Prosty test do ilościowego oznaczania unikania społecznego u Drosophila melanogaster

Celem tej procedury jest ilościowe określenie reakcji much na sygnał społeczny emitowany przez zestresowane osobniki. Osiąga się to poprzez pierwsze zebranie, reakcję i emiter muchy nie później niż dwa dni przed eksperymentem. Drugim krokiem jest przeniesienie zarówno muchy emitera, jak i respondenta do świeżych fiolek na dwie godziny przed eksperymentem i pozwolenie im przyzwyczaić się do kontrolowanego środowiskowo pomieszczenia, w którym zostanie przeprowadzony test.

Następnie muchy reagujące są umieszczane w TMA i mają wybór między fiolką, w której muchy zostały wcześniej zestresowane, zawierającą w ten sposób środek zapachowy Drosophila stress odor, a świeżą fiolką, ostatnim krokiem jest policzenie liczby much reagujących w świeżej fiolce w fiolce DSO i w windzie w celu ilościowego określenia ich reakcji na DSO. Ostatecznie labirynt T służy do pomiaru unikania przez muchy sygnału stresu społecznego, w szczególności zapachu stresu gilo. Po raz pierwszy wpadłem na pomysł tej metody, gdy byłem na stażu podoktorskim w Caltech.

W tym czasie Greg Sue i jego adiunkt David Anderson zajmowali się badaniem strachu lub unikania kontaktów społecznych w Phyla, ale nie istniał żaden test na to. Skontaktowali się ze mną, ponieważ wykonywałem wiele testów behawioralnych w laboratorium marki S i podczas wykonywania eksperymentów z taksówką fotograficzną i uczeniem węchowym zauważyłem, że muchy były przyciągane do fiolek, w których inne muchy spędziły trochę niezakłóconego czasu, unikając fiolek, w których muchy były w tym czasie zestresowane porażeniem prądem. Biskup. Demonstracja tej metody ma kluczowe znaczenie, ponieważ eksperymentalny proces testu unikania społecznego wymaga pewnej praktyki, aby być szybkim i skutecznym w przenoszeniu biosu bez utraty much lub DSL.

Główną zaletą tej techniki badania interakcji społecznych w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak wspomagane komputerowo śledzenie wideo, jest to, że jest to test łatwy do opanowania i wdrożenia, ale bardzo skuteczny w ilościowym określaniu unikania społecznego przez osoby zestresowane. Aby rozpocząć eksperyment, wytnij porowaty arkusz polietylenu, aby pokryć pudełko o wymiarach 12,7 cm na 10,2 cm. Napełnij pudełko pokruszonym lodem i przykryj je arkuszem, aby uzupełnić aparat do znieczulenia na zimno Drosophila.

Eksperyment przeprowadź na ławce przykrytej białym pokrowcem na ławkę i tablicą suchościeralną z przodu, aby zapewnić jednorodne warunki oświetleniowe. Następnie przygotuj aparat kolegów z drużyny aspiratora muchy wirowej, termometr i minutnik. Jeden do dwóch dni przed eksperymentem znieczulenie jelita grubego muchy.

Przenieś muchy za pomocą lejka do 50-mililitrowej rurki i umieść rurkę w izolowanym wiadrze na lód pod poziomem lodu. Poczekaj pięć minut, aż muchy zapadną w chłodną śpiączkę. Następnie przenieś muchy na porowaty arkusz polietylenu w temperaturze pokojowej i posortuj muchy ratownicze pod mikroskopem stereoskopowym.

Oddziel trzy- do siedmiodniowych samców much od samic much i utrzymuj je w grupie 40 delikatnie zbierających muchy emiterowe Canton o mieszanej płci. Za pomocą aspiratora do ust pozwól muchom. Jedna noc rekonwalescencji, aby zminimalizować mylący wpływ kolekcji na zachowanie.

Następnie otwórz torbę z fiolkami testowymi, aby zastąpić stęchłe plastikowe powietrze w torbie świeżym powietrzem. Przed eksperymentem upewnij się, że temperatura w pomieszczeniu testowym wynosi 25 stopni Celsjusza, że w pomieszczeniu jest równomiernie oświetlone, a wilgotność jest większa niż 30%Dwie godziny przed eksperymentem przenieś muchy odpowiadające i emitujące do fiolek ze świeżą żywnością i pozwól muchom dostosować się do środowiska na stole, na którym zostanie przeprowadzony eksperyment. Umieść labirynt herbaciany na podkładce do ubijania i dokręć zacisk śrubowy, aby winda była stabilna.

Następnie przenieś muchy z odpowiedzią na test do świeżej fiolki testowej i zatrzaśnij fiolkę zawierającą muchy z odpowiedzią na labirynt herbaty. Następnie pochyl urządzenie do labiryntu herbacianego i postukaj nim w matę do, aby muszki owocówki wpadły do windy. Przesuń górną część windy w dół, aby umieścić muchy między górną a dolną sekcją TMA i upewnij się, że winda znajduje się powyżej wybranego punktu, aby zapobiec ucieczce much, podczas gdy muchy reagujące dostosowują się do nowego środowiska.

Umieść muchy emiterowe w świeżej fiolce testowej i przykryj ją kawałkiem bawełny. W ten sposób należy zamieszać fiolkę na mini wirze. Muchy będą emitować DSO, przenoszą muchy do fiolki z jedzeniem i szybko umieszczają fiolkę wypełnioną DSO po jednej z dwóch stron zespołu.

Alternatywna strona umieszczenia dla fiolki wypełnionej DSO. W każdym nowym przebiegu umieść świeżą fiolkę testową po drugiej stronie zespołu A, a następnie całkowicie opuść windę, aby muszki owocówki mogły wybrać między świeżą fiolką testową a fiolką wypełnioną DSO. Natychmiast uruchom timer.

Po jednej minucie przesuń windę w górę, aby oddzielić muchy w świeżej fiolce i fiolce DSO od much utkniętych w windzie. Policz liczbę much w każdej fiolce i w windzie. Powtórz to.

Dla każdego genotypu i/lub schorzenia, wielkość grupy muchówek reagujących nie ma wpływu na unikanie przez nie DSO. Po przeprowadzeniu eksperymentu na zakresie od 10 do 80 much, test T nie wykazał istotności statystycznej wśród wskaźników wydajności lub PI muszek odpowiadających. Liczba much emitujących wpływa na unikanie much przez DSO, jak pokazano na tym wykresie, który przedstawia różne próby.

Używając od 10 do 160 emiterów każdy. Nadal wykrywano znaczne unikanie tylko u 10 zestresowanych much. Wybór, czas i tło genetyczne muszek owocowych wpływają na odpowiedź na DSO, jak pokazano na tym wykresie, który ilustruje reakcję szczepów Canton i Elwood.

Oba genotypy wykazują silniejsze unikanie DSO niż Oregon i niektóre szczepy markin po jego rozwoju. Technika ta utorowała drogę naukowcom z dziedziny neurobiologii do zidentyfikowania obwodu nerwowego leżącego u podstaw percepcji i unikania CO2, jednego ze składników DSO. Wykorzystano go również do badania roli genów kandydujących na autyzm w wpływaniu na zachowania społeczne.

W Joseph Ano Gaster. Po opanowaniu technikę tę można wykonać w czasie krótszym niż pięć minut na powtórzenie. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak przeprowadzić test unikania kontaktów społecznych, począwszy od przygotowania emitera i muchy reagującego przed ich przetestowaniem, aż po wygenerowanie biografii pola DSL i manipulację kolegami z drużyny, aby zapewnić ratownikom wybór binarny.