.

Wyczyść rurkę, najpierw przepłukując ją wodą, a następnie używając pustej 60-mililitrowej strzykawki, aby przepuścić przez nią powietrze. Powtarzaj sesje codziennie, aż szczury rozróżnią dwa bodźce słuchowe, na co wskazują reakcje wejścia do portu. Przewiduje się selektywny wzrost liczby wejść do portów CS plus, który ustabilizuje się w ciągu 16 do 20 sesji.

Na sesje wygaszania. Komora kondycjonująca każdego szczura powinna być przygotowana w innym kontekście niż ten, który był używany podczas treningu rozróżniania Pawłowa. Kontekst, w którym przeprowadza się wygaszanie, jest określany jako Kontekst B. Przeprowadzaj sesje wygaszania dokładnie tak, jak sesje dyskryminacji przy użyciu tego samego programu komputerowego, ale nie dostarczaj etanolu podczas CS Plus.

Aby zapewnić spójność, pompy są ładowane pustymi 20-mililitrowymi strzykawkami podłączonymi do komory za pomocą rurki niezawierającej etanolu. Wykonuj sesje wygaszania codziennie, aż szczury przestaną rozróżniać CS plus i minus. Może to zająć około ośmiu sesji, jak zawsze, wyczyść sprzęt w razie potrzeby Przed przystąpieniem do testu odnowienia.

Istotne jest, aby w trakcie CS oraz na końcu szkolenia w zakresie wymierania nastąpiła znaczna redukcja liczby wejść do portów w porównaniu z początkiem. Test odnowy indukowanej kontekstem wykorzystuje tę samą konfigurację kontekstu komory, która była używana podczas treningu dyskryminacji Pawłowa, który jest innym kontekstem niż w przypadku treningu wygaszania. Ten jednosesyjny test jest wykonywany identycznie jak trening dyskryminacji Pawłowa, z tą różnicą, że nie jest dostarczany etanol, a strzykawki są puste.

Użyj tego samego programu komputerowego do prezentacji bodźców słuchowych. Oczekiwanym rezultatem jest odnowienie zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu, które jest selektywne w stosunku do CS oraz wyczyszczenie sprzętu na koniec testu. Tak jak poprzednio, kiedy szczury miały okresowy przerywany dostęp do etanolu w swoich domowych klatkach, spożycie etanolu i preferencje dotyczące etanolu wzrosły do stabilnego poziomu po ośmiu do 12 sesjach treningowych.

Podczas treningu dyskryminacji Pawłowa, reakcje na wejście do portu na CS plus wzrosły w trakcie sesji treningowych, nastąpił niewielki wzrost reakcji na CS minus, ale szczury nauczyły się rozróżniać między dwoma sygnałami słuchowymi podczas treningu wymierania, reakcje wejścia w port na CS plus stopniowo spadały, podczas gdy odpowiedzi na CS minus pozostały niskie. Kiedy szczury zostały przywrócone do kontekstu związanego z treningiem dyskryminacji Pawłowa, selektywny wzrost liczby wejść do portu nastąpił podczas CS plus w stosunku do wyników po treningu wymierania. Natomiast nie nastąpiła żadna zmiana w odpowiedzi na CS minus.

Wyniki te pokazują, że zachowanie związane z poszukiwaniem alkoholu wywołane dyskretną wskazówką może być silnie modulowane przez kontekst środowiskowy. Podczas próby wykonania tej procedury ważne jest, aby badacz nie używał perfum, wód kolońskich ani innych produktów zapachowych. Szczury są stworzeniami o wysokim węchu, a sygnały węchowe związane z badaczem mogą być destrukcyjne dla zachowania w tym zadaniu Zgodnie z tą metodą można wykonać inne procedury, takie jak mikroinfuzje wewnątrzczaszkowe, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania, takie jak to, w jakie regiony mózgu są zaangażowane.

Kontekst indukował odnowienie uwarunkowanego poszukiwania alkoholu przez Pawłowa.