Name: Procedura obserwacji wywołanego kontekstem odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 24 s
Description: Poznaj procedurę obserwacji odnowienia zachowań poszukiwania alkoholu u szczurów w warunkach pawlłowskich. Metoda wykorzystuje trening dyskryminacyjny z sygnałami dźwiękowymi i ekstynkcję w różnych kontekstach środowiskowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (RO1 AA014925 przyznany dr Patricii H. Janak na Uniwersytecie Kalifornijskim, San Francisco, CA, USA), Fonds de recherche du Quebec – Santé (NC) oraz Radę Badań Nauk Przyrodniczych i Inżynierii (NC, 387224-2010). Publikacja tego artykułu w otwartym dostępie była możliwa dzięki sponsoringowi ze strony Med Associates Inc.

Wszystkie procedury są zatwierdzone przez Komitet Etyki Badań nad Zwierzętami na Uniwersytecie Concordia i są zgodne z zaleceniami Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami.
1. Zwierzęta
<ol>
	<li>Pozyskać samce szczurów Long-Evans (220 – 240 g w dniu przybycia).</li>
	<li>Utrzymuj szczury w placówce opieki nad zwierzętami o kontrolowanej temperaturze (21 °C) i wilgotności (44%), w 12-godzinnym cyklu jasno-ciemnym z włączonym światłem o 7:00 rano.</li>
	<li>Szczury domowe w parze po przyjeździe. Po 3 dniach szczury trzymane są pojedynczo w plastikowych klatkach po butach z pościelą z chipami beta, nylonową kością i swobodnym dostępem do standardowej karmy dla szczurów i wody. Używaj pokryw klatek, które mają podwójne przelotki, aby umożliwić późniejsze umieszczenie drugiej butelki oprócz butelki z wodą. UWAGA: Szczury mogą być trzymane indywidualnie, gdy tylko przybędą do placówki opieki nad zwierzętami.</li>
	<li>Zacznij codziennie zajmować się szczurami. UWAGA: Jako wskazówkę, jeden tydzień obchodzenia się z nimi zwykle wystarcza, aby przyzwyczaić się do bycia podniesionym i obsługiwanym przez eksperymentatora.</li>
</ol>
2. Przerywany dostęp etanolu do domowej klatki
UWAGA: Przeprowadź przerywany dostęp etanolu do klatki domowej, aby upewnić się, że szczury będą pić fizjologicznie odpowiednie ilości etanolu przed rozpoczęciem fazy treningu behawioralnego eksperymentu 17-19. Procedurę tę należy rozpocząć w fazie światła, chociaż można ją zainicjować w dowolnym momencie cyklu światła lub ciemności.
<ol>
	<li>Przygotuj dwie butelki dla każdego szczura.
	<ol>
		<li>Użyj plastikowego cylindra z podziałką o pojemności 100 ml jako butelki etanolu i standardowej plastikowej butelki na wodę o pojemności 473 ml. Używaj butelki etanolu o stosunkowo małej pojemności, napełnionej prawie do maksymalnej pojemności, aby zminimalizować straty etanolu z powodu wycieku i parowania.</li>
		<li>Napełnij jedną butelkę 15% etanolem, powstałym przez rozcieńczenie 95% etanolu w wodzie z kranu. UWAGA: Inne stężenia etanolu, takie jak 10% lub 20%, mogą być stosowane zamiast 15% etanolu.</li>
		<li>Napełnij drugą butelkę wodą z kranu.</li>
		<li>Włóż gumowy korek z rurką spijającą, która zawiera łożysko kulkowe w celu zminimalizowania wycieku, do każdej butelki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ustawić dwie klatki kontrolne, traktowane identycznie jak klatki domowe, z wyjątkiem tego, że klatki kontrolne nie zawierają szczurów ani ściółki.
	<ol>
		<li>Przygotować butelki z etanolem i wodą do klatek kontrolnych, jak określono w krokach 2.1.1 – 2.1.4.</li>
		<li>Zastosować środki uzyskane z klatek kontrolnych w celu kontroli rozlania i/lub parowania, które może wystąpić w trakcie sesji dostępu do etanolu (zgodnie z opisem w krokach 2.8.1 – 2.8.2).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zważ wszystkie butelki etanolu i wody. Zapisz wszystkie wagi.</li>
	<li>Zważ wszystkie szczury. Zapisz wszystkie wagi.</li>
	<li>Umieść butelkę etanolu i butelkę z wodą na każdej klatce domowej i klatce kontrolnej w tym samym czasie. Pozostaw obie butelki na klatkach na 24 godziny.</li>
	<li>Pod koniec 24-godzinnego okresu należy wyjąć obie butelki z klatek w tym samym czasie.</li>
	<li>Zważ wszystkie butelki etanolu i wody. Zapisz wszystkie wagi.</li>
	<li>Aby określić, ile etanolu i wody zostało spożyte w ciągu 24 godzin, odejmij wagę każdej butelki po wyjęciu z klatki domowej od wagi butelki po umieszczeniu jej w klatce domowej 24 godziny wcześniej dla każdego szczura.
	<ol>
		<li>Zrób to samo dla dwóch klatek kontrolnych, a następnie oblicz średnią ilość wycieku dla każdego płynu.</li>
		<li>Odejmij średnią ilość rozlanego etanolu i wody odpowiednio od odpowiednich miar spożycia etanolu i wody dla każdego szczura.</li>
		<li>Użyj tych miar różnic kontrolowanych wyciekami, aby obliczyć zużycie etanolu w g/kg, zużycie wody i preferencje dotyczące etanolu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Aby obliczyć zużycie etanolu (g/kg), najpierw przelicz masę (g) zużytego roztworu etanolu na objętość (ml) na podstawie gęstości całego roztworu (etanol + składniki wody), zgodnie ze wzorem Objętość (ml) = Waga (g)/Gęstość (g/ml). UWAGA: Gęstość roztworu będzie się różnić w zależności od stężenia etanolu.
	<ol>
		<li>Następnie pomnóż objętość (ml) zużytego roztworu etanolu przez gęstość (g/ml) etanolu wyskalowaną dla określonego użytego roztworu procentowego, aby uzyskać wagę (g) zużytego etanolu.</li>
		<li>Podziel masę (g) zużytego etanolu przez wagę szczura (kg), aby uzyskać miarę spożycia etanolu w g/kg.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Aby obliczyć preferencje dotyczące etanolu, wyraź spożycie etanolu (ml) jako procent całkowitego spożycia płynów (etanol + woda, ml).</li>
	<li>Zwróć butelkę z wodą tylko z powrotem do domowej klatki szczura. Przez następne 24 godziny zapewnij szczurom dostęp do wody, ale nie do etanolu. Zamiast butelki z etanolem umieść wstępnie zważoną drugą butelkę na domowej klatce.</li>
	<li>Pod koniec 24-godzinnego okresu wyjmij obie butelki z wodą z klatki w tym samym czasie.</li>
	<li>Zważ oba zestawy butelek z wodą. Zapisz wszystkie wagi.</li>
	<li>Odejmij wagę każdej butelki po wyjęciu jej z klatki domowej od wagi butelki, gdy została umieszczona w klatce domowej 24 godziny wcześniej, odejmując średnią miarę rozlania uzyskaną z klatek kontrolnych, jak opisano w krokach 2.8.1 – 2.8.2.</li>
	<li>Użyj tych miar różnicowych kontrolowanych przez wyciek, aby obliczyć zużycie wody.</li>
	<li>Rozpocznij cykl ponownie, dostarczając szczurom zarówno butelki etanolu, jak i wodę, zgodnie z opisem w krokach od 2.1 do 2.14.
	<ol>
		<li>Powtórz ten cykl przez wiele (około 12) sesji, aby wywołać wysoki i stabilny poziom spożycia etanolu. Na rysunku 1 przedstawiono reprezentatywne wyniki zużycia etanolu (g/kg) w klatce domowej.</li>
		<li>Zmieniaj położenie przestrzenne butelki etanolu i wody na pokrywie klatki podczas sesji, aby zapobiec rozwojowi preferencji bocznej.</li>
		<li>Przygotuj świeży roztwór etanolu raz w tygodniu, aby zapewnić dokładne i stabilne stężenie etanolu podczas wszystkich sesji. Stosując to podejście, zminimalizuj wpływ parowania etanolu przez dłuższy czas.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Aparatura
<ol>
	<li>Umieść każdą komorę kondycjonacyjną w wentylowanej, dźwiękochłonnej kabinie.</li>
	<li>Zbuduj każdą komorę kondycjonacyjną z metalowej podłogi ze stali nierdzewnej, przezroczystego sufitu z poliwęglanu, przezroczystej tylnej ściany i drzwi wejściowych z poliwęglanu oraz ścian bocznych z aluminiowymi metalowymi panelami.
	<ol>
		<li>Zamontuj port płynu centralnie w pobliżu podstawy prawej metalowej ściany bocznej. Wyposaż wejście do portu płynów w fotokomórkę na podczerwień do wykrywania wejść do portu.</li>
		<li>Podłącz rurkę polietylenową z tyłu portu płynu do strzykawki o pojemności 20 ml zawierającej etanol za pomocą igły. Umieścić strzykawkę w pompie strzykawkowej umieszczonej na zewnątrz kabiny dźwiękochłonnej. W przypadku sesji treningowych z dyskryminacją Pawłowa, należy załadować etanol do strzykawki przed włożeniem jej do pompy. Zalać rurkę, ręcznie przesuwając pompę, a następnie zetrzyj nadmiar etanolu z portu płynu. </li>
		<li>Na lewej ścianie bocznej zainstaluj białą lampę domową centralnie w pobliżu sufitu komory.</li>
		<li>Zainstaluj kliker (cykl 2 Hz) i generator białego szumu z głośnikiem w lewym górnym rogu lewej ściany bocznej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wyposaż każdą komorę kondycyjną w określoną konfigurację bodźców wizualnych, węchowych i dotykowych, aby stworzyć charakterystyczny kontekst.
	<ol>
		<li>Użyj dwóch różnych kontekstów, oznaczonych jako Kontekst 1 i Kontekst 2. Skonfiguruj połowę komór kondycjonowania jako Kontekst 1, a drugą połowę jako Kontekst 2.</li>
		<li>Aby stworzyć Kontekst 1, umieść czarne tekturowe panele na suficie oraz przedniej i tylnej ścianie komory, spryskaj zapach cytryny (10% v/v, wytwarzany przez rozcieńczenie olejku cytrynowego w wodzie z kranu) na szalkę Petriego i umieść ją na środku metalowej tacy na odpady pod podłogą komory, a następnie włóż przezroczysty panel podłogowy z poliwęglanu na podłogę z metalowego pręta. Wyłóż tacę na odpady chłonnym ręcznikiem papierowym lub wkładką stołową.</li>
		<li>Aby utworzyć Kontekst 2, pozostaw sufit oraz przednią i tylną ścianę komory odkrytą, tak aby były czyste, rozpyl zapach migdałów (10% v/v, powstały przez rozcieńczenie benzaldehydu w wodzie z kranu) na szalkę Petriego i umieść go centralnie w metalowej tacy na odpady pod podłogą komory, a następnie włóż perforowany metalowy panel podłogowy na podłogę z metalowego pręta. Wyłóż tacę na odpady chłonnym ręcznikiem papierowym lub wkładką stołową.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Przyzwyczajenie
Przyzwyczaj szczury do sali treningu behawioralnego i każdego z dwóch kontekstów w komorach warunkowych. W tej fazie eksperymentu nie należy ładować etanolu do strzykawek o pojemności 20 ml.
<ol>
	<li>Przyzwyczaj szczury do procesu transportu z placówki opieki nad zwierzętami do sali treningu behawioralnego w laboratorium w dwóch krótkich sesjach przyzwyczajających.
	<ol>
		<li>Podczas pierwszej sesji załaduj szczury z ich domowych klatek na wózek na kółkach w placówce opieki nad zwierzętami i przewieź je do sali treningu behawioralnego w laboratorium. Zapal światła w pokoju, włącz wentylatory w każdej kabinie tłumiącej dźwięk, wyjdź z pokoju, zamknij drzwi i pozwól szczurom przyzwyczaić się do tego nowego środowiska przez 20 minut, pozostając w swoich domowych klatkach na wózku. Po upływie tych 20 minut należy zwrócić szczury do placówki opieki nad zwierzętami.</li>
		<li>Podczas drugiej sesji przyprowadź szczury do sali treningu behawioralnego w laboratorium. Tak jak poprzednio, pozostaw włączone światła i wentylatory kabiny w pokoju. Pozostań w pomieszczeniu z zamkniętymi drzwiami, aby zminimalizować rozproszenie uwagi, a także dotykaj i waż każdego szczura w pokoju do treningu behawioralnego. Zapisz wagę, a następnie zwróć szczury do placówki opieki nad zwierzętami.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przyzwyczaj szczury do komór kondycjonujących w dwóch krótkich sesjach przyzwyczajania.
	<ol>
		<li>Przetransportuj szczury do sali treningu behawioralnego, zarejestruj wagę każdego szczura i załaduj każdego szczura do wyznaczonej komory kondycyjnej.</li>
		<li>Podczas pierwszej sesji habituacyjnej ustaw połowę komnat jako Kontekst 1, a resztę jako Kontekst 2.</li>
		<li>W drugiej sesji habituacyjnej ustaw każdą komnatę z kontekstem, który nie był używany w poprzedniej sesji.</li>
		<li>Przeprowadzaj sesje habituacyjne w sposób zrównoważony, tak aby połowa szczurów była najpierw wystawiona na Kontekst 1, a następnie Kontekst 2, a druga połowa była najpierw wystawiona na Kontekst 2, a następnie Kontekst 1. Najlepiej przeprowadzić obie sesje habituacyjne tego samego dnia, chociaż w razie potrzeby można je rozłożyć na dwa dni.</li>
		<li>W przypadku sesji habituacyjnych użyj programu komputerowego, aby oświetlić światło w domu 1 minutę po wydaniu programu. Zapisz łączną liczbę wpisów portu płynu wykonanych podczas 20-minutowej sesji. Pod koniec sesji zaprogramuj światło w domu tak, aby się wyłączyło. Nie prezentuj żadnego etanolu ani wskazówek podczas sesji habituacyjnych.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Usuń szczury z komór, zwróć je do ich domowych klatek i przetransportuj z powrotem do placówki opieki nad zwierzętami.</li>
	<li>Wyczyść sprzęt (np. panele podłogowe, tace na odpady, szalki Petriego). Zobacz krok 5.7, aby uzyskać więcej informacji.</li>
</ol>
5. Trening Dyskryminacji Pawłowa (PDT)
Trenuj szczury, aby behawioralnie rozróżniały jedną sygnał słuchowy, który jest sparowany z etanolem, a drugą sygnałem słuchowym, który nie jest. W tej fazie eksperymentu należy napełnić strzykawki o pojemności 20 ml 15% etanolem.
<ol>
	<li>Wyposaż każdą komorę kondycjonującą w określoną konfigurację bodźców wizualnych, węchowych i dotykowych, aby stworzyć charakterystyczny kontekst, zgodnie z opisem w krokach 3.3.2 i 3.3.3
	<ol>
		<li>Przypisz połowę szczurów do Kontekstu 1, a drugą połowę do Kontekstu 2 w sposób zrównoważony, w oparciu o spożycie etanolu i preferencje uśrednione z ostatnich 2 sesji procedury dostępu do etanolu w klatce domowej. Odnieś się do kontekstu używanego podczas PDT jako Kontekst A. UWAGA: Każdy szczur powinien doświadczyć tylko jednego kontekstu w tej fazie treningu.</li>
		<li>Upewnij się, że bodziec węchowy jest ostatnim bodźcem kontekstowym, który ma być dodany do każdej komory kondycjonującej. Zamknij drzwi komory i kabinę tłumiącą dźwięk, aby zatrzymać bodziec węchowy i zminimalizować mieszanie się różnych zapachów.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przyprowadź szczury do sali treningu behawioralnego, zapisz wagę każdego szczura i załaduj każdego szczura do wyznaczonej komory kondycyjnej.</li>
	<li>Zainicjuj program komputerowy, który steruje następującą sekwencją zdarzeń podczas każdej sesji PDT.
	<ol>
		<li>Po 5 minutach od wydania programu zapal światło w domu.</li>
		<li>Przedstaw bodziec białego szumu i bodziec kliker po 16 razy. Wyznacz jeden z tych bodźców słuchowych jako CS+, a drugi jako CS-, w zrównoważony sposób w obu kontekstach.</li>
		<li>Spraw, aby każda próba CS+ i CS- trwała 10 sekund.</li>
		<li>Dostarczyć 0,2 ml etanolu do portu płynu w ciągu ostatnich 6 sekund CS+. Nie dostarczaj etanolu podczas CS-.</li>
		<li>Spraw, aby każda sesja PDT trwała średnio 58 minut. Przedstaw CS+ i CS- każdy według zmiennego harmonogramu czasowego 67 sekund.</li>
		<li>Rejestruj wpisy portów płynów w 10-sekundowym interwale CS (10 sekund podczas prezentacji CS), 10-sekundowym interwale przed CS (10 sekund bezpośrednio przed rozpoczęciem CS) i 10-sekundowym interwałze po CS (10 sekund bezpośrednio po przesunięciu CS) zarówno dla prezentacji CS+, jak i CS-, a także całkowitych wpisów portów płynów dla całej sesji. Należy również odnotować czas trwania każdego wpisu do portu dokonanego w tych odstępach czasu.</li>
		<li>Pod koniec sesji wyłącz światło w domu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Usuń szczury z komór, zwróć je do ich domowych klatek i przetransportuj z powrotem do placówki opieki nad zwierzętami.</li>
	<li>Sprawdź porty płynów, aby upewnić się, że szczury spożyły 3,2 ml etanolu dostarczonego podczas każdej sesji PDT.</li>
	<li>Wypłukać etanol z rurki polietylenowej za pomocą strzykawki o pojemności 60 ml zawierającej niewielką ilość wody. Następnie przepuść 60 ml powietrza przez rurkę za pomocą drugiej, pustej strzykawki, aby upewnić się, że jest sucha.</li>
	<li>Wyczyść sprzęt. Do codziennego sprzątania umyj panele podłogowe, tace na odpady i szalki Petriego. Raz w tygodniu wyczyść całą komorę kondycjonacyjną. Nie używaj pachnących środków czyszczących, aby uniknąć wprowadzania niepożądanych zapachów do aparatury doświadczalnej.</li>
	<li>Kontynuuj sesje PDT codziennie, dopóki szczury nie wykażą stabilnej dyskryminacji w swoich odpowiedziach na wejście do portu na vs. CS CS+. UWAGA: Wpisy portów wprowadzone w odpowiedzi na CS+ powinny rosnąć w trakcie sesji, podczas gdy wpisy portów wprowadzone w odpowiedzi na CS- powinny pozostać niskie. Dokładna liczba sesji PDT niezbędna do osiągnięcia dyskryminowanej odpowiedzi warunkowej może się różnić, ale jako wskazówkę zaplanuj około 20 sesji.</li>
</ol>
6. Wyginięcie
<ol>
	<li>Wyposaż każdą komorę kondycjonacyjną w bodźce wizualne, węchowe i dotykowe, aby stworzyć kontekst odmienny od tego, którego doświadczyły szczury podczas sesji PDT. Na przykład, jeśli Kontekst 1 był używany w PDT, skonfiguruj komorę jako Kontekst 2 dla sesji wygaszania. Odnieś się do kontekstu używanego podczas wygaszania jako Kontekst B.</li>
	<li>Przeprowadzaj sesje wygaszania identycznie jak sesje PDT, ale nie dostarczaj etanolu podczas CS+.
	<ol>
		<li>Użyj tego samego programu komputerowego, który był używany podczas PDT do prezentacji CS+ i CS-.</li>
		<li>Aby zachować spójność między fazami eksperymentu, należy załadować pustą strzykawkę do pompy strzykawkowej i pozostawić pompę włączoną. Upewnij się, że rurki polietylenowe nie zawierają etanolu przed sesjami wygaszania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Kontynuuj codzienne sesje wymierania, aż szczury przestaną wykazywać dyskryminację reagującą między CS+ a CS-. UWAGA: Wpisy portów utworzone w odpowiedzi na CS+ powinny stopniowo zmniejszać się w trakcie sesji wygaśnięcia, aż nie będzie różnicy między wpisami portów utworzonymi w odpowiedzi na CS+ a wpisami portów utworzonymi w odpowiedzi na CS-. Dokładna liczba sesji wygaszania niezbędnych do wygaszenia reakcji warunkowej może się różnić, ale jako wskazówkę zaplanuj około 8 sesji.</li>
	<li>Wyczyść sprzęt na koniec każdej sesji, zgodnie z opisem w kroku 5.7.</li>
</ol>
7. Test odnowy wywołany kontekstem
<ol>
	<li>Wyposaż każdą komorę kondycyjną w bodźce wizualne, węchowe i dotykowe, aby stworzyć kontekst, który był doświadczany podczas sesji PDT. Na przykład, jeśli dany szczur doświadczył Kontekstu 1 w sesjach PDT, skonfiguruj jego komorę jako Kontekst 1 w sesji testowej. Odnieś się do kontekstu używanego podczas testu odnowienia jako kontekstu A.</li>
	<li>Przeprowadź test odnowienia wywołany kontekstem identycznie jak sesje PDT, ale nie dostarczaj etanolu podczas testu odnowienia. Przedstaw 
	CS+ i CS- jak poprzednio podczas sesji PDT, ale wstrzymaj etanol.
	<ol>
		<li>Użyj tego samego programu komputerowego, który był używany podczas PDT do prezentacji CS+ i CS-.</li>
		<li>Aby zachować spójność między fazami, należy załadować pustą strzykawkę do pompy strzykawkowej i pozostawić pompę włączoną. Upewnij się, że rurka polietylenowa nie zawiera etanolu przed sesją testową.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Obserwuj wywołane kontekstem odnowienie zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa. UWAGA: Ten efekt odnowienia będzie widoczny poprzez selektywny wzrost liczby wpisów portów dokonanych w odpowiedzi na CS+, bez zmian w zachowaniu wpisów portów w odpowiedzi na CS-, w stosunku do odpowiedzi CS+ i CS- obserwowanych pod koniec treningu wygaszania.</li>
	<li>Wyczyść sprzęt po zakończeniu sesji, zgodnie z opisem w kroku 5.7.</li>
</ol>

<ol><li>Field, M., Duka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cues+paired+with+a+low+dose+of+alcohol+acquire+conditioned+incentive+properties+in+social+drinkers%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Cues paired with a low dose of alcohol acquire conditioned incentive properties in social drinkers.</a> Psychopharmacology (Berl). 159, 325-334 (2002).</li>
<li>Litt, M. D., Cooney, N. L., Morse, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactivity+to+alcohol-related+stimuli+in+the+laboratory+and+in+the+field%3A+predictors+of+craving+in+treated+alcoholics%29%5BTitle%5D)+AND+%22Addiction%22%5BJournal%5D)">Reactivity to alcohol-related stimuli in the laboratory and in the field: predictors of craving in treated alcoholics).</a> Addiction. 95, 889-900 (2000).</li>
<li>Pomerleau, O. F., Fertig, J., Baker, L., Cooney, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactivity+to+alcohol+cues+in+alcoholics+and+non-alcoholics%3A+implications+for+a+stimulus+control+analysis+of+drinking%5BTitle%5D)+AND+%22Addict+Behav%22%5BJournal%5D)">Reactivity to alcohol cues in alcoholics and non-alcoholics: implications for a stimulus control analysis of drinking.</a> Addict Behav. 8, 1-10 (1983).</li>
<li>Sinha, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+findings+on+biological+factors+predicting+addiction+relapse+vulnerability%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Psychiatry+Rep%22%5BJournal%5D)">New findings on biological factors predicting addiction relapse vulnerability.</a> Curr Psychiatry Rep. 13, 398-405 (2011).</li>
<li>Conklin, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environments+as+cues+to+smoke%3A+implications+for+human+extinction-based+research+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Psychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Environments as cues to smoke: implications for human extinction-based research and treatment.</a> Exp Clin Psychopharmacol. 14, 12-19 (2006).</li>
<li>Conklin, C. A., Robin, N., Perkins, K. A., Salkeld, R. P., McClernon, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximal+versus+distal+cues+to+smoke%3A+the+effects+of+environments+on+smokers%27+cue-reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Psychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Proximal versus distal cues to smoke: the effects of environments on smokers' cue-reactivity.</a> Exp Clin Psychopharmacol. 16, 207-214 (2008).</li>
<li>Janak, P. H., Chaudhri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potent+effect+of+environmental+context+on+relapse+to+alcohol-seeking+after+extinction%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Addict+J%22%5BJournal%5D)">The potent effect of environmental context on relapse to alcohol-seeking after extinction.</a> Open Addict J. 3, 76-87 (2010).</li>
<li>Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Cone, J. J., Janak, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reinstated+ethanol-seeking+in+rats+is+modulated+by+environmental+context+and+requires+the+nucleus+accumbens+core%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Reinstated ethanol-seeking in rats is modulated by environmental context and requires the nucleus accumbens core.</a> Eur J Neurosci. 28, 2288-2298 (2008).</li>
<li>Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Janak, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Context-induced+relapse+of+conditioned+behavioral+responding+to+ethanol+cues+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Context-induced relapse of conditioned behavioral responding to ethanol cues in rats.</a> Biol Psychiatry. 64, 203-210 (2008).</li>
<li>Crombag, H. S., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renewal+of+drug+seeking+by+contextual+cues+after+prolonged+extinction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Renewal of drug seeking by contextual cues after prolonged extinction in rats.</a> Behav Neurosci. 116, 169-173 (2002).</li>
<li>Fuchs, R. A., Eaddy, J. L., Su, Z. I., Bell, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+the+basolateral+amygdala+with+the+dorsal+hippocampus+and+dorsomedial+prefrontal+cortex+regulate+drug+context-induced+reinstatement+of+cocaine-seeking+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Interactions of the basolateral amygdala with the dorsal hippocampus and dorsomedial prefrontal cortex regulate drug context-induced reinstatement of cocaine-seeking in rats.</a> Eur J Neurosci. 26, 487-498 (2007).</li>
<li>Marchant, N. J., Hamlin, A. S., McNally, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+hypothalamus+is+required+for+context-induced+reinstatement+of+extinguished+reward+seeking%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Lateral hypothalamus is required for context-induced reinstatement of extinguished reward seeking.</a> J Neurosci. 29, 1331-1342 (2009).</li>
<li>Zironi, I., Burattini, C., Aicardi, G., Janak, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Context+is+a+trigger+for+relapse+to+alcohol%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Context is a trigger for relapse to alcohol.</a> Behav Brain Res. 167, 150-155 (2006).</li>
<li>Sciascia, J. M., Mendoza, J., Chaudhri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+dopamine+D1-like+receptors+attenuates+context-induced+renewal+of+Pavlovian-conditioned+alcohol-seeking+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Blocking dopamine D1-like receptors attenuates context-induced renewal of Pavlovian-conditioned alcohol-seeking in rats.</a> Alcohol Clin Exp Res. 38, 418-427 (2014).</li>
<li>Chaudhri, N., Woods, C. A., Sahuque, L. L., Gill, T. M., Janak, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+inactivation+of+the+basolateral+amygdala+attenuates+context-induced+renewal+of+Pavlovian-conditioned+alcohol-seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Unilateral inactivation of the basolateral amygdala attenuates context-induced renewal of Pavlovian-conditioned alcohol-seeking.</a> Eur J Neurosci. 38, 2751-2761 (2013).</li>
<li>Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Schairer, W. W., Janak, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separable+roles+of+the+nucleus+accumbens+core+and+shell+in+context-+and+cue-induced+alcohol-seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Separable roles of the nucleus accumbens core and shell in context- and cue-induced alcohol-seeking.</a> Neuropsychopharmacology. 35, 783-791 (2010).</li>
<li>Sparks, L. M., Sciascia, J. M., Ayorech, Z., Chaudhri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vendor+differences+in+alcohol+consumption+and+the+contribution+of+dopamine+receptors+to+Pavlovian-conditioned+alcohol-seeking+in+Long-Evans+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Vendor differences in alcohol consumption and the contribution of dopamine receptors to Pavlovian-conditioned alcohol-seeking in Long-Evans rats.</a> Psychopharmacology (Berl). 231, 753-764 (2014).</li>
<li>Simms, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+access+to+20%25+ethanol+induces+high+ethanol+consumption+in+Long-Evans+and+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin+Exp+Res%22%5BJournal%5D)">Intermittent access to 20% ethanol induces high ethanol consumption in Long-Evans and Wistar rats.</a> Alcohol Clin Exp Res. 32, 1816-1823 (2008).</li>
<li>Wise, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+ethanol+intake+in+rats+following+exposure+to+ethanol+on+various+schedules%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacologia%22%5BJournal%5D)">Voluntary ethanol intake in rats following exposure to ethanol on various schedules.</a> Psychopharmacologia. 29, 203-210 (1973).</li>
<li>Bouton, M. E., Westbrook, R. F., Corcoran, K. A., Maren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contextual+and+temporal+modulation+of+extinction%3A+behavioral+and+biological+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Contextual and temporal modulation of extinction: behavioral and biological mechanisms.</a> Biol Psychiatry. 60, 352-360 (2006).</li>
<li>Pavlov, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPavlov%2C+I+%22Conditioned+reflexes%3A+an+investigation+of+the+physiological+activity+of+the+cerebral+cortex%22">Conditioned reflexes: an investigation of the physiological activity of the cerebral cortex</a>. , Oxford University Press. Oxford, England. (1927).</li>
<li>Gibbon, J., Baldock, M. D., Locurto, C., Gold, L., Terrace, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trial+and+intertrial+durations+in+autoshaping%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Psychol+Anim+Behav+Process%22%5BJournal%5D)">Trial and intertrial durations in autoshaping.</a> J Exp Psychol Anim Behav Process. 3, 264-284 (1977).</li>
<li>Holland, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CS-US+interval+as+a+determinant+of+the+form+of+Pavlovian+appetitive+conditioned+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Psychol+Anim+Behav+Process%22%5BJournal%5D)">CS-US interval as a determinant of the form of Pavlovian appetitive conditioned responses.</a> J Exp Psychol Anim Behav Process. 6, 155-174 (1980).</li>
<li>Stein, L., Sidman, M., Brady, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+effects+of+two+temporal+variables+on+conditioned+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Anal+Behav%22%5BJournal%5D)">Some effects of two temporal variables on conditioned suppression.</a> J Exp Anal Behav. 1, 153-162 (1958).</li>
<li>Coleman, D. A., Hemmes, N. S., Brown, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+durations+of+conditioned+stimulus+and+intertrial+interval+in+conditioned+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Anal+Behav%22%5BJournal%5D)">Relative durations of conditioned stimulus and intertrial interval in conditioned suppression.</a> J Exp Anal Behav. 46, 51-66 (1986).</li>
<li>Schwarz-Stevens, K. S., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pavlovian+conditioning+of+heart+rate+and+body+temperature+with+morphine%3A+effects+of+CS+duration%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pavlovian conditioning of heart rate and body temperature with morphine: effects of CS duration.</a> Behav Neurosci. 107, 1039-1048 (1993).</li>
<li>Palm, S., Roman, E., Nylander, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+voluntary+ethanol+consumption+in+Wistar+rats+from+five+different+suppliers%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Differences in voluntary ethanol consumption in Wistar rats from five different suppliers.</a> Alcohol. 45, 607-614 (2011).</li>
<li>Gauvin, D. V., Moore, K. R., Holloway, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+rat+strain+differences+in+ethanol+consumption+reflect+differences+in+ethanol+sensitivity+or+the+preparedness+to+learn%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Do rat strain differences in ethanol consumption reflect differences in ethanol sensitivity or the preparedness to learn.</a> Alcohol. 10, 37-43 (1993).</li>
<li>Goodwin, F. L., Amit, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+taste+thresholds+for+ethanol%2C+saccharin%2C+and+quinine+solutions+in+three+strains+of+rats+nonselected+for+ethanol%3A+a+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Psychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Relative taste thresholds for ethanol, saccharin, and quinine solutions in three strains of rats nonselected for ethanol: a comparative study.</a> Exp Clin Psychopharmacol. 8, 216-224 (2000).</li>
<li>Goodwin, F. L., Bergeron, N., Amit, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+the+consumption+of+ethanol+and+flavored+solutions+in+three+strains+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Differences in the consumption of ethanol and flavored solutions in three strains of rats.</a> Pharmacol Biochem Behav. 65, 357-362 (2000).</li>
<li>Wilson, A. W., Neill, J. C., Costall, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+differences+in+ethanol+preference+and+reinforced+behaviour%3A+a+comparison+of+two-bottle+choice+and+operant+self-administration+paradigms%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Strain differences in ethanol preference and reinforced behaviour: a comparison of two-bottle choice and operant self-administration paradigms.</a> Behav Pharmacol. 8, 37-46 (1997).</li>
<li>Yap, C. S., Richardson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extinction+in+the+developing+rat%3A+an+examination+of+renewal+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Extinction in the developing rat: an examination of renewal effects.</a> Dev Psychobiol. 49, 565-575 (2007).</li>
<li>Carew, M. B., Rudy, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+functions+of+context+during+conditioning%3A+a+developmental+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Multiple functions of context during conditioning: a developmental analysis.</a> Dev Psychobiol. 24, 191-209 (1991).</li>
<li>Chaudhri, N., Sahuque, L. L., Janak, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+seeking+triggered+by+environmental+context+is+attenuated+by+blocking+dopamine+D1+receptors+in+the+nucleus+accumbens+core+and+shell+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Ethanol seeking triggered by environmental context is attenuated by blocking dopamine D1 receptors in the nucleus accumbens core and shell in rats.</a> Psychopharmacology (Berl). 207, 303-314 (2009).</li>
</ol>

Wszystkie procedury eksperymentalne zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki Badań nad Zwierzętami Uniwersytetu Concordia i są zgodne z wytycznymi Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami. Publikacja tego artykułu w otwartym dostępie była możliwa dzięki sponsoringowi ze strony Med Associates Inc.

Wyniki tej procedury ujawniają, że dyskretne bodźce środowiskowe, które rutynowo towarzyszą dostarczaniu alkoholu, mogą nabyć zdolność do kierowania zachowaniami związanymi z poszukiwaniem alkoholu. Pokazują również, że bodźce kontekstowe związane z wcześniejszą dostępnością lub brakiem alkoholu mogą kierować uwarunkowanymi reakcjami behawioralnymi na dyskretne sygnały predykcyjne dotyczące alkoholu.
Krytyczne kroki w ramach protokołu
Konteksty w obecnym zadaniu obejmują bodźce, które są zewnętrzne w stosunku do szczura. Jednak stan interoceptywny szczura w czasie badania może również stanowić "kontekst", który może wpływać na odnowienie20. Dlatego ważne jest, aby przyzwyczaić szczury do wszelkich procedur, które mogą wystąpić przed testem odnowienia i zmienić ich stan interoceptywny, takich jak mikroinfuzje wewnątrzczaszkowe lub zastrzyki ogólnoustrojowe. Co więcej, przyzwyczajenie do mikroinfuzji lub iniekcji ogólnoustrojowych powinno być przeprowadzone zarówno przed sesją wygaszania, jak i PDT, aby zapobiec powiązaniu takich procedur z jedną konkretną fazą eksperymentu.
Od dawna wiadomo, że parametry czasowe, takie jak czas trwania CS, interwał CS-US i interwał międzypróbny (ITI), wpływają na odpowiedź warunkową w różnych paradygmatach warunkowania21-26. Podobnie parametry czasowe mogą wpływać na obserwację efektu odnowy w naszym zabiegu. Każdy zestaw parametrów innych niż określone w protokole powinien zostać poddany eksperymentalnej walidacji w badaniach pilotażowych przed przystąpieniem do ich zastosowania w większych badaniach.
Modyfikacje i rozwiązywanie problemów
Wcześniejsze badania wykazały, że ilość etanolu spożywanego przez szczury w klatce domowej może się różnić w zależności od dostawcy, odktórego szczury są kupowane. Dostawca jest zatem ważnym czynnikiem branym pod uwagę na tym etapie badania. Podobnie, wybór szczepu szczura powinien być dokładnie przemyślany, ponieważ istnieją liczne doniesienia o różnicach w spożyciu etanolu28-31.
Wcześniejsze prace nad paradygmatem warunkowania awersyjnego wykazały, że wiek rozwojowy szczurów wpływa na obserwację odnowienia reakcji strachu uwarunkowanej przez Pawłowa32. Sugeruje się, że brak efektu odnowy u bardzo młodych szczurów (młodszych niż 20 dzień po urodzeniu) jest spowodowany upośledzonym kodowaniem informacji kontekstowych33. W związku z tym należy wziąć pod uwagę wiek rozwojowy szczurów, który ma być wykorzystany w niniejszej procedurze.
Odnowienie uwarunkowanych zachowań Pawłowa związanych z poszukiwaniem alkoholu zaobserwowano, gdy podczas faz eksperymentu w klatce domowej i PDT użyto roztworów etanolu 10%9,16, 15%14 lub 20%15 . Naukowcy mogą wykorzystać dowolne z tych stężeń etanolu w celu ustalenia tej procedury w swoich laboratoriach.
Podczas nauki treningu dyskryminacji Pawłowa ważne jest, aby po każdej sesji sprawdzać porty płynów, aby upewnić się, że cały dostarczony etanol został zużyty. Pozostawienie szczurów w komorach kondycjonujących na dodatkowe 10 - 15 minut po każdej sesji można wykonać na początku PDT, aby zachęcić do spożycia etanolu, który nie został spożyty podczas sesji. Liczba szczurów pozostawiających nieskonsumowany etanol w portach powinna zmniejszać się wraz z postępem PDT. Jeśli pod koniec PDT szczury albo (a) nie spożywają całego etanolu i/lub (b) nie reagują na CS+, wówczas osoby te powinny zostać usunięte z badania. Większość szczurów niezawodnie reaguje bardziej na CS+ niż na CS-. Jednak niektóre szczury mogą reagować na wysokim poziomie na obie sygnały, nie wykazując w ten sposób dowodów dyskryminacji. Szczury, które wykazują wysoką reakcję zarówno na CS+, jak i CS- podczas PDT, nie są usuwane z badania. Z naszego doświadczenia wynika, że osoby te wykazują niezwykłą dyskryminację podczas pierwszej sesji wygaszania przy braku etanolu, co sugeruje, że ich wysoki poziom reakcji na CS- podczas PDT jest napędzany przez obecność etanolu w porcie płynu. Osoby te wykazują również silne efekty odnowy.
Ograniczenia procedury
Ponieważ test odnowienia jest przeprowadzany przy braku etanolu, kondycjonowane wejścia portów wywołane przez CS+ stopniowo zmniejszają się w trakcie sesji testowej. W związku z tym ogólna ilość zachowań generowanych podczas testu, w stosunku do których można ocenić zmiany wywołane eksperymentalnie, jest dość niska. Ponieważ w tym zadaniu reagowanie jest zwykle wyższe na początku i na końcu sesji testowej, ważne jest, aby zbadać wpływ manipulacji eksperymentalnych na warunkowe reagowanie na zasadzie próba po próbie.
Wejścia do pojemnika na płyn stanowią główną miarę zależną w tym zadaniu. Jednak błędny wpis do portu może zostać zarejestrowany, jeśli zwierzę znajduje się wystarczająco blisko pojemnika na płyn, aby przerwać wiązkę podczerwieni przez otwór portu płynu za pomocą wąsów. Chociaż rzadko, błędne odpowiedzi są oczywiste jako dramatyczny wzrost całkowitej liczby wpisów w portach w stosunku do zachowania podmiotu podczas poprzednich sesji. Filmowanie zwierząt ułatwiłoby wykrycie ewentualnych błędnych reakcji i pozwoliłoby na bardziej wyrafinowaną analizę zachowań wykazywanych przez szczury podczas treningu i testów.
Znaczenie techniki w odniesieniu do istniejących/alternatywnych metod
Wywołane kontekstem odnowienie zachowań związanych z poszukiwaniem narkotyków jest w dużej mierze badane za pomocą instrumentalnego zadania warunkowania, w którym główną zmienną zależną jest reakcja instrumentalna, taka jak naciśnięcie dźwigni8,34 lub szturchanie nosem12. W niniejszej procedurze reakcją na poszukiwanie leku jest "uwarunkowane podejście" do portu płynu, które jest wywoływane przez prezentacje CS+. Ta reakcja jest prawdopodobnie nabyta poprzez uczenie się Pawłowa, które jest procesem uczenia się, który pośredniczy w tworzeniu powiązań między bodźcami środowiskowymi a farmakologicznymi skutkami nadużywania narkotyków u ludzi.
Przyszłe zastosowania
Zadanie to może być wykorzystane w połączeniu z neurofarmakologią, optogenetyką i neurochemią w celu zbadania mechanizmów neuronalnych, które są zaangażowane w kontekstową odnowę zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa16. Ponadto można badać mechanizmy behawioralne i neuronalne, które regulują nabywanie i wygaszanie zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa. Wreszcie, zadanie to może być wykorzystane do zbadania manipulacji wyginięciem, które mogą zapobiec odnowie, co jest ważnym kierunkiem badań translacyjnych mających na celu zmniejszenie wpływu kontekstów środowiskowych związanych z narkotykami na reaktywność na sygnały predykcyjne po terapii ekspozycji na sygnały u ludzi uzależnionych.

Utrzymanie trzeźwości jest poważnym wyzwaniem, przed którym stają osoby cierpiące na zaburzenia związane z nadużywaniem alkoholu. Abstynencja to czas podatności na behawioralny, psychologiczny i fizjologiczny wpływ bodźców środowiskowych, które rutynowo towarzyszą spożywaniu alkoholu, a które mogą, poprzez warunkowanie Pawłowa, stać się związane z upojeniem alkoholowym1,2. Ekspozycja na sygnały predykcyjne dotyczące alkoholu może wywołać uwarunkowane reakcje, takie jak głód alkoholowy, który może promować zachowania związane z poszukiwaniem alkoholu, które ułatwiają nawrót3,4.
Stereotypowe sekwencje zachowań, które prowadzą do spożywania alkoholu, mogą powodować rutynowe doświadczanie pewnych rodzajów bodźców bezpośrednio przed farmakologicznymi efektami spożycia alkoholu. Na przykład wzrok, zapach i smak alkoholu są właściwościami sensorycznymi alkoholu, które niezawodnie poprzedzają odurzenie. Oprócz takich sygnałów, które są określane jako sygnały "dyskretne" lub "proksymalne", konteksty środowiskowe, w których narkotyki są regularnie używane, mogą również wywoływać głód5,6. Narażenie na fizyczne miejsca, w których wcześniej stosowano narkotyki, może być krytycznym czynnikiem wyzwalającym nawrót 7.
Modele zwierzęce zostały opracowane do badania mechanizmów neuronalnych, które pośredniczą w wpływie kontekstów związanych z narkotykami na zachowania związane z poszukiwaniem narkotyków8-13. Opisana w niniejszym dokumencie procedura pozwala na zbadanie, w jaki sposób konteksty związane ze spożywaniem alkoholu mogą modulować zachowania związane z poszukiwaniem alkoholu, które są wywoływane przez dyskretną, predykcyjną wskazówkę Pawłowa.
Trening dyskryminacji Pawłowa jest prowadzony w specyficznym kontekście środowiskowym, gdzie szczury są szkolone do behawioralnego rozróżniania między dwoma bodźcami uwarunkowanymi słuchowo, CS+, który jest sparowany z alkoholem, i CS-, który nie jest. Sesje wygaszania są następnie przeprowadzane w innym kontekście, gdzie reakcja na CS+ zmniejsza się w wyniku wstrzymania alkoholu. Następnie, ponowna ekspozycja na alkohol związany z kontekstem treningowym Pawłowa wyzwala selektywny wzrost zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu wywołanych przez CS+, bez zmian w odpowiedzi na CS-. Ten wynik, który konsekwentnie powielaliśmy9,14-16, rozszerza wyniki procedur warunkowania instrumentalnego, w których stwierdzono, że konteksty leków stymulują odnowę odpowiedzi instrumentalnych związanych z dostarczaniem leków10,13.

<table><tbody><tr><td>Wytrzymały wózek użytkowy</td><td>Rubbermaid</td><td>#4520-88</td><td>Służy do transportu szczurów w ich domowej klatce z pokoju kolonii do pokoju behawioralnego lub innych obiektów</td></tr><tr><td>Szczury, Long-Evans</td><td>Harlan</td><td></td><td>Szczury ważyły 220-240 g w momencie przybycia</td></tr><tr><td>Waga Ohausa</td><td>Fisher</td><td>#S402421</td><td>Do ważenia szczurów; najpierw staruj dno plastikowego pojemnika, a następnie włóż do niego szczura, aby go zważyć</td></tr><tr><td>Beta-chipsy, osika</td><td>Harlan</td><td>#7090A</td><td>Ściółka do klatki domowej</td></tr><tr><td>Nylabone</td><td>Bio-Serv</td><td>#K3580</td><td>Wzbogacenie zapewnione w klatce domowej</td></tr><tr><td>Autoklawowalna karma dla gryzoni</td><td>Agribrands, Charles River</td><td>#5075</td><td>Do karmienia szczurów</td></tr><tr><td>Pokrywa klatki z pręta drucianego</td><td>Ancare</td><td>#R20SS2B</td><td>Wykonane na zamówienie z dwoma otworami na&nbsp; butelki</td></tr><tr><td>Dno klatki</td><td>Ancare</td><td>#R20PC</td><td>Do domu szczurów</td></tr><tr><td>Korki</td><td>Ancare</td><td>#8.5</td><td>Gumowe korki do blokowania otwierania butelek z wodą i cylindrów z podziałką; pasuje do rurek z kulką&nbsp;</td></tr><tr><td>Rurki kulkowe o długości 1,5"</td><td>Ancare</td><td>#TD-99</td><td>Wkładane w korki, umożliwiają szczurom picie z butelek z wodą i cylindrów z podziałką Butelki</td></tr><tr><td>na wodę</td><td>Ancare</td><td>#FSPC8HT</td><td>pojemności 473 ml (16 uncji), należy je zatkać korkiem</td></tr><tr><td>Cylindry z podziałką, 100 ml</td><td>Fisher</td><td>#0300741</td><td>Zawierać etanol podczas ekspozycji na alkohol w klatce domowej; Koniec wylewki należy odciąć, aby umożliwić okluzję za pomocą korków</td></tr><tr><td>Waga Mettler</td><td>Mettler Toledo</td><td>#MS6001S</td><td>Do ważenia butelek na wodę i butli z etanolem Rurka</td></tr><tr><td>polietylenowa, średnica wewnętrzna 1/32", grubość ścianki 1/32", średnica zewnętrzna 3/32"</td><td>Fisher</td><td>#14-169-1A</td><td>Do podłączenia strzykawki etanolowej o pojemności 20 ml do portu płynu</td></tr><tr><td>Igła, 18 g, długość 1,5"</td><td>Fisher</td><td>#B305199</td><td>Do podłączenia rurki polietylenowej do strzykawek z etanolem; należy złożyć</td></tr><tr><td>Strzykawki, 20 ml, niesterylne Luer-Lok</td><td>Fisher</td><td>#1482316J</td><td>Do zawierania etanolu na pompach płynów; musi być podłączony do rurki polietylenowej za pomocą strzykawki 18 G 1 1/2 igły</td></tr><tr><td>, 60 ml, Luer-Lok niesterylny</td><td>Fisher</td><td>#14-820-11</td><td>Do płukania rurek polietylenowych po sesjach PDT</td></tr><tr><td>Jednobiegowa pompa strzykawkowa, 3,33 obr./min</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-018MD</td><td>Do przechowywania strzykawek z etanolem o pojemności 20 ml i dostarczania</td></tr><tr><td>płynu</td> etanolowego <td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-254-CB</td><td>Aby umożliwić dostarczanie etanolu podczas sesji PDT; podłączony do strzykawek etanolowych z rurką polietylenową</td></tr><tr><td>Detektor podczerwieni z wejściem do portu</td>, <td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-215M</td><td>Zamocowany po obu stronach&nbsp; portu płynu; potrzeba 2 na port płynu</td></tr><tr><td>Oświetlenie domowe, 28 V, 100 mA</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-135M</td><td>Zapewnia oświetlenie ogólne w komorze kondycjonującej</td></tr><tr><td>Moduł Clicker</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-225SM</td><td>Bodziec słuchowy do komory kondycjonującej</td></tr><tr><td>Generator białego szumu z głośnikiem</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#PHM-100</td><td>Bodźce słuchowe do komory kondycjonującej</td></tr><tr><td>Podłoga barowa</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A-GF</td><td>Do wysyłki z modułową komorą testową</td></tr><tr><td>Płaszcz stołowy, chłonny</td><td>VWR</td><td>#89126-790</td><td>Chłonny papier do umieszczenia w metalowej tacy, należy go przyciąć, aby pasował do metalowej tacy</td></tr><tr><td>Arkusz poliwęglanowy o grubości 1/8 ", 12-5/8" x 10"</td> <td>Johnston Plastics</td><td>#30102515</td><td>Aby uzyskać gładką przezroczystą wkładkę podłogową używaną do kontekstu 1. Musi być cięty na kawałki 11,5" x 12,25"</td></tr><tr><td>Blacha aluminiowa perforowana, grubość 0,063", 48" x 96", otwory 0,250" x środki 0,375"</td><td>Anica Steel</td><td></td><td>Aby wykonać perforowaną wkładkę podłogową używaną do kontekstu 2. Musi być cięty na kawałki 11,5" x 12,25"</td></tr><tr><td>karton o grubości 0,053", 28" x 44"</td> <td>Omer DeSerres</td><td>#P1909</td><td>Do konstruowania paneli pokrywających sufit, drzwi i tylną ścianę komory kondycjonacyjnej w kontekście 1. Musi być przycięty na wymiar. Każda komora potrzebuje trzech paneli o wymiarach około 11,5" x 13,25". Panele można łączyć węższą stroną za pomocą taśmy klejącej.</td></tr><tr><td>Uniwersalna taśma klejąca o dużej wytrzymałości, 1,88" x 45 jardów.</td><td>Taśma</td><td></td> klejąca <td>Materiał samoprzylepny do łączenia czarnych paneli kartonowych używanych do pokrycia tylnej ściany, sufitu i drzwi w kontekście 1.</td></tr><tr><td>Modułowa komora testowa</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A</td><td>Komora kondycjonująca</td></tr><tr><td>Kabiny wyciszające</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-200R3AM</td><td>W zestawie z zainstalowanym wentylatorem 28 V DC (#ENV-025F)</td></tr> <tr><td>szalka Petriego</td><td>Fisher</td><td>#08748B</td><td>Tylko dno, aby pomieścić rozpylony roztwór, który zapewnia bodziec zapachowy; musi być wyśrodkowany w metalowej tacy w komorach kondycjonowania</td></tr><tr><td>Pakiet interfejsu PCI</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#DIG-700P2-R2</td><td>Łączy stołową szafę interfejsu z komputerem; zawiera 1 kartę interfejsu, 1 kartę dekodowania, 1 taśmowy i 1 zasilający 28 V DC</td></tr><tr><td>Duża szafka stołowa i zasilacz</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SG-6510D</td><td>Służy do przechowywania 12 kart zawartych w pakiecie SmartCrtrl 8 wejść, 16 wyjść</td></tr><tr><td>SmartCtrl 8 wejść, 16 wyjść Med</td><td>Associates Inc.</td><td>#DIG-716P2</td><td>Służy do podłączania i sterowania urządzeniami w komorze kondycjonowania. W opakowaniu znajdują się wszystkie, moduł interfejsu i panel połączeniowy.</td></tr><tr><td>Oprogramowanie Med PC IV</td><td>firmy Med Associates Inc.</td><td>#SOF-735</td><td>Oprogramowanie do uruchamiania programów. Musi być zainstalowany na komputerze.</td></tr><tr><td>Monitor LG, 19" LCD</td><td>Sklep komputerowy Concordia</td><td>#W1942TQ-BF</td><td>Monitor komputerowy; do współpracy z komputerem z systemem Med PC IV</td></tr><tr><td>HP Z200 tower</td><td>stacja robocza Sklep komputerowy Concordia</td><td>#BZ788US#ABA</td><td>Komputer, na którym działa Med PC IV</td></tr><tr><td>Benzaldehyd, &ge; 99%</td><td>Les produits chimiques OMEGA Chemical Company Inc.</td><td>#B37-50</td><td>Rozcieńczyć w wodzie z kranu, aby uzyskać zapach migdałowy</td></tr><tr><td>Olejek cytrynowy, tłoczony na zimno, California</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#W262528-1KG-K</td><td>Rozcieńczyć w wodzie z kranu dla zapachu kontekstu cytryny</td></tr><tr><td>Alkohol etylowy, 95%</td> <td>Alkohole</td><td></td> handlowe <td>Rozcieńczyć w wodzie z kranu do pożądanego stężenia</td></tr></tbody></table>

procedura obserwacji wywołanego kontekstem odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez pawłowa u szczurów

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Konteksty środowiskowe, w których narkotyki są spożywane, mogą wywoływać głód, subiektywną reakcję uwarunkowaną przez Pawłowa, która może ułatwić zachowania związane z poszukiwaniem narkotyków i spowodować powrót do nałogu u abstynentów zażywających narkotyki. Opracowaliśmy procedurę badania procesów behawioralnych i neuronalnych, które pośredniczą w wpływie kontekstu na zachowania związane z poszukiwaniem alkoholu u szczurów. Po przyzwyczajeniu się do smaku i efektów farmakologicznych 15% etanolu w klatce domowej, samce szczurów Long-Evans przechodzą trening dyskryminacji Pawłowa (PDT) w komorach kondycjonujących. W każdej codziennej (od poniedziałku do piątku) sesji PDT występuje 16 prób, z których każda składa się z dwóch różnych 10-sekundowych bodźców słuchowych. Podczas jednego bodźca CS+, 0,2 ml 15% etanolu jest dostarczane do portu płynu do spożycia doustnego. Drugi bodziec, CS-, nie jest sparowany z etanolem. We wszystkich sesjach wejścia do portu płynu podczas CS+ wzrastają, podczas gdy wpisy podczas CS- stabilizują się na niższym poziomie, co wskazuje, że uzyskano predykcyjny związek między CS+ a etanolem. Podczas PDT każda komora wyposażona jest w określoną konfigurację wizualnych, węchowych i dotykowych bodźców kontekstowych. Po PDT trening ekstynkcji jest prowadzony w tej samej komorze, która jest teraz wyposażona w inną konfigurację bodźców kontekstowych. CS+ i CS- są prezentowane jak poprzednio, ale etanol jest wstrzymywany, co powoduje stopniowy spadek liczby wejść do portów podczas CS+. Podczas testu szczury są umieszczane z powrotem w kontekście PDT i prezentowane z CS+ i CS-, jak poprzednio, ale bez etanolu. Ta manipulacja powoduje silny i selektywny wzrost liczby wpisów do portu dokonywanych podczas przewidywania alkoholu CS+, bez zmian w odpowiedziach podczas CS-. Efekt ten, określany jako odnowa wywołana kontekstem, ilustruje potężną zdolność kontekstów związanych z konsumpcją alkoholu do stymulowania zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu w odpowiedzi na sygnały alkoholowe Pawłowa.

Przerywany dostęp do etanolu w klatce domowej: Spożycie etanolu (g/kg) oraz preferencja etanolu wzrastają w trakcie sesji przerywanego dostępu do etanolu w klatce domowej, zazwyczaj osiągając stabilne poziomy w ciągu 8 – 12 sesji (Rysunek 1). W zestawie danych przedstawionym na Rysunku 1 stabilne spożycie etanolu, obliczone jako średnia z dwóch ostatnich sesji dostępu do etanolu w klatce domowej, wynosiło od 1,33 do 6,44 g/kg dla poszczególnych szczurów. Fazę spożycia etanolu w klatce domowej można zakończyć, gdy spożycie w g/kg osiągnie plateau, a szczury utrzymają ten stabilny poziom picia przez kilka sesji.
Aby przeanalizować dane z tej fazy, należy przeprowadzić oddzielną analizę wariancji z powtarzanymi pomiarami (ANOVA) dla czynnika wewnątrzobiektowego, jakim jest sesja, w odniesieniu do spożycia etanolu (g/kg) oraz preferencji do etanolu.
Schemat procedury odnowienia indukowanego kontekstem: Każda faza procedury eksperymentalnej (PDT, wygaszanie, test odnowienia) została zilustrowana na Rysunku 2. Szczegóły znajdują się w podpisie do rysunku.
Miary odpowiedzi i analiza danych: we wszystkich opisanych poniżej fazach behawioralnych odpowiedzi w postaci wejść do portu zarejestrowane podczas CS+ i CS- są normalizowane w odniesieniu do bazowej liczby wejść do portu przed CS. Aby utworzyć znormalizowane miary CS, należy od liczby wejść do portu wykonanych podczas prezentacji CS+ i CS- odjąć liczbę wejść do portu zarejestrowaną w interwale bazowym przed CS (10 s bezpośrednio poprzedzających wystąpienie CS). Znormalizowane miary CS+ i znormalizowane miary CS- służą jako wskaźniki zachowań wywołanych konkretnie przez prezentacje CS, przekraczających poziomy bazowe.
Przeprowadź oddzielne analizy wariancji z powtarzanymi pomiarami (ANOVA), przyjmując jako wewnątrzpodmiotowe czynniki powtarzane sesję oraz typ CS (CS+ vs. CS-) dla fazy PDT i fazy wygaszania. W celu porównania wyników między fazami (PDT, wygaszanie, test odnowienia), wykorzystaj w ANOVA z powtarzanymi pomiarami dane uśrednione z dwóch ostatnich sesji PDT i wygaszania oraz dane z jednej sesji testu odnowienia. Aby przeanalizować istotne efekty główne i interakcje, zastosuj testy t post hoc dla prób niezależnych lub sparowanych, skorygowane pod kątem wielokrotnych porównań. Kryterium istotności ustalono na poziomie α = 0.05.
PDT: Reakcje wejścia do portu na CS+ zwiększają się w kolejnych sesjach PDT, podczas gdy reakcje wejścia do portu na CS- pozostają ogólnie niskie i stabilne. Należy zauważyć, że reakcje wejścia do portu na CS- mogą nieznacznie wzrosnąć w początkowych sesjach treningu PDT; jednakże liczba wejść do portu w odpowiedzi na CS- stabilizuje się na znacznie niższym poziomie niż w przypadku CS+. Dowodem na skuteczne rozróżnienie jest statystycznie istotny wzrost liczby wejść do portu podczas CS+ w porównaniu do CS- (Rysunek 3). Wynik ten wskazuje, że w odpowiedzi na CS+, a nie na CS-, ukształtowało się pawłowowskie warunkowe zachowanie poszukiwania alkoholu.
Wygaszanie: Reakcje wejścia do portu na CS+ stopniowo spadają w trakcie sesji wygaszania. Reakcje wejścia do portu na CS- pozostają niskie i stabilne podczas sesji wygaszania. W idealnym przypadku reakcje różnicujące zostają zniesione do końca treningu wygaszania, co przejawia się brakiem statystycznie istotnej różnicy między liczbą wejść do portu na CS+ a CS-. Niemniej jednak nie jest rzadkością, że pewien stopień reakcji różnicujących utrzymuje się nawet pod koniec treningu wygaszania. W takim przypadku istotne jest zweryfikowanie, czy reakcje wejścia do portu na CS+ pod koniec treningu wygaszania są statystycznie niższe niż reakcje wejścia do portu na CS+ na początku wygaszania, a także pod koniec PDT (Rycina 3). Taki wzorzec wyników wskazuje, że pawłowowskie uwarunkowane zachowanie poszukiwania alkoholu zostało znacząco wygaszone.
Test odnowienia indukowanego kontekstem: Liczba wejść do portu w odpowiedzi na CS+ wzrasta w teście odnowienia indukowanego kontekstem w porównaniu do liczby wejść do portu na CS+ obserwowanych pod koniec treningu wygaszania. Wzrost ten jest selektywny dla CS+, ponieważ liczba wejść do portu na CS- pozostaje niezmieniona. Ponadto liczba wejść do portu na CS+ jest statystycznie wyższa w porównaniu do liczby wejść do portu na CS- w teście odnowienia indukowanego kontekstem (Rycina 4). Statystyczne potwierdzenie porównań liczby wejść do portu na CS+ pomiędzy fazą wygaszania a testem, a także porównań liczby wejść do portu na CS+ i CS- w obrębie testu, wskazuje na selektywne odnowienie pawłowowskiego uwarunkowanego zachowania poszukiwania alkoholu, indukowane podczas testu kontekstem związanym z alkoholem.
<img alt="Dane dotyczące spożycia i preferencji etanolu w ciągu 12 sesji; wykres analizy statystycznej." fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig1highres.jpg" width="400" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Wzrost spożycia i preferencji etanolu wywołany przerywanym dostępem do etanolu w klatce domowej. Średnia ± SEM (A) spożycia etanolu (g/kg) oraz (B) preferencji etanolu w ciągu 12 sesji przerywanego dostępu do etanolu w klatce domowej. Oba parametry zazwyczaj wzrastają w kolejnych sesjach, a następnie stabilizują się. Stabilne spożycie etanolu, uśrednione z dwóch ostatnich sesji dostępu do etanolu w klatce domowej, wynosiło od 1,33 do 6,44 g/kg dla poszczególnych szczurów. Dane te uzyskano przy użyciu samców szczurów linii Long-Evans pijących 15% (v/v) etanol.
<img alt="Schemat treningu dyskryminacji Pawłowowskiej, mysz w eksperymencie z kontekstem alkoholowym zależnym od sygnału." fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" width="400" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2. Schemat procedury eksperymentalnej. Procedura składa się z trzech faz: treningu dyskryminacji Pawłowowskiej (PDT), wygaszania oraz testu odnowienia indukowanego kontekstem. Podczas każdej sesji PDT szczury przechodzą 16 prób z jednym słuchowym bodźcem warunkowym (CS+), który sygnalizuje podanie etanolu, oraz 16 prób z drugim bodźcem słuchowym (CS-), który nie jest powiązany z podaniem etanolu. Sesje PDT odbywają się w Kontekście A, składającym się ze specyficznej konfiguracji bodźców wizualnych, węchowych i dotykowych. Podczas sesji wygaszania, przeprowadzanych w Kontekście B, składającym się z innego zestawu bodźców wizualnych, węchowych i dotykowych, prezentowane są bodźce CS+ i CS-, ale etanol nie jest podawany. W teście odnowienia indukowanego kontekstem szczury są przenoszone z powrotem do Kontekstu A, a bodźce CS+ i CS- są prezentowane bez podawania etanolu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Wykres eksperymentu z treningiem dyskryminacji; znormalizowane wejścia do portu, porównanie kontekstu CS." fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig3highres.jpg" width="400" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3. Nabywanie i wygaszanie dyskryminacyjnych reakcji warunkowanych Pawłowa dla etanolu. Średnia ± SEM znormalizowanych wejść do portu wykonanych podczas CS+ i CS- w trakcie PDT (sesje 1–18) w kontekście A oraz wygaszania (sesje 19–26) w kontekście B. Dane te uzyskano u samców szczurów Long-Evans, trenowanych z użyciem 10% (v/v) etanolu jako bodźca bezwarunkowego (US), który był prezentowany w skojarzeniu z CS+ podczas PDT. *p &lt;0.05, CS+ w porównaniu do CS-. Rysunek pierwotnie opublikowany w Chaudhri, Sahuque, &amp; Janak (2008). Użyte za zgodą wydawnictwa Elsevier.
<img alt="Wykres słupkowy przedstawiający znormalizowaną liczbę wejść do portu w kontekstach A i B podczas treningu i testów." fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig4highres.jpg" width="500" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4. Indukowane kontekstem odnowienie reakcji warunkowania pawłowowskiego na etanol. Średnia ± SEM znormalizowanej liczby wejść do portu wykonanych podczas CS+ i CS- w sesjach PDT w kontekście A, sesjach wygaszania w kontekście B oraz teście odnowienia w kontekście A. Dane stanowią średnią z dwóch ostatnich sesji dla PDT i wygaszania; test odnowienia obejmuje jedną sesję. Dane uzyskano z wykorzystaniem samców szczurów Long-Evans, szkolonych z użyciem 10% (v/v) etanolu jako bodźca bezwarunkowego (US), który był prezentowany w powiązaniu z CS+ podczas PDT. *p &lt;0.05; **p &lt;0.001, CS+ względem CS-. #p &lt;0.05, CS+ PDT względem CS+ wygaszanie. ^p &lt;0.05, CS+ wygaszanie względem CS+ test. Rycina pierwotnie opublikowana w Chaudhri, Sahuque, &amp; Janak (2008). Użyte za zgodą wydawnictwa Elsevier.

Opisano procedurę badania zdolności kontekstu środowiskowego związanego z alkoholem do wywoływania u szczurów wznowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu.

Procedura obserwacji wywołanego kontekstem odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa u szczurów

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Procedura ta bada zdolność kontekstu związanego z alkoholem do wywoływania odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu przez Pawłowa. Osiąga się to poprzez pierwsze przyzwyczajenie szczurów doświadczonych z etanolem do komór kondycjonujących, które zostały skonfigurowane w dwóch unikalnych kontekstach. Drugim krokiem procedury jest przeprowadzenie sesji treningowych z dyskryminacji Pawłowa w jednym kontekście, w którym dwie różne sygnały słuchowe sygnalizują dostępność alkoholu lub jego brak.Trzecim krokiem jest przeprowadzenie treningu wymierania. W drugim kontekście, w którym obie sygnały słuchowe są prezentowane bez alkoholu, ostatnim krokiem jest powrót szczurów do pierwotnego kontekstu treningowego i przedstawienie obu sygnałów słuchowych bez alkoholu. Ta manipulacja powoduje odnowienie zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu, wywołanych przez sygnał słuchowy, który wcześniej był kojarzony z alkoholem.Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi procedurami, takimi jak warunkowanie instrumentalne, jest to, że zapewnia ona zwierzęcy model zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu, wywoływany przez sygnały Pawłowa, które przewidują alkohol. Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie uzależnień, takie jak czy kontekst związany z alkoholem prowokuje nawroty Przed treningiem przyzwyczaj szczury do sali testowej i dwóch kontekstów środowiskowych, których doświadczą. Zawsze transportuj szczury z placówki opieki nad zwierzętami do pomieszczenia testowego w spójny sposób.W pierwszej sesji pozostaw szczury w pomieszczeniu testowym na 20 minut z zapalonymi światłami w pomieszczeniu i włączonymi wentylatorami w kabinach tłumiących dźwięk po 24 godzinach. Przeprowadź drugą sesję habituacyjną, taką jak pierwszą, ale teraz zważ i zajmij się każdym szczurem. Trzecią sesję przeprowadź 24 godziny później.W tym celu należy wyposażyć każdą komorę kondycyjną w jedną z dwóch charakterystycznych kombinacji bodźców wizualnych, węchowych i dotykowych. Aby zapewnić spójny kontekst, bodziec węchowy powinien być ostatnim bodźcem kontekstowym dodanym do każdej komory. Aby zminimalizować mieszanie się różnych bodźców węchowych, zamknij drzwi komór i kabinę tłumiącą dźwięk, w której znajduje się każda komora.Natychmiast po zastosowaniu bodźca węchowego podczas trzeciej sesji zważ każdego szczura i umieść go w komorze kondycjonującej na 20 minut. Połowa szczurów powinna doświadczyć kontekstu pierwszego, a druga połowa powinna doświadczyć kontekstu. Po drugie, aby pomóc w utrzymaniu niezbędnej potrzeby spójności między szczurami a ich komorami, przydatne jest oznaczenie szczurów numerem identyfikującym konkretną komorę.Minutę po tym, jak wszystkie szczury zostaną umieszczone w swoich komorach, zapal światło w domu w komorach W ciągu 20 minut zapisz wszystkie wejścia do portu płynów dokonane przez szczury. Następnie wyłącz światła, rozładuj szczury i odwróć je do placówki opiekuńczej. Później tego samego dnia przeprowadź czwartą sesję habituacyjną prawie identyczną z trzecią, w której kontekst komór kondycjonujących jest odwrócony.Na koniec, po każdej sesji, zawsze myj tace na odpady i panele podłogowe komór kondycjonujących oraz szalki Petriego, do których zastosowano węchowy bodziec kontekstowy. Raz w tygodniu używaj tylko bezzapachowych roztworów czyszczących. Wyczyść komory w całości na potrzeby tego treningu.Podziel szczury na dwie grupy o takim samym średnim spożyciu etanolu w ciągu ostatnich dwóch sesji dostępu do etanolu. Jedna grupa jest szkolona w kontekście, a druga szkolona w kontekście. Dwa. Kontekst używany do treningu dyskryminacji Pawłowa jest określany jako kontekst A. Podczas tych sesji szczury uczą się rozróżniać dwie różne sygnały słuchowe, jedną sparowaną z etanolem, a drugą nie.Pierwszym krokiem jest więc przygotowanie 20-mililitrowych strzykawek z etanolem. W przypadku portów płynu podłącz rurkę z tyłu portu płynu do załadowanej strzykawki. Za pomocą igły załaduj każdą strzykawkę do osobnej pompy na zewnątrz kabiny tłumiącej dźwięk.Następnie zalej rurkę, ręcznie przesuwając pompę i zetrzyj nadmiar etanolu z portu płynu. Teraz przynieś szczury do pomieszczenia do badań laboratoryjnych. Podobnie jak podczas habituacji, zważ każdego szczura przed umieszczeniem go w przypisanej mu komorze kondycjonalnej.Upewnij się, że dokładnie sprawdziłeś konfigurację kontekstu w każdej komorze i upewnij się, że załadowałeś właściwego szczura do właściwej komory. Szczur, który został wystawiony na działanie niewłaściwego kontekstu lub niewłaściwego CS plus, może być zmuszony do usunięcia z badania. Gdy wszystkie szczury zostaną zważone i załadowane, uruchom program komputerowy, który kontroluje wydarzenia sesji treningowej.Po pięciu minutach programu światło w każdej komorze jest podświetlane w każdej sesji, prezentowanych jest 16, 10-sekundowych wybuchów białego szumu i 16-10-sekundowych wybuchów klikania. Dla każdego szczura wyznacz jeden z tych bodźców słuchowych dla etanolu i zrównoważ te oznaczenia w dwóch kontekstach kondycjonowania w ciągu ostatnich sześciu sekund Cs, a ponadto pompa dostarcza 0,2 mililitra etanolu do portu płynu. Ustaw bodźce w zmiennym harmonogramie czasowym 67 sekund, aby wykonać godzinną sesję.Zapisz wszystkie wpisy portu płynu rozpoczynające się 10 sekund przed Cs, podczas Cs i 10 sekund po cs. Zapisz również łączną liczbę wejść do portu płynów dla całej sesji treningowej Pawłowa z dyskryminacją. Po zakończeniu sesji wyłącz światła w domu i odeślij szczury do placówki opieki nad zwierzętami w komorach kondycjonujących.Sprawdź porty płynów, aby upewnić się, że szczury spożyły 3,2 mililitra etanolu dostarczonego podczas sesji. Pamiętaj, aby sprawdzić porty płynów po wyjęciu szczurów z komór, aby upewnić się, że spożywają etanol, szczury, które nie spożywają etanolu, a także wykazują niski poziom wejść do portów podczas CS, a także mogą być usunięte z badania. Wyczyść komory kondycjonujące jak zwykle.Wyczyść rurkę, najpierw przepłukując ją wodą, a następnie używając pustej 60-mililitrowej strzykawki, aby przepuścić przez nią powietrze. Powtarzaj sesje codziennie, aż szczury rozróżnią dwa bodźce słuchowe, na co wskazują reakcje wejścia do portu. Przewiduje się selektywny wzrost liczby wejść do portów CS plus, który ustabilizuje się w ciągu 16 do 20 sesji.Na sesje wygaszania. Komora kondycjonująca każdego szczura powinna być przygotowana w innym kontekście niż ten, który był używany podczas treningu rozróżniania Pawłowa. Kontekst, w którym przeprowadza się wygaszanie, jest określany jako Kontekst B. Przeprowadzaj sesje wygaszania dokładnie tak, jak sesje dyskryminacji przy użyciu tego samego programu komputerowego, ale nie dostarczaj etanolu podczas CS Plus.Aby zapewnić spójność, pompy są ładowane pustymi 20-mililitrowymi strzykawkami podłączonymi do komory za pomocą rurki niezawierającej etanolu. Wykonuj sesje wygaszania codziennie, aż szczury przestaną rozróżniać CS plus i minus. Może to zająć około ośmiu sesji, jak zawsze, wyczyść sprzęt w razie potrzeby Przed przystąpieniem do testu odnowienia.Istotne jest, aby w trakcie CS oraz na końcu szkolenia w zakresie wymierania nastąpiła znaczna redukcja liczby wejść do portów w porównaniu z początkiem. Test odnowy indukowanej kontekstem wykorzystuje tę samą konfigurację kontekstu komory, która była używana podczas treningu dyskryminacji Pawłowa, który jest innym kontekstem niż w przypadku treningu wygaszania. Ten jednosesyjny test jest wykonywany identycznie jak trening dyskryminacji Pawłowa, z tą różnicą, że nie jest dostarczany etanol, a strzykawki są puste.Użyj tego samego programu komputerowego do prezentacji bodźców słuchowych. Oczekiwanym rezultatem jest odnowienie zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu, które jest selektywne w stosunku do CS oraz wyczyszczenie sprzętu na koniec testu. Tak jak poprzednio, kiedy szczury miały okresowy przerywany dostęp do etanolu w swoich domowych klatkach, spożycie etanolu i preferencje dotyczące etanolu wzrosły do stabilnego poziomu po ośmiu do 12 sesjach treningowych.Podczas treningu dyskryminacji Pawłowa, reakcje na wejście do portu na CS plus wzrosły w trakcie sesji treningowych, nastąpił niewielki wzrost reakcji na CS minus, ale szczury nauczyły się rozróżniać między dwoma sygnałami słuchowymi podczas treningu wymierania, reakcje wejścia w port na CS plus stopniowo spadały, podczas gdy odpowiedzi na CS minus pozostały niskie. Kiedy szczury zostały przywrócone do kontekstu związanego z treningiem dyskryminacji Pawłowa, selektywny wzrost liczby wejść do portu nastąpił podczas CS plus w stosunku do wyników po treningu wymierania. Natomiast nie nastąpiła żadna zmiana w odpowiedzi na CS minus.Wyniki te pokazują, że zachowanie związane z poszukiwaniem alkoholu wywołane dyskretną wskazówką może być silnie modulowane przez kontekst środowiskowy. Podczas próby wykonania tej procedury ważne jest, aby badacz nie używał perfum, wód kolońskich ani innych produktów zapachowych. Szczury są stworzeniami o wysokim węchu, a sygnały węchowe związane z badaczem mogą być destrukcyjne dla zachowania w tym zadaniu Zgodnie z tą metodą można wykonać inne procedury, takie jak mikroinfuzje wewnątrzczaszkowe, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania, takie jak to, w jakie regiony mózgu są zaangażowane.Kontekst indukował odnowienie uwarunkowanego poszukiwania alkoholu przez Pawłowa.

a-procedure-to-observe-context-induced-renewal-pavlovian-conditioned

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Modele zwierzęce nawrotów, znane jako procedury reinstalacji, są szeroko wykorzystywane do badania roli stresu w nawrotach poszukiwania narkotyków. W niniejszym opracowaniu przedstawiamy metodę indukowania reinstalacji poszukiwania kokainy u szczurów laboratoryjnych poprzez krótkotrwałą ekspozycję na łagodne, przerywane wstrząsy elektryczne stóp.

Procedura badania reinstatmentu poszukiwania kokainy indukowanego wstrząsem stopy u szczurów laboratoryjnych

Reagowanie na sygnały powiązane z pokarmem lub lekiem nasila się w czasie okresu abstynencji, co może wiązać się ze zwiększoną podatnością na zachowania nawrotowe. W niniejszym materiale szczegółowo opisujemy procedurę oceny tej „inkubacji głodu” (ang. incubation of craving) u szczurów, które podawały sobie samodzielnie sacharozę.

Ogólna metoda oceny inkubacji głodu sacharozy u szczurów

Opisana jest procedura, która pozwala na demonstrację solidnego wspomagania poszukiwania narkotyków u szczurów z ograniczeniami żywieniowymi. Po szkoleniu w zakresie samodzielnego podawania heroiny, szczury przechodzą przez okres abstynencji w środowisku wolnym od narkotyków, podczas którego są łagodnie ograniczane w jedzeniu. Poszukiwanie narkotyków jest następnie testowane w środowisku związanym z narkotykami.

Procedura mająca na celu zbadanie wpływu długotrwałego ograniczenia pokarmowego na poszukiwanie heroiny u szczurów abstynentów

Ten protokół opisuje nowatorską i efektywną metodę szybkiego inicjowania reakcji instrumentalnej na etanol u szczurów, która, w przeciwieństwie do standardowych metod, nie wymaga pozbawienia wody ani zaniku sacharyny/sacharozy, aby zainicjować odpowiedź.

Metoda oceny wzmacniających właściwości etanolu u szczurów bez niedoboru wody, blaknięcia sacharyny lub szkolenia o przedłużonym dostępie

Tutaj prezentujemy protokół wywołujący u szczurów zachowania warunkowe oparte na podejściu Pawłowa. Procedura ta może być wykorzystana do pomiaru indywidualnych różnic w tendencji do zbliżania się i przypisywania istotności bodźców sygnałom związanym z nagrodą oraz badania podatności na uzależnienie.

Trening podejścia warunkowego Pawłowa u szczurów

Klasyczne warunkowanie (ECC) zostało użyte do oceny zależnego od hipokampa uczenia się asocjacyjnego u dorosłych szczurów, którym podawano wysokie stężenie (11,9% v/v) alkoholu podczas wczesnego rozwoju mózgu noworodka. Ogólnie rzecz biorąc, procedury ECC są solidnymi narzędziami diagnostycznymi do wykrywania dysfunkcji mózgu w wielu środowiskach psychologicznych i biomedycznych.

Zastosowanie klasycznego warunkowania śladowego mrugnięcia okiem do oceny dysfunkcji hipokampa w szczurzym modelu zaburzeń ze spektrum alkoholowych płodów

Ten manuskrypt opisuje procedurę odzyskiwania pamięci w celu destabilizacji solidnych wspomnień nagrody i przepisywania ich za pomocą przeciwwarunkowania przed ich ponownym utrwaleniem.

Procedura wyszukiwania oparta na błędach predykcyjnych do destabilizacji i ponownego zapisywania nieprzystosowawczych wspomnień nagrody u osób pijących niebezpiecznie

Ten protokół opisuje Preferencję Miejsca Warunkowego (CPP) jako model nawrotu. Procedura ta pozwala na pomiar nawrotu u zwierząt laboratoryjnych, biorąc pod uwagę wpływ sygnałów środowiskowych związanych z narkotykami, takich jak głód i nawrót u osób uzależnionych od abstynencji, jest obecnie przedmiotem programów leczenia uzależnień.

Przywrócenie poszukiwania narkotyków u myszy przy użyciu paradygmatu warunkowej preferencji miejsca

Tutaj opisany jest protokół preferencji miejsca uwarunkowanego morfiną (CPP) do pomiaru inkubacji głodu u szczurów.

Protokół warunkowej preferencji miejsca do pomiaru inkubacji łaknienia u szczurów

Opisana jest procedura, która wykazuje silny ostry nawrót do heroiny spowodowany brakiem jedzenia po nałożonej karze abstynencji. Model abstynencji narzuconej karą został z powodzeniem wdrożony przy użyciu harmonogramu łańcucha poszukiwania i zażywania do samodzielnego podawania heroiny. Testy na obecność heroiny są następnie wykonywane po 24 godzinach stresu związanego z deprywacją pokarmową.

Procedura badania nawrotów heroiny wywołanych stresem Poszukiwanie abstynencji nałożonej karą

Poznaj procedurę obserwacji odnowienia zachowań poszukiwania alkoholu u szczurów w warunkach pawlłowskich. Metoda wykorzystuje trening dyskryminacyjny z sygnałami dźwiękowymi i ekstynkcję w różnych kontekstach środowiskowych.

Procedura obserwacji wywołanego kontekstem odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa u szczurów (Wideo) | JoVE Journal

Procedura obserwacji wywołanego kontekstem odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa u szczurów

Przeglądaj więcej filmów